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Cre重组酶结构与功能的研究进展

生物工程学报 2002年第5期18卷 532-535页

作者：王立霞王勇胡鸢雷高音林忠平北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871

Cre loxp定位重组系统来源于噬菌体P1 ,由Cre重组酶和loxp位点两部分组成。在Cre重组酶的介导下 ,设定的DNA片段可以被切除 ,可以发生倒位 ,亦可造成定点的整合。由于其作用方式高效简单 ,Cre loxp定位重组系统已在特定基因的删除、基... 详细信息

Cre loxp定位重组系统来源于噬菌体P1 ,由Cre重组酶和loxp位点两部分组成。在Cre重组酶的介导下 ,设定的DNA片段可以被切除 ,可以发生倒位 ,亦可造成定点的整合。由于其作用方式高效简单 ,Cre loxp定位重组系统已在特定基因的删除、基因功能的鉴定、外源基因的整合、基因捕获及染色体工程等方面得到了有效的利用 ,在转基因的酵母、植物、昆虫、哺乳动物的体内外DNA重组方面成为一个有力的工具。这里就Cre重组酶的结构。

关键词： Cre重组酶结构功能研究进展 loxp位点定位重组

表达GFP基因的马立克氏病病毒(MDV)转移载体的构建及初步应用

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 11-16页

作者：邱亚峰葛菲菲张雪莲陈溥言南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

利用Primerprimer5.0软件设计两条引物,将loxp位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRESgpt为模板,扩增获得loxpCMVgptIRESloxp基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDVUS10区)的BalI位点,获得重组质粒pUSgptIRES(L);对重组质粒pUSgptIRES(L)进行测序分析,发现两同向的loxp位点正确插入到pUSgptIRES(L)中;将含有完整的GFP基因以及polyA尾的基因片段,连入pUSgptIRES(L)中,把gpt基因替换掉,从而获得重组质粒pUSGFPIRES(L)。将转移载体pUSGFPIRES(L)瞬时转染CHO细胞,可以观察到绿色荧光,说明GFP基因获得有效表达;将pUSGFPIRES(L)转染已感染MDVCVI988株的CEF细胞,可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒;通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线,发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合。为进一步探讨MDV在体内的特性奠定基础,同时,为Cre/loxp重组酶系统在MDV中的应用奠定基础。

关键词：马立克氏病病毒绿色荧光蛋白 loxp位点重组病毒

Cre/lox位点特异重组系统在转基因植物中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第2期26卷 95-103页

作者：赵妍余涛邢少辰吉林农业大学生命科学学院长春130118 吉林省农业科学院生物技术研究中心长春130033

位点特异重组系统由重组酶和相应的重组酶识别位点组成,通过两者间的相互作用,实现外源基因精确整合与切除等一系列遗传操作.主要可分为Cre/lox系统、FLP/frt系统、R/RS系统和Gin/gix系统.目前,研究最充分应用最广泛的位点特异重组系统... 详细信息

位点特异重组系统由重组酶和相应的重组酶识别位点组成,通过两者间的相互作用,实现外源基因精确整合与切除等一系列遗传操作.主要可分为Cre/lox系统、FLP/frt系统、R/RS系统和Gin/gix系统.目前,研究最充分应用最广泛的位点特异重组系统为Cre/lox系统.此系统为位点特异重组系统家族中的一员,由38.5kDCre重组酶和34bplox位点组成,最早被应用于动物转基因研究,包括基因敲除、基因激活、基因易位等.近年来,随着研究的深入,Cre/lox系统被逐步应用到植物研究中,并在诸多领域取得重大进展.本文总结归纳了Cre/lox系统在定点整合、定点切除以及叶绿体转化等方面的最新研究成果,旨在为利用Cre/lox系统构建环境安全和高效表达的植物遗传转化体系提供参考.

关键词： Cre重组酶 loxp位点位点特异重组转基因植物

Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究

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北京大学学报（自然科学版） 2001年第4期37卷 477-482页

作者：甄伟汪阳明丁伟陈溪胡鸢雷林忠平北京大学蛋白质及植物基因工程国家重点实验室

对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxp位点的 (loxp p35S GUS loxp)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS... 详细信息

对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxp位点的 (loxp p35S GUS loxp)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS基因的活性分析、分子检测、PCR检测及对重组后扩增DNA片段进行序列分析表明 :Cre loxp重组系统在转基因烟草中能精确高效地介导转基因的删除 ,但也存在部分植株不能完全删除的现象。

关键词： Cre-loxp重组系统转基因烟草共转化 GUS活性分析不完全删除重组效率 loxp位点

基于Cre/loxp系统Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶转基因小鼠的建立

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实验动物科学 2011年第2期28卷 1-6,I0001,I0002页

作者：张淑静江其辉卢清君王宁利陈振文卢清显首都医科大学基础医学院实验动物学系北京100069 军事医学科学院实验动物中心北京100071 首都医科大学附属北京同仁医院北京100730

目的采用大肠杆菌β-半乳糖酶基因LacZ作为报告基因,建立Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶含有loxp位点的转基因小鼠。与不同组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空性表达Tyro3、Axl的转基因小鼠,为研究其在各个组织中的功能奠定基础。方法构建含有l... 详细信息

目的采用大肠杆菌β-半乳糖酶基因LacZ作为报告基因,建立Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶含有loxp位点的转基因小鼠。与不同组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空性表达Tyro3、Axl的转基因小鼠,为研究其在各个组织中的功能奠定基础。方法构建含有loxp位点的Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶质粒,测序正确后,通过显微注射法将插入CAG启动子下游的Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3基因的转基因载体注射入BDF1供体鼠受精卵,移植受精卵至ICR受体鼠,待产仔后,通过双引物PCR鉴定F0以及Fn代小鼠的基因型,RT-PCR,X-gal染色观察小鼠组织中LacZ基因,运用WB(Western Blot)检测转基因小鼠和野生型小鼠体内目的蛋白表达的差异。结果获得了含有目的基因的转基因阳性小鼠;通过RT-PCR对阳性小鼠证明LacZ基因的存在;对存在LacZ基因的小鼠进行X-gal染色,在Geo-STOP-msTyro3的脑、睾丸、胸腺中观察到蓝色沉淀,在Geo-STOP-msAxl的脑、心、肾中观察到蓝色沉淀,间接说明目的基因能表达的组织和器官;对双阳性的Geo-STOP-msTyro3、Geo-STOP-msAxl转基因小鼠和野生型小鼠,WB检验证实Tyro3、Axl基因的表达没有差异,说明在加入stop序列之后,Tyro3基因确实存在,而且表达受到抑制。结论成功建立Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3酪氨酸受体转基因小鼠。

关键词： Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶 loxp位点 X-gal染色

Cre-loxp系统的构建及在牙釉质发育中的应用

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中外医学研究 2016年第11期14卷 160-162页

作者：褚青高玉光滨州医学院附属医院山东滨州256600

Cre-loxp系统是近年来广泛应用在各领域的重组酶系统。该系统由组织特异性重组酶cre和loxp位点组成。可以通过对特定的DNA序列进行准确的切割及连接,达到在基因水平上对生物体进行定向遗传改造的目的。牙釉质的发育离不开各种转录因子... 详细信息

Cre-loxp系统是近年来广泛应用在各领域的重组酶系统。该系统由组织特异性重组酶cre和loxp位点组成。可以通过对特定的DNA序列进行准确的切割及连接,达到在基因水平上对生物体进行定向遗传改造的目的。牙釉质的发育离不开各种转录因子的作用,利用该系统对各转录因子的缺失或突变的研究,探讨特定时间、特定部位目的基因的异常改变对牙釉质发育的影响。

关键词： Cre-loxp系统 loxp位点重组酶cre 转录因子

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Cre/loxp系统的应用及进展

广州医学院学报 2008年第2期36卷 78-80页

作者：任荣荣王英伟上海交通大学医学院附属新华医院麻醉科上海200092

随着分子生物学的迅猛发展，转基因技术发挥着越来越重要的作用，已经渗透到人类生活的各个领域。所谓转基因技术就是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达从而引起生物体性状可遗传的修饰。转基因技术推... 详细信息

随着分子生物学的迅猛发展，转基因技术发挥着越来越重要的作用，已经渗透到人类生活的各个领域。所谓转基因技术就是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达从而引起生物体性状可遗传的修饰。转基因技术推动了从分子水平了解生命现象、探讨生命本质、研究疾病发生机理等方面的发展。国内外在动物转基因技术方面均已开展了卓有成效的工作。其中小鼠转基因研究方面成就最大、发展最为迅速、应用最为广泛的就是应用Cre／loxp系统对小鼠进行基因的敲除、激活、倒转和易位等。

关键词： Cre重组酶 loxp位点转基因技术 Cre/loxp系统

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利用Cre蛋白质转导重组酶诱导DNA重组

中国畜牧兽医 2003年第2期30卷 45-45页

作者： SunilK.Joshi 曹洪战

Cre是一种可以识别34个碱基对重组loxp位点的DNA重组酶。我们开发了一种可以渗透细胞的Cre重组酶一TAT Cre，把它简单地加入细胞培养中就能够调剂敲除loxp位点的侧翼靶位。因此，TAT Cre可以有效地诱导DNA重组，而不必利用Cre重组酶转... 详细信息

Cre是一种可以识别34个碱基对重组loxp位点的DNA重组酶。我们开发了一种可以渗透细胞的Cre重组酶一TAT Cre，把它简单地加入细胞培养中就能够调剂敲除loxp位点的侧翼靶位。因此，TAT Cre可以有效地诱导DNA重组，而不必利用Cre重组酶转基因或其它的遗传材料。这对于大量设计有loxp位点细胞的遗传调控将大有益处。

关键词： DNA重组 Cre重组酶 TAT 蛋白质转导基因敲除遗传调控 loxp位点