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LncRNA GAS5抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化在肝癌进展中的作用研究

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作者：罗礼炳南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨gas5抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)向M2型极化进而影响肝癌发展进程的作用研究。方法:收集28例来我院行肝切除术的肝癌患者的肝癌组织及癌旁组织,免疫组化检测肿瘤组织中TAMs的浸润。分离外周血单核细胞(PBMCs),并分别诱导分化... 详细信息

目的:探讨gas5抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)向M2型极化进而影响肝癌发展进程的作用研究。方法:收集28例来我院行肝切除术的肝癌患者的肝癌组织及癌旁组织,免疫组化检测肿瘤组织中TAMs的浸润。分离外周血单核细胞(PBMCs),并分别诱导分化不同表型的巨噬细胞(即M0、M1、M2和TAMs),ELISA检测巨噬细胞分泌标志物的表达含量。不同表型的四组巨噬细胞与肝癌细胞共培养,MTT检测肝癌细胞增殖。构建gas5过表达质粒及干扰序列,分别转染TAMs,收集TAMs与肝癌细胞共培养,分析过表达/干扰gas5对TAMs极化的作用,以及TAMs过表达/干扰gas5对肝癌细胞增殖功能的影响。最后,构建过表达gas5慢病毒并转染TAMs,采用TAMs与肝癌细胞混悬液建立异种移植瘤小鼠模型,检测肿瘤体积及重量。结果:与癌旁组织相比,肿瘤组织中TAMs大量聚集。不同表型的巨噬细胞与肝癌细胞共培养,发现与M0巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞和TAMs均可以促进肝癌细胞增殖。此外,过表达gas5抑制TAMs向M2型分化。与TAMs中干扰gas5相比,过表达gas5的TAMs明显的抑制了肝癌细胞增殖。进一步体内实验证实,过表达gas5的TAMs可以抑制小鼠移植瘤的生长。结论:gas5在肝癌TAMs中表达下调,TAMs中过表达gas5可抑制TAMs向M2型极化,进而抑制肝癌的生长。

关键词： lncrna gas5 肝癌肿瘤相关巨噬细胞 M2极化

lncrna gas5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用

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LncRNA GAS5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用

作者：韦美理右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:研究lncrna gas5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用,为寻找修复足细胞损伤的新策略提供科学依据和理论基础。方法:(1)根据不同时间及浓度的TGF-β1处理将细胞进行以下分组:正常对照组;24h TGF-β1处理组;48h TGF-β1处理... 详细信息

目的:研究lncrna gas5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用,为寻找修复足细胞损伤的新策略提供科学依据和理论基础。方法:(1)根据不同时间及浓度的TGF-β1处理将细胞进行以下分组:正常对照组;24h TGF-β1处理组;48h TGF-β1处理组;72h TGF-β1处理组;4ng/ml TGF-β1处理组;8ng/ml TGF-β1处理组;12ng/ml TGF-β1处理组。采用RT-q PCR法检测Synaptopodin mRNA、CD2AP mRNA及lncrna gas5的表达情况。(2)将lncrna gas5过表达载体及低表达载体转染正常足细胞并进行分组:正常对照组;si-gas5组;si-NC组;gas5组;pc DNA组;采用RT-q PCR法验证lncrna gas5的转染效率并检测Synapt opodinmRNA和CD2AP mRNA的表达情况。(3)将lncrna gas5过表达载体及低表达载体转染TGF-β1诱导的足细胞并进行分组:正常对照组;TGF-β1处理组;TGF-β1+si-gas5组;TGF-β1+si-NC组;TGF-β1+gas5组;TGF-β1+pc DNA组。采用RT-q P CR法验证lncrna gas5转染效率,联合RT-q PCR法和Western blot法检测Synapto podin、CD2AP的mRNA和蛋白的表达情况。结果:(1)将各实验组与正常对照组进行对比,8ng/ml TGF-β1处理组、12ng/ml TGF-β1处理组、48h TGF-β1处理组、72h TGF-β1处理组中SynaptopodinmRNA、CD2AP mRNA及lncrna gas5表达降低(P5)。(2)将各实验组与正常对照组进行比较,si-gas5组lncrna gas5表达较正常对照组降低,而gas5组lncrna gas5表达升高,si-gas5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA表达均降低,gas5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA表达均升高,差异均有统计学意义(P5)。(3)与正常对照组相比,TGF-β1+si-gas5组、TGF-β1+si-NC组、TGF-β1+pc DNA组中Synaptopodin及CD2AP的mRNA和蛋白表达均降低,TGF-β1+gas5组SynaptopodinmRNA、CD2AP mRNA及Synaptopodin蛋白表达均上升(Pgas5组CD2AP蛋白表达未见明显改变。(4)与TGF-β1处理组相比,TGF-β1+si-gas5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA和蛋白表达均降低,TGF-β1+gas5组Synaptopodin、CD2AP的mRNA及蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P5)。结论:(1)TGF-β1可通过下调Synaptopodin、CD2AP和lncrna gas5的表达而诱导足细胞损伤;在一定范围内,TGF-β1的浓度越高、作用时间越久则损伤程度越重;lncrna gas5可能参与TGF-β1诱导的足细胞损伤。(2)lncrna gas5与足细胞损伤密切相关,低表达lncrna gas5可通过下调Synaptopodin、CD2AP表达来加重TGF-β1诱导足细胞损伤的程度,而过表达lncrna gas5可逆转这一作用。

关键词：足细胞 lncrna gas5 TGF-β1

lncrna gas5通过miR-18a-5p/AXIN2/GSK3β轴抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

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LncRNA GAS5通过miR-18a-5p/AXIN2/GSK3β轴抑制膀胱癌细胞的增殖...

作者：张泽皖南医学院

学位级别：硕士

目的:（1）通过qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌中的表达情况。（2）通过平板克隆实验和EdU实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（3）通过transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌... 详细信息

目的:（1）通过qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌中的表达情况。（2）通过平板克隆实验和EdU实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（3）通过transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。（4）探究lncrna gas5与miR-18a-5p之间的调控关系。（5）探究miR-18a-5p调控膀胱癌增殖能力和迁移能力的下游途径。方法:（1）使用EdU实验和平板克隆形成实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（2）使用Transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。（3）qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达情况。（4）使用核质分离实验和荧光原位杂交（FISH）试验,以检测lncrna gas5在细胞中的定位。（5）使用Ch Irp,RNA免疫沉淀（RIP）和双荧光素酶试验来确定gas5与miR-18a-5p的结合以及miR-18a-5p与AXIN2和GSK3β的结合。（6）蛋白印迹技术和免疫组化用于检测蛋白质水平的变化。结果:（1）与正常粘膜组织和正常膀胱上皮细胞相比,lncrna gas5在膀胱癌组织和细胞中的表达明显下调,而miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达明显上调。（2）核质分离实验和荧光原位杂交（FISH）试验结果显示lncrna gas5主要分布在细胞质中,表明lncrna gas5的主要是通过ce RNA机制调控膀胱癌的发生发展。（3）过表达lncrna gas5后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制,而干扰lncrna gas5表达后,膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加。表明lncrna gas5在膀胱癌中是抑癌基因。（4）通过Ch Irp,RNA免疫沉淀（RIP）和荧光素酶试验表明:lncrna gas5可以与miR-18a-5p靶向结合。（5）过表达miR-18a-5p后膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加,而干扰miR-18a-5p表达后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制。表明miR-18a-5p在膀胱癌中是促癌基因。（6）荧光素酶实验结果表明,miR-18a-5p可以靶向结合AXIN2和GSK3β。（7）逆转实验结果显示,过表达lncrna gas5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。（8）裸鼠成瘤实验证明在体内过表达lncrna gas5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。结论:（1）lncrna gas5作为抑癌基因可以抑制膀胱癌增殖迁移。（2）miR-18a-5p作为促癌基因可以促进膀胱癌增殖迁移。（3）lncrna gas5可以靶向miR-18a-5p进而调控膀胱癌的增殖能力和迁移能力。（4）miR-18a-5p可以同时与AXIN2和GSK3β靶向结合从而调控Wnt通路的活性,进而调节膀胱癌增殖迁移能力。（5）lncrna gas5有望成为膀胱癌的的分子标志物,为治疗膀胱癌提供了一种新的潜在治疗策略。

关键词： lncrna gas5 miR-18a-5p 膀胱癌增殖和迁移

lncrna gas5靶向miR-223-3p/NLRP3轴调控冠状动脉微栓塞致心肌损伤的机制研究

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LncRNA GAS5靶向miR-223-3p/NLRP3轴调控冠状动脉微栓塞致心肌损...

作者：李涛广西医科大学

学位级别：硕士

冠状动脉微栓塞(Coronary Microembolization,CME)是急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome,ACS)患者冠状动脉粥样硬化斑块自发破裂,或者经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous Coronary Intervention,PCI)过程中器械挤压斑块后形成的斑块碎片脱落并随血液流至冠脉微循环所致。CME常导致冠脉微循环障碍,是临床常见并发症之一。CME可引起冠脉“无复流”或“慢血流”,最终导致冠脉血流储备减少、心肌收缩功能减退、心肌损伤等严重影响患者预后的不良后果。因此,深入研究冠状动脉微栓塞致心肌损伤的具体机制,可以为临床上治疗CME提供新的思路。细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是近年才被提出的研究热点之一,是一种由炎症小体介导的程序性细胞死亡方式。细胞焦亡的发生与各类炎症小体的激活密切相关,其中,由NLRP3炎症小体活化介导的细胞焦亡在多种心血管疾病的发生发展中起非常重要的作用。我们团队以往的动物研究表明,冠状动脉微栓塞后心肌损伤的关键因素之一是心肌局部炎症反应,并进一步研究发现,在CME心肌组织中NLRP3炎症小体显著激活,焦亡相关蛋白表达水平显著升高。使用特异性抑制剂抑制NLRP3炎症小体的激活可以减轻CME所致的心肌局部炎症反应和细胞焦亡,从而减轻心肌组织损伤,并改善心功能。因此,NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡很可能成为临床上CME预防和治疗的新思路。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncrna)是一类在真核生物中发现的长度超过200 nt的非编码RNA分子,广泛存在于组织和细胞中,作用广泛,机制复杂,可在转录前、转录、转录后以及表观遗传等多个层面调控基因表达,参与重要的生物学进程。目前许多研究证实,lncrna与人类疾病的发生发展密切相关,包括参与高血压、心肌肥厚、冠状动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤在内的众多心血管疾病的发生发展过程。然而,lncrna在CME致心肌损伤中的作用及机制的相关研究鲜有报道。我们团队前期在大鼠冠状动脉微栓塞心肌组织的lncrna芯片检测中发现,长链非编码RNA生长阻滞特异性转录本5(Growth Arrest-Specific transcript5,gas5)表达明显上调,但尚未见报道lncrna gas5是否对CME致心肌损伤有调控作用。本研究通过建立大鼠CME模型以及体外LPS刺激的H9C2心肌细胞炎症损伤模型,从体内和体外两个层面,运用组织学和分子生物学实验技术等研究方法,首次在组织、细胞、分子水平探究了lncrna gas5在CME致心肌损伤过程中所起的作用及调控机制,有望更深入理解CME的发生发展过程以及具体分子机制,为临床冠脉微栓塞的预防和治疗提供新思路、新靶点。第一部分lncrna gas5在冠状动脉微栓塞心肌组织中的表达变化目的:建立SD大鼠CME模型,体外培养H9C2心肌细胞构建LPS体外炎症损伤模型,观察在大鼠CME模型以及LPS体外炎症损伤模型中lncrna gas5的表达特征。方法:(1)体内实验:将16只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和冠状动脉微栓塞组(CME组),每组8只。CME组大鼠通过夹闭升主动脉的同时经左心室注射45μm微栓塞球来建立CME模型,Sham组则用等体积生理盐水代替。手术建模12小时后取左心室心肌组织。采用HE染色观察心肌组织病理改变,透射电镜观察心肌组织超微结构,q RT-PCR检测心肌组织lncrna gas5的相对表达量。(2)体外实验:通过LPS刺激H9C2细胞体外模拟心肌炎症损伤,将正常培养的H9C2心肌细胞随机分为对照组(Control组)和LPS刺激组(LPS组)。将LPS以10μg/ml剂量加入H9C2心肌细胞培养基中,与培养基充分混匀,通过与心肌细胞共同孵育12小时构建LPS体外炎症损伤模型。q RT-PCR检测H9C2心肌细胞lncrna gas5的相对表达量。(3)采用核质分离实验和荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)对lncrna gas5进行亚细胞定位。结果:(1)与Sham组相比,CME组大鼠心肌组织HE染色可见微动脉内有微栓塞球,微栓塞球周围可见心肌组织出现微梗死,微梗死灶周围伴大量炎症细胞浸润。透射电镜可观察到CME后心肌细胞内线粒体肿胀及空泡化,线粒体嵴断裂、消失。上述结果表明大鼠CME后出现心肌组织损伤,大鼠CME模型建立成功。(2)通过核质分离和FISH实验结果表明lncrna gas5主要定位在细胞质中。(3)q RT-PCR及FISH结果显示:lncrna gas5在大鼠CME心肌组织中表达显著升高(P<0.05),

关键词：冠状动脉微栓塞 lncrna gas5 miR-223-3p NLRP3 细胞焦亡

lncrna gas5通过调控miR-135b-5p影响宫颈癌Hela细胞EMT和迁移的实验研究

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LncRNA GAS5通过调控miR-135b-5p影响宫颈癌Hela细胞EMT和迁移的...

作者：黄桢三峡大学

学位级别：硕士

目的:探讨lnc RNA gas5对mi R-135b-5p的调节作用及其在宫颈癌Hela细胞EMT和迁移过程中的作用。方法:（1）Lnc RNA gas5影响宫颈癌Hela细胞EMT的发生及迁移能力的实验研究:实时定量q RT-PCR技术分析Lnc RNA gas5在人永生化表皮细胞Haca... 详细信息

目的:探讨lnc RNA gas5对mi R-135b-5p的调节作用及其在宫颈癌Hela细胞EMT和迁移过程中的作用。方法:（1）Lnc RNA gas5影响宫颈癌Hela细胞EMT的发生及迁移能力的实验研究:实时定量q RT-PCR技术分析Lnc RNA gas5在人永生化表皮细胞Hacat和宫颈癌Hela细胞中的表达差异;构建pc DNA3.1 gas5真核表达质粒,Western Blot和q RT-PCR检测EMT相关蛋白E-cad、N-cad、vimentin表达水平的改变;Transwell技术检测Lnc RNA gas5高表达对Hela细胞迁移能力的影响。（2）Lnc RNA gas5通过调控mi R-135b-5p的表达影响宫颈癌Hela细胞EMT的改变:Star Base v2.0数据库查找与Lnc RNA gas5相关的mi RNA,生物信息学聚类分析与EMT及迁移密切相关的mi RNA,筛选得到mi R-135b-5p;q RT-PCR检测pc DNA3.1 gas5转染后mi R-135b-5p的表达水平,荧光素酶报告系统检测pc DNA3.1 gas5对mi R-135b-5p的调控。分别转染mi R-135b-5p mimic或mi R-135b-5p NC至Hela细胞中,Western Blot和q RT-PCR检测分析EMT相关蛋白E-cad、N-cad、vimentin表达水平的改变;Transwell技术检测mi R-135b-5p对Hela细胞迁移能力的影响;Lnc RNA gas5和mi R-135b-5p共转染Hela细胞,Western Blot检测Lnc RNA gas5对mi R-135b-5p促进Hela细胞EMT的逆转作用。（3）筛选mi R-135b-5p的相关下游靶基因:检索mi R-135b-5p成熟序列数据库（Target Scan、mi RDB、Mirtarbase）,下载其全部靶基因,选择与EMT最为相关的基因作为后续的研究对象,荧光素酶报告基因确定mi R-135b-5p对靶基因的调控作用,Western Blot和q RT-PCR验证Lnc RNA gas5/mi R-135b-5p/下游靶基因调控通路。结果:（1）Hela中的Lnc RNA gas5的表达水平显著低于Hacat细胞,与对照组相比,当Lnc RNA gas5上调时,E-cad的m RNA水平和蛋白水平显著增高、而N-cad和Vimentin显著降低。Transwell结果显示与对照组相比,过表达Lnc RNA gas5后Hela细胞的迁移能力明显降低。（2）成功筛选出受Lnc RNA gas5调控的mi RNA—mi R-135b-5p,Lnc RNA gas5高表达可显著下调mi R-135b-5p的表达,野生型mi R-135b-5p荧光素酶报告基因的荧光素酶活性明显低于对照组,而突变型荧光素报告基因的荧光素酶活性与对照组相比无明显变化。（3）与对照组相比,mi R-135b-5p高表达时EMT相关蛋白E-cad的m RNA水平和蛋白水平显著降低,而N-cad和Vimentin显著增高。Lnc RNA gas5可以部分逆转mi R-135b-5p的促EMT作用;（4）成功筛选出mi R-135b-5p下游靶基因—LATS2和KLF4,高表达mi R-135b-5p时,KLF4显著下调,而LATS2部分上调。Lnc RNA gas5高表达时,KLF4的表达水平下调。结论:Lnc RNA gas5可以抑制宫颈癌Hela细胞EMT的发生发展,降低其迁移能力。Lnc RNA gas5抑制mi R-135b-5p并进一步使其下游靶基因KLF4的表达上调是其的调节机制之一。

关键词： lncrna gas5 miR-135b-5p 宫颈癌上皮间质转化迁移

lncrna gas5对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的作用研究

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lncRNA GAS5对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的作用研究

作者：李贵林四川农业大学

学位级别：硕士

Lnc RNAs是一类在真核生物中发现的不具备编码蛋白潜能、长度大于200 nt、没有长开放阅读框但往往具有m RNA结构特征的内源RNA,能够通过多种方式来调节基因的表达。其中,作为最主要的调控方式之一,lnc RNA能够通过海绵效应来吸附mi RNA... 详细信息

Lnc RNAs是一类在真核生物中发现的不具备编码蛋白潜能、长度大于200 nt、没有长开放阅读框但往往具有m RNA结构特征的内源RNA,能够通过多种方式来调节基因的表达。其中,作为最主要的调控方式之一,lnc RNA能够通过海绵效应来吸附mi RNA进而调控下游信号通路。本研究用pc DNA3.1-gas5重组载体、人工合成的si RNAs、mi RNA Mimics和Inhibitors分别转染3T3-L1细胞,在细胞增殖分化过程中分别过表达/抑制lnc RNA gas5和mi R-21a-5p。通过CCK-8试剂盒和Ed U染色检测lnc RNA gas5对细胞的增殖的影响,用油红O染色检测细胞内脂滴的聚积和甘油三酯的含量,q PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中脂肪分化的关键基因以及脂肪酸合成基因的m RNA和蛋白水平的表达变化,通过靶基因预测以及双荧光素酶报告系统检测mi R-21a-5p的靶基因,挖掘lnc RNA gas5作用3T3-L1细胞增殖和分化的具体通路,以期进一步揭示lnc RNAs在脂肪形成过程中的调控作用,为肥胖相关疾病的治疗和改善动物生产性能提供基础资料。本研究主要结果如下:(1)lnc RNA gas5在4周龄小鼠的心脏、肌肉和脂肪中呈现出相对高表达;在3T3-L1细胞培养中,细胞接触抑制和血清饥饿应激能够诱导lnc RNA gas5的表达。(2)转染pc DNA3.1-gas5和mi R-21a-5p Mimics能够分别显著地上调细胞内lnc RNA gas5和mi R-21a-5p的表达水平(Pgas5-1/2/3和mi R-21a-5p Inhibitors能够分别显著地下调细胞内lnc RNA gas5和mi R-21a-5p的表达水平(Pgas5和mi R-21a-5p能够相互抑制,并且它们在3T3-L1小鼠前脂肪细胞的分化过程中呈现出相反的表达模式。(4)通过CCK-8试剂盒Ed U染色技术,本试验发现过表达lnc RNA gas5能够抑制3T3-L1细胞的增殖,促进其凋亡;而敲降lnc RNA gas5对细胞增殖的影响并不显著。(5)在3T3-L1细胞成脂分化过程中,过表达lnc RNA gas5能显著抑制细胞内脂滴的聚积,降低甘油三酯的含量(P5),分化标志基因PPARγ、FAS、FABP4和LPL的m RNA水平显著下降(P5),且PPARγ和FABP4蛋白水平也显著降低(P5)。(6)利用生物信息学分析和双荧光素酶报告系统验证,本试验发现mi R-21a-5p能够分别靶向lnc RNA gas5和PTEN 3’UTR区而显著下调相对荧光素酶活性(Pgas5组中,细胞内PTEN的m RNA和蛋白水平均显著上调了(P5);而过表达mi R-21a-5p组中,细胞内PTEN的m RNA和蛋白水平均显著下调了(P5)。综上所述,本研究发现lnc RNA gas5能够通过海绵效应吸附细胞内源的mi R-21a-5p来间接地促进基因PTEN的表达从而抑制3T3-L1细胞的增殖和成脂分化。

关键词： lncrna gas5 miR-21a-5p 3T3-L1前脂肪细胞 PTEN 细胞增殖成脂分化

lncrna gas5对肺腺癌顺铂耐药性的作用研究

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LncRNA GAS5对肺腺癌顺铂耐药性的作用研究

作者：黄彩霞右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)生长阻滞特异性转录因子5(gas5)对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响和调控机制。方法:(1)A549、A549/DDP细胞各分为Control、LV-sg-NC、LV-sg-Lnc RNA gas5三组,待质粒转染48h后,再给药(DDP 30μg/m L)处... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)生长阻滞特异性转录因子5(gas5)对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响和调控机制。方法:(1)A549、A549/DDP细胞各分为Control、LV-sg-NC、LV-sg-Lnc RNA gas5三组,待质粒转染48h后,再给药(DDP 30μg/m L)处理24 h,通过q RT-PCR实验技术定量检测转染sg-Lnc RNA gas5病毒后A549、A549/DDP细胞lnc RNA gas5的表达量。(2)采用CCK-8法检测A549、A549/DDP细胞转染sg-lnc RNA gas5并进行顺铂处理之后,对细胞存活率的影响,细胞各分为Control、sg-NC、sg-Lnc RNA gas5三组,待细胞稳定后用顺铂处理24h,顺铂药物浓度:0、10、20、30、40、50、60μg/m L。根据OD值计算细胞活性和IC50,探究出转染转染sh-lnc RNA gas5后A549、A549/DDP细胞对顺铂的敏感性的变化。(3)A549、A549/DDP细胞经脂质体转染构建lnc RNA gas5过表达、低表达模型,分为Control、OE-NC、OE-Lnc RNA gas5、sg-NC、sg-Lnc RNA gas5组,待转染的细胞模型稳定再用顺铂处理,通过平板克隆形成实验观察对肺癌细胞增殖能力的影响,计细胞克隆团数目,显微镜下观察≥50个细胞的集落数。(4)通过生物信息学预测和双荧光素酶实验检测lnc RNA gas5与mi R-152-3p mimics之间的靶向互作关系,双荧光素酶实验用293T细胞,分为Control、gas5-WT+mimics NC、gas5-WT+mi R-152-3p mimics、gas5-Mut+mimics NC、gas5-Mut+mi R-152-3p mimics组,经过48 h的转染后,通过双荧光素酶实验分别检测各组细胞荧光素酶活性,根据检测数据统计出两种荧光素酶比值(即报告基因/内参基因),同时比较不同组别之间的比值差异。结果:(1)根据q RT-PCR检测结果显示,在A549和A549/DDP细胞中感染sg-Lnc RNA gas5病毒后,细胞中Lnc RNA gas5的表达下调(P549和A549/DDP细胞中转染sg-Lnc RNA gas5后,与sg-NC组相比,sg-Lnc RNA gas5组细胞存活率显著上调(P549细胞中,OE-Lnc RNA gas5与OE-NC组相比克隆形成数显著减少(Pgas5与sg-NC组相比,克隆形成数显著增多(P549/DDP细胞中,OE-Lnc RNA gas5与OE-NC组相比,克隆形成数显著减少(Pgas5与sg-NC组相比,克隆形成数显著增多(Pgas5-WT+mimics NC组的相对荧光强度(19.42±0.38)相比,gas5-WT+mi R-152-3p mimics组的相对荧光强度(15.80±0.26)显著降低(P52-3p可与gas5的基因序列相结合而减弱gas5基因的表达量。结论:低表达lnc RNA gas5可促进肺癌细胞增殖和顺铂耐药;高表达lnc RNA gas5可抑制肺癌细胞增殖,降低肺癌顺铂耐药性;lnc RNA gas5与mi R-152-3p之间存在靶向关系,lnc RNA gas5可能是受mi R-152-3p直接调控的靶基因。lnc RNA gas5基因可能成为逆转人非小细胞肺癌顺铂化疗耐药性的一个有效潜在靶点。

关键词： lncrna gas5 肺癌顺铂耐药性调控机制

肉苁蓉总苷通过调控lncrna gas5保护神经细胞缺血再灌注损伤

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中成药 2022年第7期44卷 2320-2324页

作者：樊燕燕张石在鄂尔多斯应用技术学院医学系内蒙古鄂尔多斯017000

目的探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(gas5)组... 详细信息

目的探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(gas5)组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-gas5组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞活力、凋亡以及pro-caspase3、cleaved-caspase3蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncrna gas5表达,试剂盒检测细胞上清液中TNF-α、IL-6水平。结果与对照组比较,I/R组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncrna gas5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P5);与I/R组比较,肉苁蓉总苷中、高剂量组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncrna gas5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P5);与si-NC组比较,si-gas5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P5);与肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组比较,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-gas5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P5)。结论肉苁蓉总苷通过下调lncrna gas5表达对神经细胞缺血再灌注损伤具有保护作用。

关键词：肉苁蓉总苷神经细胞缺血再灌损伤 lncrna gas5

藤黄酸通过增加lncrna gas5水平抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应和转移标志物表达

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中成药 2021年第9期43卷 2504-2508页

作者：许娟秀吴海根江西省妇幼保健院肿瘤科江西南昌330006

目的藤黄酸(Gambogic acid,GA)可在卵巢癌中扮演抗癌作用,但其抗癌的分子机制并不清楚。本研究旨在探讨卵巢癌细胞中藤黄酸抗癌的分子机制。方法RT-qPCR检测12例卵巢癌组织和癌旁正常组织中非编码RNA(lncrna gas5)的表达;将具有稳定沉默... 详细信息

目的藤黄酸(Gambogic acid,GA)可在卵巢癌中扮演抗癌作用,但其抗癌的分子机制并不清楚。本研究旨在探讨卵巢癌细胞中藤黄酸抗癌的分子机制。方法RT-qPCR检测12例卵巢癌组织和癌旁正常组织中非编码RNA(lncrna gas5)的表达;将具有稳定沉默gas5的siRNA-gas5(si-gas5)和藤黄酸试剂共处理卵巢癌细胞系SW626,RT-qPCR检测gas5、miR-21、MMP-2和MMP-9 mRNA表达变化。细胞增殖使用CCK-8试剂盒进行测定。Western blot法检测转移标记物MMP-2、MMP-9、VEGF和靶基因侧支发芽因子同源物2(Sprouty homolog2,SPRY2)的表达,ELISA试剂盒法检测IL-6和IL-1β在细胞培养物上清中水平。结果卵巢癌细胞和组织中gas5表达降低(P5),藤黄酸处理SW626细胞24 h,上调gas5表达(P5),抑制SW626增殖能力(P5),下调MMP2、MMP-9、VEGF的表达及IL-6和IL-1β的分泌(P5)。藤黄酸减少细胞核磷酸化p65水平(P5)。在藤黄酸处理细胞的基础上沉默gas5,可部分逆转藤黄酸的上述功能(P5)。另外,藤黄酸抑制miR-21的水平并上调SPRY2的表达(P5)。结论藤黄酸通过上调gas5抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应、转移能力。

关键词：藤黄酸卵巢癌增殖炎症反应转移标志物 lncrna gas5