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lncrna dancr靶向miR-656-3p调控急性髓系白血病细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭

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中国免疫学杂志 2022年第9期38卷 1058-1063页

作者：孔文燕吕秋玲肖琛山东中医药大学第二附属医院检验科济南250001

目的:探讨lncrna dancr对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:采集53例AML患者及53例健康体检者外周血,体外培养AML细胞系(U-937、HL-60和NB4)及HS-5细胞,RT-qPCR法检测外周血及细胞系中lncrna dancr... 详细信息

目的:探讨lncrna dancr对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:采集53例AML患者及53例健康体检者外周血,体外培养AML细胞系(U-937、HL-60和NB4)及HS-5细胞,RT-qPCR法检测外周血及细胞系中lncrna dancr和miR-656-3p表达。选择lncrna dancr和miR-656-3p表达较HS-5细胞差异最显著的U-937细胞为研究对象,转染si-lncrna dancr(si-lncrna dancr组)、si-NC(si-NC组)、miR-656-3p mimcs(miR-656-3p组)、miR-NC(miR-NC组)、共转染si-lncrna dancr与miR-656-3p抑制剂(si-lncrna dancr+anti-miR-656-3p组)、silncrna dancr与miR-NC(si-lncrna dancr+anti-miR-NC组)。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中CyclinD1、Cleaved-caspase-3、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncrna dancr与miR-656-3p调控关系。结果:与健康对照组比较,AML患者外周血和细胞系中lncrna dancr表达升高(Plncrna dancr或过表达miR-656-3p可降低U-937细胞A值、迁移和侵袭数量及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达(Plncrna dancr靶向负调控miR-656-3p,且敲减miR-656-3p逆转敲减lncrna dancr对U-937细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(Plncrna dancr在AML患者外周血及细胞系中呈高表达,敲减其表达可能通过靶向上调miR-656-3p抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,可将此lncrna dancr作为AML治疗的分子靶点。

关键词： AML lncrna dancr miR-656-3p 细胞增殖凋亡迁移侵袭

lncrna dancr调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

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中国骨质疏松杂志 2023年第2期29卷 297-302,308页

作者：刘凯张聿轲冬梅王建忠内蒙古医科大学内蒙古自治区呼和浩特010030 内蒙古医科大学第二附属医院内蒙古自治区呼和浩特010020

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种中老年人易患的骨代谢性疾病,以骨密度减低和骨微结构破坏为特征,可导致骨脆性增加和骨折风险增大。随着OP分子机制研究的深入,针对相关细胞调控通路的治疗靶点被陆续发现,通过这些靶点可研发出新的... 详细信息

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种中老年人易患的骨代谢性疾病,以骨密度减低和骨微结构破坏为特征,可导致骨脆性增加和骨折风险增大。随着OP分子机制研究的深入,针对相关细胞调控通路的治疗靶点被陆续发现,通过这些靶点可研发出新的靶向治疗方案。lncrna分化拮抗非蛋白编码RNA(differentiation antagonizing non-protein coding RNA,dancr)能够通过竞争结合、作为转录辅助因子等方式作用于Wnt/β-catenin、MAPK及NF-κB等信号通路调控BMSC成骨分化,影响OP的发生与进展。dancr具有作为OP临床诊断标志物的潜力,并有希望作为药物干预的靶点参与OP的精准医疗。

关键词： lncrna dancr 骨质疏松骨髓间充质干细胞成骨分化

lncrna dancr靶向调控对绝经后骨质疏松BMSCs成骨分化的作用

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中国骨质疏松杂志 2023年第9期29卷 1278-1284,1353页

作者：李章献王庆陈泰祥戴哲浩王麓山南华大学附属第三医院脊柱外科湖南衡阳421900 南华大学附属第三医院骨科湖南衡阳421900 中南大学湘雅二医院脊柱外科湖南长沙421142 南华大学附属第一医院脊柱外科湖南衡阳421000

目的研究长链非编码RNA(lncrna)分化非蛋白编码RNA(dancr)靶向微小RNA(miR)-19a-3p对绝经后骨质疏松(PMOP)骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控作用。方法选择健康女性志愿者4例和PMOP患者4例,分离培养BMSCs;PMOP患者BMSCs进行分组,... 详细信息

目的研究长链非编码RNA(lncrna)分化非蛋白编码RNA(dancr)靶向微小RNA(miR)-19a-3p对绝经后骨质疏松(PMOP)骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控作用。方法选择健康女性志愿者4例和PMOP患者4例,分离培养BMSCs;PMOP患者BMSCs进行分组,转染阴性对照(NC)siRNA、lncrna dancr siRNA、miR-NC抑制物、miR-19a-3p抑制物。检测lncrna dancr、miR-19a-3p、PTEN的表达水平,成骨诱导分化后检测茜素红染色的OD405水平、碱性磷酸酶(ALP)活力、骨钙素(OCN)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达水平。结果PMOP患者BMSCs中lncrna dancr、PTEN的表达水平高于健康女性,miR-19a-3p的表达水平及成骨诱导后的OD405水平、ALP活力、OCN及OPN的表达水平均低于健康女性。在PMOP患者BMSCs中,si-dancr组的lncrna dancr、PTEN的表达水平低于si-NC组,成骨诱导后的OD405水平、ALP活力及miR-19a-3p、OCN、OPN的表达水平高于si-NC组;si-dancr+miR-19a-3p抑制物组成骨诱导后的OD405水平、ALP活力及miR-19a-3p、OCN、OPN的表达水平低于si-dancr+miR-NC抑制物组,PTEN的表达水平高于si-dancr+miR-NC抑制物组。结论lncrna dancr靶向miR-19a-3p调控PMOP患者BMSCs的成骨分化。

关键词：绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞 lncrna dancr miR-19a-3p 成骨分化

lncrna dancr/miR-222-3p/KIT在甲状腺乳头状癌中的表达情况及其相关性

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LncRNA DANCR/miR-222-3p/KIT在甲状腺乳头状癌中的表达情况及其...

作者：王茜华北理工大学

学位级别：硕士

目的长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)dancr,在多种肿瘤组织中呈现异常表达,可通过竞争性结合微小RNA(Micro RNAs,mi RNA)解除其对m RNA的抑制,参与肿瘤的发生发展。然而Lnc RNA dancr在甲状腺癌中少有报道。本研究通过检测l... 详细信息

目的长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)dancr,在多种肿瘤组织中呈现异常表达,可通过竞争性结合微小RNA(Micro RNAs,mi RNA)解除其对m RNA的抑制,参与肿瘤的发生发展。然而Lnc RNA dancr在甲状腺癌中少有报道。本研究通过检测lnc RNA dancr在不同类型的甲状腺组织中的表达规律,通过生物信息数据库预测其调控网络,探究lnc RNA dancr在甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid cancer,PTC)发生发展中的作用。方法1收集2020年11月至2021年10月期间于唐山市工人医院行手术切除的甲状腺组织,其中病理确诊为PTC的癌组织及癌旁正常组织30对,结节性甲状腺肿的组织30例。通过Reverse transcription-quantitative PCR(RT-q PCR)技术检测三组甲状腺组织中lnc RNA dancr的表达量,探究其与PTC临床特征的相关性。2利用生物信息学网站ENCORI预测lnc RNA dancr靶向mi RNA及mi RNA靶基因,并通过泛癌分析平台(Pan-Cancer)筛选,获取与lnc RNA dancr共表达系数最高的mi RNA以及与mi RNA共表达系数最高的m RNA。3采用RT-q PCR技术在不同类型甲状腺组织中检测所筛选的mi RNA和m RNA的表达量及与临床特征的关系,进一步探究lnc RNA dancr、mi RNA和m RNA在PTC中的相关性。结果1 lnc RNA dancr在PTC组织中的表达显著低于癌旁正常组织及结节性甲状腺肿组织[3.173(2.255)vs 4.272(3.314),4.113(2.903);Pdancr的表达与PTC的肿瘤直径、淋巴结转移及临床分期负相关(P0.05)。3在ENCORI生物信息学网站中筛选出最优mi RNA和m RNA,即mi RNA-222-3p和KIT,lnc RNA dancr与mi R-222-3p相关系数为-0.539(Pdancr与KIT相关系数为0.672(P0.05)。结论1 lnc RNA dancr、KIT在PTC组织中低表达,其表达与肿瘤最大径、淋巴结转移、临床分期负相关,mi R-222-3p在PTC组织中高表达,其表达与肿瘤最大径、淋巴结转移、临床分期正相关。2在甲状腺乳头状癌中,lnc RNA dancr可能通过充当mi R-222-3p的海绵,下调KIT m RNA的表达量,从而影响PTC的发生发展过程。图 7 幅;表 24 个;参 165 篇。

关键词：甲状腺乳头状癌 lncrna dancr miRNA-222-3P KIT RT-qPCR

lncrna dancr靶向miR-423-5p调控ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡、炎症反应

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中国免疫学杂志 2021年第18期37卷 2187-2193页

作者：李骞李秀研林丽丽许景芬陈芬福建医科大学附属泉州第一医院全科医学科泉州362000 华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科武汉430022

目的:探讨长链非编码RNA(lncrna)分化拮抗非蛋白编码RNA(dancr)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的血管内皮细胞(HUVEC)凋亡、炎症因子分泌的影响和可能机制。方法:50μg/ml的ox-LDL诱导HUVEC。RT-qPCR检测lncrna dancr和miR-423-5p表达... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lncrna)分化拮抗非蛋白编码RNA(dancr)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的血管内皮细胞(HUVEC)凋亡、炎症因子分泌的影响和可能机制。方法:50μg/ml的ox-LDL诱导HUVEC。RT-qPCR检测lncrna dancr和miR-423-5p表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;ELISA试剂盒检测IL-1β、IL-6、TNF-α水平。将lncrna dancr过表达载体、miR-423-5p抑制物分别转染HUVEC,检测过表达lncrna dancr或抑制miR-423-5p对ox-LDL诱导的HUVEC增殖、凋亡、炎症因子分泌的影响。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定Ln⁃cRNA dancr与miR-423-5p之间靶向调控作用。结果:ox-LDL诱导后HUVEC中lncrna dancr表达、存活率显著降低,miR-423-5p表达、凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(Plncrna dancr或抑制miR-423-5p表达后,ox-LDL诱导的HUVEC存活率显著升高,凋亡率显著降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(Plncrna dancr的靶基因,lncrna dancr负性调控miR-423-5p表达。过表达miR-423-5p能够逆转lncrna dancr过表达对ox-LDL诱导的HUVEC存活、凋亡和炎症因子分泌的影响(Plncrna dancr能够提高HUVEC存活率,改善ox-LDL诱导的细胞凋亡和炎症反应,其机制与靶向调控miR-423-5p表达有关。

关键词： lncrna dancr ox-LDL 内皮细胞增殖凋亡 miR-423-5p

长链非编码RNA dancr促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及迁移作用研究

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长链非编码RNA DANCR促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及迁移...

作者：韩丽飞东南大学

学位级别：硕士

目的:长链非编码RNA dancr(long noncoding RNA-differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,dancr)在滑膜间充质干细胞向软骨细胞的分化、牙髓细胞的成牙质样分化、肝癌、前列腺癌、结肠癌中发挥作用。dancr与肿瘤的发生,定植... 详细信息

目的:长链非编码RNA dancr(long noncoding RNA-differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,dancr)在滑膜间充质干细胞向软骨细胞的分化、牙髓细胞的成牙质样分化、肝癌、前列腺癌、结肠癌中发挥作用。dancr与肿瘤的发生,定植,肿瘤侵袭,转移,增殖,迁移,细胞凋亡,疾病进展和预后息息相关。但dancr与乳腺癌相关性研究的报道很少,具体机制未阐明。本研究旨在探讨dancr在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的生物学功能。方法:收集2017年5月至2018年11月在东南大学附属中大医院就诊,术前行超声引导下穿刺经2位有经验的病理科医生确诊为乳腺癌的26例患者的新鲜乳腺癌组织和配对的正常腺体组织,研究开始前均取得患者同意并签署知情同意书,研究相关内容经东南大学附属中大医院伦理部门审核并批准。所有患者术前未行放疗、化疗和靶向治疗,采用qRT-PCR检测dancr在癌组织及正常乳腺组织中的表达水平,另选择不同分子亚型的乳腺癌细胞株:MCF-7(HR+,Her2-)、MDA-MB-231(HR-,Her2-)、SK-BR-3(HR-,Her2+)、MCF-10A(正常乳腺上皮细胞)作为研究对象,采用qRT-PCR法比较不同分子亚型乳腺癌细胞株中lncrna dancr的表达水平。通过慢病毒(shRNA)转染技术构建lncrna dancr敲降的MDA-MB-231细胞株及阴性对照组。采用qRT-PCR验证dancr敲降效率。用MTT、Transwell检测dancr敲降后细胞增殖及迁移能力的变化;用流式细胞技术检测dancr敲降后细胞周期、凋亡的情况;用Western-blot检测dancr敲降后MDA-MB-231细胞中细胞周期相关蛋白的表达。使用SPSS分析dancr的表达水平与患者临床特征:年龄、肿瘤分期、组织学分级、Ki-67、激素受体状态之间的相关性。结果:1、通过qRT-PCR检测发现dancr在乳腺癌组织中的表达水平高于正常乳腺组织中,Pdancr的表达水平,dancr在细胞MDAMB-231(HR-,Her2-)、SK-BR-3(Her2+)细胞中的表达水平高于MCF-10A(正常乳腺上皮细胞),Pdancr,检测到绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)信号表明成功构建dancr敲降细胞株。采用qRT-PCR检测敲降细胞系中dancr的表达水平,结果证实:与阴性对照组相比,dancr在shRNA-381和shRNA-766中均明显下调,Pdancr后对MDA-MB-231细胞增殖的影响,结果发现与阴性对照组相比,dancr敲降后抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力,Pdancr敲降后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化,与阴性对照组相比,dancr敲降后抑制了MDA-MB-231细胞的迁移能力,Pdancr敲降后对细胞周期的影响,与阴性对照组(NC)相比,dancr敲降细胞中G0/G1期细胞百分比显著增加,NC为34.2%,381为48.38%,766组为40.17%。7、流式细胞技术检测dancr敲降后对细胞凋亡的影响,与阴性对照组相比,敲降dancr对细胞凋亡没有显著的影响。8、采用Western-blot检测dancr敲降后MDA-MB-231细胞中的周期相关蛋白表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,敲降dancr后抑制了MDAMB-231细胞中Cyclin D1和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)的表达水平,Plncrna dancr与临床病理特征之间的相关性,我们将dancr表达中值(1.344)作为截止值,将所有患者分为2组(dancr高表达组和dancr低表达组),分析dancr与各种临床特征之间的相关性。在dancr高表达组中,0%,31%和69%的患者分别为TNM I,II,III,而在dancr低表达组中,比例为61%,31%和8%。在dancr高表达组中,0%,54%,46%的患者分别为组织学1,2,3级,而在低dancr组中,该比例分别为8%,38%和54%。此外,69%和23%的患者在dancr高表达组和

关键词： lncrna dancr 乳腺癌增殖迁移周期阻滞

长链非编码RNA dancr通过miR-1275/MMP-13诱导滑膜间充质干细胞增殖和向软骨分化的机制研究

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长链非编码RNA DANCR通过miR-1275/MMP-13诱导滑膜间充质干细胞增...

作者：房鹏南京大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在探讨lncrna dancr促进滑膜间充质干细胞增殖和诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的机制,以期为滑膜间充质干细胞向软骨组织分化和增殖提供理论基础。方法:（1）术中收集患者的关节液标本,提取患者关节液中的SMSCs,在... 详细信息

目的:本研究旨在探讨lncrna dancr促进滑膜间充质干细胞增殖和诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的机制,以期为滑膜间充质干细胞向软骨组织分化和增殖提供理论基础。方法:（1）术中收集患者的关节液标本,提取患者关节液中的SMSCs,在体外培养扩增、纯化、诱导并对其进行鉴定。（2）敲低和过表达SMSCs中的lncrna dancr,同时设立空白对照组,通过CCK-8实验、Sox9、Col II在mRNA和蛋白质水平的表达情况等来检测SMSCs的增殖和软骨细胞分化能力。（3）通过生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验、RIP等确定lncrna dancr的靶基因是否为miR-1275;过表达lncrna dancr的同时敲低miR-1275以及敲低lncrna dancr的同时过表达miR-1275以再次佐证。（4）Taget Scan生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验确定MMP-13mRNA是否为miR-1275的靶基因;敲低和过表达miR-1275,以再次佐证。（5）敲低和过表达lncrna dancr后检测MMP-13在mRNA和蛋白质上水平;过表达lncrna dancr的同时敲低MMP-13以及敲低lncrna dancr的同时过表达MMP-13检测SMSCs的增殖活性和分化能力,以验证lncrna dancr对于MMP-13的调节作用。结果:（1）从患者关节液中获取的SMSCs,其细胞形态大致均一、呈梭形分布;有间充质干细胞特定的表面抗原;在一定诱导的培养条件下,SMSCs可以向软骨细胞、骨细胞、脂肪细胞等不同方向分化。（2）CCK-8显示:过表达lncrna dancr的SMSCs的细胞增殖速度显著快于空白对照组,并且软骨特异性标志物Sox9、Col II在mRNA和蛋白质上的水平表达增加;而敲低lncrna dancr的表达则出现相反的结果。（3）通过miRcode数据库我们发现miR-1275在3’-UTR处通过碱基互补配对与dancr结合;qRT-PCR检测显示:敲低和过表达lncrna dancr,SMSCs中的miR-1275水平分别增加和减少;RIP实验结果显示SMSCs Ago-2抗体明显富集lncrna dancr和miR-1275;双荧光素酶报告基因实验显示miR-1275组中lncrna dancr荧光较dancr突变组明显减少,miR-1275敲低组中则反之;lncrna dancr过表达时增加了SMSCs的增殖能力,上调了Sox9和Col II的表达,而过表达miR-1275却逆转了这一效应,此外敲低miR-1275的表达可增强lncrna dancr过表达时对SMSCs增殖和软骨分化的影响。（4）Taget Scan生信预测分析得知MMP-13mRNA是miR-1275的靶基因;双荧光素酶报告基因实验显示miR-1275降低了MMP13-WT组的荧光素酶活性;过表达SMSCs中的miR-1275时,在mRNA和蛋白质水平上SMSCs中的MMP-13明显表达降低;敲低SMSCs中miR-1275的表达则出现结果相反。（5）敲低lncrna dancr的表达降低了SMSCs中的MMP-13蛋白水平,过表达lncrna dancr则结果相反反之;敲低MMP-13的表达可消除lncrna dancr过表达时对SMSCs的增殖和分化的影响。结论:lncrna dancr可以通过miR-1275/MMP-13诱导滑膜间充质干细胞增殖和向软骨分化。

关键词： lncrna dancr 滑膜间充质干细胞软骨分化 miR-1275 MMP-13

dancr通过AKT-GSK3β-Cyclin D1信号通路调控黑素瘤细胞活性机制的研究

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中国美容医学 2021年第3期30卷 86-90页

作者：李程彬徐威龙李婷陈佳舒茂国贾晶西安交通大学第一附属医院整形美容·颌面外科陕西西安710061

目的:探索长链非编码(Long non-coding,Lnc)RNA dancr(Anti-differentiation nc RNA)在黑素瘤组织中表达及其对黑素瘤细胞的作用及其作用机制。方法:检测黑素瘤和瘤旁组织中dancr表达,及其与患者临床预后的关系。在敲低dancr的黑素瘤细... 详细信息

目的:探索长链非编码(Long non-coding,Lnc)RNA dancr(Anti-differentiation nc RNA)在黑素瘤组织中表达及其对黑素瘤细胞的作用及其作用机制。方法:检测黑素瘤和瘤旁组织中dancr表达,及其与患者临床预后的关系。在敲低dancr的黑素瘤细胞株A375和B16中通过MTT和克隆形成实验检测敲低dancr对细胞活性影响,通过Western-blot实验检测p-AKT,p-GSK3β和Cyclin D1表达,并通过细胞流式检测细胞周期分布。通过过表达dancr检测其是否通过AKT/GSK3β调控细胞活性。结果:dancr在黑素瘤组织中表达上调,并与黑素瘤不良临床预后相关;敲低dancr可抑制黑素瘤细胞活性,下调p-AKT、p-GSK3β和Cyclin D1表达;抑制AKT或GSK3β均可减弱dancr过表达对细胞活性上调作用。结论:dancr在黑素瘤中表达上调,激活AKT-GSK3β-Cyclin D1信号通路上调细胞活性,促进黑素瘤进展。

关键词： lncrna dancr 黑素瘤细胞活性增殖 AKT GSK3β Cyclin D1