检索结果-南通市图书馆

中国农业科学 2022年第13期55卷 2654-2666页

作者：冉宏标赵丽玲王会柴志欣王吉坤王嘉博武志娟钟金城西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncfam200b对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncfam200b对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分... 详细信息

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncfam200b对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncfam200b对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncfam200b超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncfam200b超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EbPα、AP2,lncfam200b潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncfam200b超表达后，脂肪分化标志基因C/EbPα、AP2表达量显著升高（Plncfam200b潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势，PTEN表达量呈现先增高后降低趋势；细胞脂滴沉积显著增加（Plncfam200b可显著降低脂肪分化标志基因PPARγ、C/EbPα、AP2的表达水平（Plncfam200b后其潜在靶基因SIRT1呈现先升高后降低的表达趋势，PTEN则相反。CCK-8增殖实验表明，lncfam200b超表达72 h后，细胞增殖效率显著降低（Plncfam200b后72 h后细胞增殖效率显著增强（Plncfam200b可能通过影响脂肪分化标志基因C/EbPα和AP2，脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积，但其具体机制还需要进一步研究。

关键词：牦牛 lncfam200b 肌内前体脂肪细胞超表达干扰

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

lncfam200b对牦牛前体脂肪细胞分化的作用研究

lncFAM200B对牦牛前体脂肪细胞分化的作用研究

引用

作者：赵丽玲西南民族大学

学位级别：硕士

牦牛是对青藏高原极端环境具有很好适应性的优良牛种,是高原地区牧民生产生活资料的主要来源。脂肪分化对改善畜禽肉质具有重要影响,研究表明,lncfam200b在秦川牛的脂肪发育过程中具有重要调控作用,但在牦牛上尚未见相关研究报道。本研... 详细信息

牦牛是对青藏高原极端环境具有很好适应性的优良牛种,是高原地区牧民生产生活资料的主要来源。脂肪分化对改善畜禽肉质具有重要影响,研究表明,lncfam200b在秦川牛的脂肪发育过程中具有重要调控作用,但在牦牛上尚未见相关研究报道。本研究通过克隆鉴定牦牛lncfam200b,借助腺病毒介导的超表达和siRNA介导的干扰技术,研究lncfam200b超表达和干扰后对脂代谢相关基因、脂滴沉积和甘油三酯含量变化的影响,最终分析lncfam200b对牦牛肌内前体脂肪细胞分化的影响。结果如下:1.牦牛lncfam200b长度为531 bp,相较于普通牛在83～142 bp处多59 bp,且生物信息学分析及原核表达试验均表明lncfam200b为长链非编码RNA;组织表达谱分析表明lncfam200b在同一年龄阶段牦牛的脂肪组织中表达量高于肌肉组织。生物信息学分析表明,与lncfam200b具有潜在相互作用mi RNA的靶基因,如SIRT1、SCD5、PTEN和MYPN等与肌肉和脂肪发育密切相关。2.本研究从牦牛背最长肌分离获得肌内前体脂肪细胞,并用lncfam200b超表达腺病毒感染前体脂肪细胞。结果表明,lncfam200b超表达后,C/EbPα、AP2表达量显著高于对照组(Plncfam200b超表达2 d后,SIRT1表达量先降低后升高;PTEN表达量先升高后降低。超表达3 d后,细胞活率显著低于对照组。以上结果显示lncfam200b超表达可促进牦牛前体脂肪细胞分化,且lncfam200b超表达会降低细胞增殖效率。3.牦牛lncfam200b siRNA转染前体脂肪细胞后,PPARγ、C/EbPα、AP2表达量显著低于对照组(Plncfam200b干扰可抑制牦牛前体脂肪细胞分化。综上所述,lncfam200b可通过促进脂肪分化标志基因C/EbPα、AP2的表达,促进牦牛脂肪分化,导致甘油三酯含量增加和脂滴聚集,且lncfam200b会影响靶基因SIRT1、PTEN的表达。本研究为进一步探索lncfam200b在牦牛脂肪发育过程中的作用机制奠定了基础。

关键词：牦牛 lncfam200b 肌内前体脂肪细胞超表达 siRNA干扰

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牦牛lncfam200b的克隆鉴定、表达及生物信息学分析

引用

华北农学报 2020年第5期35卷 220-230页

作者：赵丽玲王会柴志欣王吉坤王嘉博武志娟信金伟钟金城姬秋梅西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省、教育部重点实验室四川成都610041 省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850000

旨在克隆鉴定牦牛lncfam200b,为探索其在牦牛肌肉和脂肪发育过程中的调控作用奠定基础。以臀肌cDNA为模板,设计特异性引物扩增lncfam200b全长序列,用在线软件CPC、CPAT对该lncRNA的编码能力进行预测,进一步通过原核表达试验鉴定其编码能... 详细信息

旨在克隆鉴定牦牛lncfam200b,为探索其在牦牛肌肉和脂肪发育过程中的调控作用奠定基础。以臀肌cDNA为模板,设计特异性引物扩增lncfam200b全长序列,用在线软件CPC、CPAT对该lncRNA的编码能力进行预测,进一步通过原核表达试验鉴定其编码能力;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对lncfam200b进行组织表达分析,通过TargetScan 7.1和miRanda预测与lncfam200b具有潜在相互作用miRNA的靶基因,利用DAVID在线软件对靶基因进行GO和KEGG分析。结果显示,牦牛lncfam200b长度为531 bp;相较于普通牛多59 bp,编码潜能为-1.2874,且原核表达试验验证该lncRNA不具备蛋白编码能力,表明牦牛lncfam200b确为lncRNA;组织表达谱研究表明,lncfam200b在牦牛肺脏组织中表达量较高。与lncfam200b具有潜在相互作用miRNA的靶基因,如Sirt1、SCD5、KLF9、PTEN和MYPN等,与肌肉和脂肪发育相关。为进一步探讨牦牛lncfam200b在肌肉和脂肪发育中的生物学功能提供参考依据。

关键词：牦牛 lncfam200b 克隆组织表达肌肉发育

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

引用

作者：张思欢西北农林科技大学

学位级别：硕士

肌肉和脂肪组织是牛肉的主要组成部分,为此,发掘调控牛肌肉与脂肪生成的关键基因,对提高牛肉品质和肉牛生长发育性状具有重要意义。目前已知大量编码蛋白的基因对肌肉与脂肪的发育具有重要调控作用,例如:调控肌肉发育关键基因Myo D和My ... 详细信息

肌肉和脂肪组织是牛肉的主要组成部分,为此,发掘调控牛肌肉与脂肪生成的关键基因,对提高牛肉品质和肉牛生长发育性状具有重要意义。目前已知大量编码蛋白的基因对肌肉与脂肪的发育具有重要调控作用,例如:调控肌肉发育关键基因Myo D和My HC,调控脂肪生成的关键转录因子C/EbPα和PPARγ,以及同时对肌肉和脂肪的发育具有调控作用的Sirt1和Klf5等。近年来,越来越多的具有调控功能的长链非编码RNA(lnc RNA)被揭示,但大多数与肌肉、脂肪发育相关的研究只是利用测序的方法揭示一些候选lnc RNAs,对候选lnc RNAs功能的研究相对较少。因此,本研究以牛为研究对象,从实验室前期测序结果中筛选出候选lnc RNA,并利用RACE、生物信息学分析、原核表达、双荧光素酶报告系统和q RT-PCR等现代生物技术,对肌肉与脂肪发育相关lnc RNA lnc FAM200b进行鉴定、启动子活性及遗传变异研究,以期为深入探讨lnc RNA的功能与作用机制奠定基础,为提高牛肉品质与生长发育性状等提供科学资料。1.牛长链非编码RNA lnc FAM200b的全长克隆、鉴定与表达规律研究本实验室前期转录组测序结果显示,新lnc RNA lnc FAM200b在秦川牛胎牛、犊牛、成年牛肌肉组织中差异表达。本试验利用RACE对lnc FAM200b的序列特征进行研究,获得了lnc FAM200b共472 bp的全长序列;原核表达分析显示lnc FAM200b不具备蛋白编码的能力;生物信息学预测结果显示:lnc FAM200b启动子区3000 bp序列中包含30个C/EbPα和7个CEbPβ等与脂肪细胞生成相关的转录因子结合位点,43个SP1转录因子潜在的结合位点,其中,SP1富集区域易与肌肉发育相关转录因子Myo D结合。lnc FAM200b在肌肉和脂肪中的表达分析显示lnc FAM200b在秦川牛犊牛肌肉中的表达水平显著低于在胎牛、成年牛肌肉中的表达水平。与此同时,在犊牛、成年牛脂肪中的表达水平均高于在同一时期肌肉中的表达水平。这些研究结果表明lnc FAM200b可能影响牛肌肉与脂肪发育。2.牛长链非编码RNAlncfam200b基因启动子活性研究生物信息学预测发现牛lnc FAM200b基因可能与脂肪与肌肉发育相关,因此,本研究利用人胚肾293T、小鼠成肌细胞C2C12和前脂肪细胞3T3-L1细胞系,通过构建并转染包含lnc FAM200b启动子不同截短体的p GL3-basic重组质粒并检测双荧光素酶活性,进一步分析lnc FAM200b基因启动子区的活性区域。结果显示,在293T、C2C12、3T3-L1三种细胞系中,不同截短体对应的荧光强度的变化趋势是一致的,从p GL3-pro4(-403)缩短到p GL3-pro5(-139)的过程中,荧光活性出现了极显著的降低(Pbp之间为启动子活性区域。对不同细胞系中的荧光活性进行分析时发现,不同截短体在三种细胞系中的活性依次为293T200b的启动子活性在3T3-L1细胞中最强,其次是在C2C12细胞中,与lnc FAM200b在肌肉、脂肪中的表达水平一致。对启动子活性区域结合的转录因子进行预测发现,264 bp的活性区域中有6个与肌肉发育相关的转录因子SP1潜在的结合位点,2个与脂肪发育密切相关的C/EbPα潜在的结合位点。这些结果提示lnc FAM200b可能对牛肌肉和脂肪的发育具有一定的调控作用。3.牛长链非编码RNAlnc FAM200b基因遗传变异及其遗传效应研究肌肉和脂肪的发育是影响个体生长发育的主要原因,因此,本研究进一步从群体水平上分析lnc FAM200b基因单核苷酸多态性(SNP)与牛生长相关性状的关系。DNA测序发现南阳牛lnc FAM200b基因第1内含子存在1个SNP突变(AC00163:g.2472 T>C,Taq I);利用PCR-RFLP方法鉴定145头南阳牛个体的基因型,结果显示:TC基因型的频率最高(0.57),CC基因型的频率最低(0.02)。关联分析结果表明,该遗传变异位点不同基因型与6月龄南阳牛的体重、体高、体斜长、日增重等4个生长发育性状显著相关(P200b基因在生长发育过程中的功能奠定了基础,并为提高牛肉品质与生长发育性状的标记辅助选择(MAS)育种提供基础材料。

关键词：牛长链非编码RNA(lncRNA) lncfam200b 启动子活性遗传变异

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：