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日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导保护性免疫力的特续时间及其机制的研究

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导保护性免疫力的特续时间及...

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作者：赵文娥南京医科大学

学位级别：硕士

研究背景血吸虫病是一种严重危害人体健康的人兽共患寄生虫病，目前仍是一个全球性的重要公共卫生问题。由于长期化疗存在需反复治疗、费用高以及不能预防再感染、有可能产生耐药虫株等缺点，所以寻找其他具有较长期效果的防治措... 详细信息

研究背景血吸虫病是一种严重危害人体健康的人兽共患寄生虫病，目前仍是一个全球性的重要公共卫生问题。由于长期化疗存在需反复治疗、费用高以及不能预防再感染、有可能产生耐药虫株等缺点，所以寻找其他具有较长期效果的防治措施成为国内外专家学者关注的焦点，其中血吸虫病疫苗可能是一种费用较低而有效的措施。由于部分日本血吸虫的保护抗原为糖类或糖复合物，难以用基因工程技术制备，因此，抗独特型抗体(anti-id)疫苗的研究受到日益重视。管晓虹等(1991年)建立了一株日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30，已证实为肠相关抗原(GAA)的内影像抗独特型抗体，其抗体同型为IgM，与可溶性虫卵抗原(SEA)及膜相关抗原(MAA)有部分交叉反应。应用小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型证实NP30对虫卵肉芽肿的形成具有致敏作用。对感染宿主(昆明种小鼠、C57BL／6小鼠、BALB／c和山羊)具有较好的免疫保护作用(减虫率分别为50.46％、41.67％、39.53％和42.78％)，并具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效。另外，NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿和肝纤维化有明显的负调节作用。以上研究证明日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30具有较好的抗感染免疫和抗病免疫功效，可作为日本血吸虫病疫苗候选分子。但NP30诱导保护性免疫力的持续时间尚不清楚，本课题拟在以往研究工作的基础上观察NP30诱导宿主保护性免疫力的持续时间，并探讨其作用机制。南京医科人学硕{位论文研究目的 1.在以往对NP3O研究的基础上，进一步了解NP3O主动免疚小鼠后诱导的保护性免疫力持续时间。 2.探讨NP30诱导宿主保护性免疫力的作用机制。研究方法 1.昆明种小鼠107只，实验组腹腔注射NP3 0 10似g/鼠，主动免疫3次，每次间隔2周，对照组腹腔注射等体积生理盐水。分别于末次免疫后8周、12周、16周、20周、24周感染日本血吸虫尾坳40 士l条。 2.尾坳攻击感染6周后处死小鼠，左心室一门静脉灌注冲洗收集成虫，计算减虫率;留取肝组织，虫卵计数后计算减卵率。 3.尾坳攻击感染后40d行足垫试验。 4.血清lgG、IgGI、Ig姚a检测:分别留取免疫前、感染尾坳前、处死前两天的小鼠血清，用间接ELISA法进行检测。 5.脾细胞培养上清细胞因子(IL一4、IFN一Y)的检测:无菌取脾，经NP3O刺激无菌培养72小时后，收集脾细胞培养上清，按试剂盒说明书进行IL一4和IFN一Y的检测。 6.所得数据经SPSs 1 0.0软件行t检验，以P<0.05为显著性水平。研究结果 1，日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP3O末次免疫后8周、12 周、16周感染日本血吸虫尾坳获得减虫率为21.43%一41.16%、减卯率为26.25%一63.67%，分别与对照组相比差异有显著性;20周、24 周的减虫率为16.38%、4.76%，减卯率为28.47%、一3.67%，分别与对照组相比差异无显著性。 2.感染尾坳前，IgG和xgGZa抗体水平8周、12周、16周、20 周实验组的A450值分别为0.4025、0.4642、0.1 502、0.1070和0.2337、南京医科人学硕}一学位论文 0.3 1 29、0.1 2 13、0.0689，对照组的刀45。值分别为O，0206、0.0227、0.0032、 0.0344和0.0070、0.0081、0.0106、0.0097，实验组与对照组相比差异有显著性;IgGI抗体水平8周、12周、16周、20周、24周实验组的A45O值分别为1 .0942、1 .1 998、0.5903、0.2942、0.2379，对照组的 A450值分别为0.0088、0.0000、0.0015、0.0067、0.0181，实验组与对照组相比差异均有显著性;IgG和IgGZ。抗体水平24周实验组与对照组相比差异无显著性。 ***一4的浓度8周、12周实验组分别为16.335pg/ml、 15.o92pg/ml，对照组分别为***/ml、2.84lpg/ml:IFN一v的浓度 8周、12周实验组分别为26.683 pg/ml、24.857 pg/ml，对照组分别为 6.064 pg/ml、6.529 pg/ml，IL一4和IFN一v的浓度8周、12周实验组与对照组相比差异均有显著性，16周、20周、24周实验组与对照组相比差异无显著性。足垫试验结果显示8周、12周实验组与对照组相比差异有显著性。足垫试验结果16周、20周、24周实验组与对照组相比差异无显著性。研究结论 1.日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP3O

关键词：日本血吸虫杭独特型杭体主动免疫 IgG lggi IgG2a 酶联免疫吸附试验 IL-4 IFN-γ

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