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葛根素对妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f及免疫因子IL-17、IL-23表达的影响

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中国免疫学杂志 2017年第12期33卷 1843-1848页

作者：刘奇云马敬陶艳萍敬晓涛昆明医科大学第一附属医院昆明650000

目的:探究葛根素对妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f及免疫因子IL-17、IL-23表达的影响。方法:将120只大鼠分为正常对照组、空白对照组、辛伐他汀组、葛根素低剂量组、葛根素中剂量组、葛根素高剂量组,正常对照组以基础饲料、其他组以高... 详细信息

目的:探究葛根素对妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f及免疫因子IL-17、IL-23表达的影响。方法:将120只大鼠分为正常对照组、空白对照组、辛伐他汀组、葛根素低剂量组、葛根素中剂量组、葛根素高剂量组,正常对照组以基础饲料、其他组以高脂饲料饲喂2周。辛伐他汀组给予2 mg/kg的辛伐他汀,葛根素组按低、中、高剂量分别给予70 mg/kg、120mg/kg、170 mg/kg葛根素,正常对照组和空白对照组给予等量生理盐水,治疗2周后,测定6组大鼠血糖和血脂水平、胰腺组织中let-7f的表达水平以及血清和胰腺组织中IL-17和IL-23的表达情况。结果:治疗后,辛伐他汀组和葛根素组大鼠的fBG、TC、TG、ffA显著低于空白对照组,且随着葛根素剂量的增加,fBG、TC、TG、ffA的水平显著降低(Plet-7f的表达显著高于空白对照组(P7和IL-23的表达显著高于空白对照组(Plet-7f表达,同时降低血清和胰腺组织中IL-17、IL-23表达,为妊娠期糖尿病临床治疗提供新的思路和理论依据。

关键词：妊娠期糖尿病葛根素 let-7f 白细胞介素17 白细胞介素23

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let-7f对骨髓间充质干细胞增殖的影响

中国组织工程研究 2015年第50期19卷 8048-8055页

作者：李明哲龚哲王静王以文姚要兵侯晓灿焦淑洁滕军放贾延劼郑州大学第一附属医院神经内科河南省郑州市450052

背景:micro RNA let-7f和炎性因子白细胞介素6对骨髓间充质干细胞的具体作用及两者之间是否存在联系尚不可知。目的:分析let-7f及白细胞介素6表达水平对骨髓间充质干细胞增殖的影响及两者的关系。方法:1构建let-7f过表达及抑制慢病毒载... 详细信息

背景:micro RNA let-7f和炎性因子白细胞介素6对骨髓间充质干细胞的具体作用及两者之间是否存在联系尚不可知。目的:分析let-7f及白细胞介素6表达水平对骨髓间充质干细胞增殖的影响及两者的关系。方法:1构建let-7f过表达及抑制慢病毒载体,分别转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验分为4个组:转染上调组(转染LV-rno-let-7f-up)、转染下调组(转染LV-rno-let-7f-down)、阴性转染组(转染空病毒)、未转染组(不进行病毒转染)。q RT-PCR检测各组细胞let-7f表达水平。MTT法、流式细胞术和ELISA等方法检测不同let-7f表达水平下细胞增殖情况及白细胞介素6表达水平,q RT-PCR及Western blot检测各组Cyclin D1 m RNA和蛋白表达水平。2预测let-7f潜在的靶基因,构建野生型/突变型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体,分别与let-7f/let-7f inhibitor共转染293T细胞系,测定荧光素酶活性。结果与结论:let-7f转染上调组较未转染组及阴性转染组细胞增殖能力及克隆能力明显增强,G1期细胞数明显减少,S期明显增多,凋亡减少(Plet-7f转染上调组细胞培养液中的白细胞介素6表达水平低于未转染组及阴性转染组(Plet-7f转染上调组Cyclin D1蛋白及m RNA表达上调(P0.05)。野生型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体与let-7f共转染细胞的荧光素酶活性显著减低(Plet-7f表达水平可显著促进骨髓间充质干细胞增殖活性及克隆形成能力,减少凋亡,而下调let-7f表达水平则出现抑制作用。白细胞介素6过表达可抑制骨髓间充质干细胞增殖,考虑白细胞介素6是let-7f的靶基因,let-7f可能通过抑制白细胞介素6表达而促进细胞增殖。

关键词：骨髓间质干细胞白细胞介素6 细胞增殖组织工程干细胞骨髓干细胞 let-7f 骨髓间充质干细胞慢病毒国家自然科学基金

let-7f调节MMP-11影响胰腺癌侵袭迁移

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实用医学杂志 2016年第16期32卷 2608-2612页

作者：蒋浩海穆向明李晓红陆晶晶陆玉华李德春苏州大学附属第一医院普外科 215000 江苏省盐城市第一人民医院普外科 224000 南通大学附属医院外科综合实验室 226001 南通大学附属医院普外科 226001

目的:探讨let-7f对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用RT-q PCR观察PANC-1、Bx-PC3与正常胰腺细胞HPDE6C7中let-7f和MMP-11的表达差异;采用let-7f模拟物和抑制物调节胰腺癌细胞中let-7f的表达,利用Transwell小室分析let-7f表达... 详细信息

目的:探讨let-7f对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用RT-q PCR观察PANC-1、Bx-PC3与正常胰腺细胞HPDE6C7中let-7f和MMP-11的表达差异;采用let-7f模拟物和抑制物调节胰腺癌细胞中let-7f的表达,利用Transwell小室分析let-7f表达对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;采用RT-q PCR观察干预let-7f对MMP-11表达的影响。结果:RT-q PCR显示胰腺癌细胞中let-7f水平明显低于HPDE6C7细胞(P7细胞。上调胰腺癌细胞中let-7f的表达,可明显抑制其侵袭和迁移(Plet-7f的表达,无显著变化。let-7f抑制MMP-11表达(Plet-7f可能通过调控MMP-11的表达影响胰腺癌的侵袭和迁移,为胰腺癌生物治疗提供新靶点。

关键词：胰腺癌 let-7f MMP-11 侵袭迁移

MicroRNA let-7f-5p促进阿尔茨海默病模型中间充质干细胞存活

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MicroRNA let-7f-5p促进阿尔茨海默病模型中间充质干细胞存活

作者：韩琳琳郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的:骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs可以分化为神经元、神经胶质细胞等多种细胞。它们能够向病变组织归巢,分泌不同的神经营养因子(NTfs)以促进神经再生和神经保护,因此在治疗神经退行性... 详细信息

背景与目的:骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs可以分化为神经元、神经胶质细胞等多种细胞。它们能够向病变组织归巢,分泌不同的神经营养因子(NTfs)以促进神经再生和神经保护,因此在治疗神经退行性疾病方面潜力巨大。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是痴呆的常见形式。MSCs可以通过脑内注射(移植到海马或侧脑室)、颈内或静脉内注射穿过血脑屏障,刺激神经发生,改善动物的学习和记忆缺陷。然而,由于不利的微环境,MSCs移植后的存活率较低。微小RNA(microRNA,miRNA)据报道与细胞存活功能相关。let-7可抑制阿霉素和紫杉醇诱导的细胞凋亡,以及紫外线B诱导的细胞凋亡。然而,其是否参与Aβ诱导的细胞凋亡仍然是未知的。let-7f-5p在MSCs的分化中发挥重要作用,但其对MSCs凋亡的影响尚未有人研究。因此,我们猜想,let-7f-5p可以调节AD模型中植入的MSCs存活情况,本研究旨在验证此假设。材料与方法:1.选取8周龄,25-35g左右的SPf级别C57BL/6J小鼠,利用全骨髓培养法分离培养BMSCs,并连续传代培养至6代以上以备用。2.Aβ处理MSCs 24小时,与未处理组对比,MTT检测细胞活力,Annexin V/PI染色后采用流式分析比较细胞凋亡情况,Western blot检测两组细胞caspase-3,cleaved caspase-3的表达差异,PCR检测细胞let-7f-5水平。3.构建携带let-7f-5p上调、下调、阴性对照载体的慢病毒,分别转染MSCs,PCR检测let-7f-5p水平,然后用Aβ诱导细胞,Annexin V/PI染色后流式采用分析比较细胞凋亡情况。4.预测let-7f-5p与caspase-3基因结合调控区并用双荧光素酶报告基因验证;分别转染Mmu-let-7f-5p-LV,mmu-let-7f-5p-inhibition-LV and mmu-let-7f-NC-LV三组病毒到MSCs,构建let-7f-5p上调组、let-7f-5p下调组、阴性对照组细胞,用Western blot检测三组细胞caspase-3和cleaved caspase-3两种蛋白水平的差异。5.将let-7f-5p上调组、let-7f-5p下调组、阴性对照组MSCs注射入AD小鼠体内,正常小鼠做空白对照,5天后处死动物,做脑组织切片,用H&E,免疫荧光,TUNEL等方法检测移植后细胞凋亡情况。6.采用小动物活体成像技术观察移植后MSCs在AD小鼠体内存活时间。结果:1.Aβ能诱导MSCs早期凋亡,同时活化caspase-3、抑制let-7f-5p;2.上调let-7f-5p表达可部分减弱Aβ诱导的细胞毒效应,而下调let-7f-5p表达则扩大这种细胞毒性作用;3.Caspase-3是let-7f-5p的靶基因,caspase-3的表达与let-7f-5p水平呈负相关;4.注射部位存在不同百分比的死亡细胞,let-7f-5p上调使体内MSCs的凋亡减少;5.体外BLI显示不同数量的MSCs的生物发光强度与细胞数量之间呈线性相关,let-7f-5p过表达使移植后MSCs的存活时间延长。结论:1.Aβ对MSCs具有细胞毒性,可诱导MSCs凋亡,特别是早期凋亡;2.let-7f-5p可以靶向作用于caspase-3基因抑制Aβ诱导的MSCs凋亡,促进细胞存活。3.let-7f-5p可以促进AD动物中移植后MSCs细胞的存活。

关键词：阿尔茨海默病骨髓间充质干细胞 let-7f 细胞移植细胞凋亡

低表达let-7f在肝癌增殖和转移过程中功能机制研究

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低表达let-7f在肝癌增殖和转移过程中功能机制研究

作者：郭东方中国科学技术大学

学位级别：硕士

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,一般发现的时候都是晚期且常规治疗手段如切除、移植肝脏等效果十分有限,导致这种疾病没有很好的治疗疗效,预后差。microRNA是一种短链非编码RNA,通过靶向沉默靶基因行使转录后调控功能。越来越多的... 详细信息

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,一般发现的时候都是晚期且常规治疗手段如切除、移植肝脏等效果十分有限,导致这种疾病没有很好的治疗疗效,预后差。microRNA是一种短链非编码RNA,通过靶向沉默靶基因行使转录后调控功能。越来越多的证据表明microRNA在肝脏的发育、再生、代谢过程中发挥着重要的调控作用。由于microRNA在肿瘤发生发展中基于病理反应会发生微调作用,所以阐明microRNA失调造成的病理机制对于疾病的诊断和治疗都非常有必要。我们在肝癌细胞系中分别转染let-7f的mimics和抑制物,实验结果反应let-7f是一个抑癌基因。随后使用生物信息学算法RNA22预测了let-7f的靶点为c-Met并且通过荧光素酶报告基因检测及免疫印迹验证。我们发现c-Met是let-7f的靶点,并且在肝癌的增殖转移过程中起到促进作用。通过体外实验,let-7f可以抑制肝癌细胞的增殖与转移,这种作用可以部分地因恢复c-Met表达而逆转。我们现在正在进行更深入的生物信息学分析,找到let-7f以及c-Met相关信号通路并且准备在体内实验中更深入地阐明let-7f低表达在肝癌发生发展中的作用。总的来说,我们通过体外实验阐明了let-7f通过靶向抑制c-Met的表达来抑制肝癌的发展。因此,基于let-7f机制的研究可以为肝癌治疗提供潜在的靶点。

关键词：肝癌 microRNA let-7f

miRNA let-7f在胃癌多药耐药中的功能与机制研究

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miRNA let-7f在胃癌多药耐药中的功能与机制研究

作者：魏彦玲第四军医大学

学位级别：硕士

【背景】胃癌细胞发生多药耐药（multidrug resistance，MDR）是导致患者化疗失败的最主要原因，也是胃癌复发和转移的重要原因之一。因此，阐明胃癌多药耐药的分子机制和探索逆转耐药的药物靶点成为肿瘤研究领域的一个重要方向。miRN... 详细信息

【背景】胃癌细胞发生多药耐药（multidrug resistance，MDR）是导致患者化疗失败的最主要原因，也是胃癌复发和转移的重要原因之一。因此，阐明胃癌多药耐药的分子机制和探索逆转耐药的药物靶点成为肿瘤研究领域的一个重要方向。miRNA是近年来发现的一类内源性非编码小RNA分子，其通过与靶基因mRNA的3-UTR区互补结合抑制其翻译或促进其降解，从而实现对多种生物学过程的调节。microRNA广泛参与真核生物的多种生理病理过程，包括肿瘤的增殖、转移和耐药等。let-7f是miRNAlet-7家族成员之一，通常在肿瘤表达中是下调的，被视为肿瘤抑制基因。我们前期研究已经证明了，上调let-7f的表达可以抑制胃癌的侵袭和转移，其可能的分子机制是通过直接抑制转移相关基因MYH-9的表达实现的。大量的研究表明，肿瘤的转移和肿瘤耐药关系密切。故我们大胆预测let-7f可能也参与胃癌多药耐药的调节，目前尚未见有关let-7f参与调节胃癌多药耐药的研究报道，这将是我们下一步的研究重点。【目的】探讨let-7f在胃癌多药耐药中的调节作用及其潜在的分子机制。【方法】 1.通过qRT-PCR，比较胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR与其亲本细胞系SGC7901中microRNAlet-7f表达水平的差异。 2.采用细胞转染方法，将let-7f mimic转染入耐药细胞SGC7901/ADR中，从而上调let-7f的水平。 3.采用MTT法检测SGC7901，SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR对不同化疗药物的药物敏感性。 4.运用阿霉素蓄积与潴留实验比较耐药细胞系SGC7901/ADR转染let-7f mimic后的药物泵出率。 5.利用流式细胞仪（fCM）检测转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的凋亡情况。 6.通过Western Blot检测P-gp、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况。【结果】 1. qRT-PCR结果显示，let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低(P＜0.05)。 2.胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR转染let-7f mimic后，let-7f的表达显著上调(P＜0.05)。 3. MTT法结果显示，SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素（ADR）的半数抑制浓度（IC50）分别为（0.95±0.08）g/L和（5.40±0.28）g/L。上调let-7f的表达可以显著增强耐药细胞SGC7901/ADR对ADR和5-fU的药物敏感性。 4.阿霉素蓄积与潴留实验结果表明：SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后细胞药物泵出率显著降低(P＜0.05)。 5. fCM凋亡检测结果显示，上调let-7f的表达后，SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P＜0.05)。 6. Western Blot结果表明，SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后cleaved Caspase-3及P-gp表达显著降低（p0.05）。【结论】 let-7f的表达水平在胃癌耐药细胞SGC7901/ADR及其亲本细胞SGC7901中存在显著性差异。上调let-7f的表达可使耐药细胞SGC7901/ADR对化疗药物的敏感性增强。let-7f可能是通过减少药物外排和诱导细胞凋亡，增强耐药细胞对化疗药物的敏感性，进而逆转胃癌MDR。综上所述，本研究证实let-7f参与调控胃癌MDR，这将为寻找新的肿瘤基因治疗靶点奠定理论基础。

关键词：胃癌耐药 miRNA let-7f

let-7f靶向抑制A20表达在血管内皮细胞炎症反应中的作用研究

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中国心血管杂志 2020年第4期25卷 351-356页

作者：侯江厚姚颖杰詹晓燕杨奕梅昆明市妇幼保健院产科 650031

目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1... 详细信息

目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达变化情况,RT-qPCR检测不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时let-7f的表达变化规律,Western blot法分析不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时核因子κB(Nf-κB)的核移位情况和ox-LDL对人脐静脉内皮细胞A20表达及Nf-κB通路活化的影响,双荧光素酶报告实验检测let-7f与A20基因的3’-UTR靶向结合,Western blot法检测let-7f对A20表达的调控。结果 20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞培养液中ICAM-1的含量明显升高,血管内皮细胞let-7f的表达明显上调(均为Plet-7f的表达变化均呈现明显的剂量效应关系。此外,20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞Nf-κB向核内移位,随着ox-LDL作用剂量的增加核内Nf-κB明显增多(Pf-κB磷酸化增多,而let-7f能够与A20基因的3’-UTR靶向结合并明显抑制其表达。结论 let-7f可能通过调控Nf-κB信号传导通路的活化参与血管内皮细胞的炎症反应过程,提示let-7f可能成为动脉粥样硬化早期预防和治疗的新靶点。

关键词：动脉粥样硬化氧化低密度脂蛋白人脐静脉内皮细胞 let-7f 胞间粘附分子1

miRNA let-7a和miRNA let-7f早期诊断肝癌的临床价值

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检验医学与临床 2017年第14期14卷 2017-2019页

作者：刘旭斌余德奎邹汉良杨娟陶绪雄李杰广东省深圳市坪山新区妇幼保健院普外科 518122 广东省深圳市龙岗中心医院 518100 武汉大学公共卫生学院武汉430070

目的探讨原发性肝癌患者miRNA let-7a、miRNA let-7f的表达。方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者。采用RT-PCR方法检测miRNA let-7a、miRNA let-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的... 详细信息

目的探讨原发性肝癌患者miRNA let-7a、miRNA let-7f的表达。方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者。采用RT-PCR方法检测miRNA let-7a、miRNA let-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的表达水平。选择同期该院体检的40例健康者作为健康对照者。比较肝癌患者和健康对照者血清miRNA let-7a、let-7f的表达差异。结果肝癌癌变组织miRNA let-7a[(0.18±0.04)×103]、miRNA let-7f[(0.19±0.01)×103]分别较癌旁组织[(1.52±0.11)×103、(0.67±0.10)×103]低,差异有统计学意义(Plet-7a[(0.22±0.06)×103]、miRNA let-7f[(0.15±0.04)×103]较健康对照者[(1.13±0.21)×103、(0.62±0.12)×103]低,差异有统计学意义(Plet-7a、miRNA let-7f在肝癌患者病变组织及血清中异常偏低表达,可作为早期诊断肝癌的重要标志物,为临床诊断提供参考。

关键词：肝癌 miRNA let-7a miRNA let-7f

脑梗死急性期血清let-7f和IL-6水平及其与病情和神经功能缺损程度的相关性

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中国临床研究 2018年第11期31卷 1445-1448,1452页

作者：刘楠于颖赵智凝解放军451医院神经内科陕西西安710054 解放军451医院腔镜科陕西西安710054 解放军451医院检验科陕西西安710054

目的探讨脑梗死急性期患者血清let-7f mRNA表达水平和白细胞介素(IL)-6水平及其与病情和神经功能缺损程度的相关性。方法选择2013年3月至2015年9月神经内科确诊的急性脑梗死患者124例为脑梗死组,选择同期门诊健康体检者95例为对照组;对... 详细信息

目的探讨脑梗死急性期患者血清let-7f mRNA表达水平和白细胞介素(IL)-6水平及其与病情和神经功能缺损程度的相关性。方法选择2013年3月至2015年9月神经内科确诊的急性脑梗死患者124例为脑梗死组,选择同期门诊健康体检者95例为对照组;对脑梗死组患者按照不同发病时间、不同神经功能缺损程度[美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS评分)]分组,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清let-7f mRNA表达,采用酶标仪测定血清IL-6水平。绘制两组ROC曲线并比较let-7f mRNA及IL-6诊断脑梗死的灵敏度、特异度。结果脑梗死组卒中史、高血压病、高胆固醇血症、高甘油三酯血症发生率高于对照组(P均let-7f mRNA水平低于对照组(P均let-7f mRNA水平低于0～4分组(P均765～0. 985),let-7f mRNA AUC为0. 777(95%CI:0. 587～0. 903),两者AUC相近(P> 0. 05),两者诊断脑梗死的灵敏度、特异度相近(P> 0. 05)。结论脑梗死急性期患者血清let-7f mRNA表达水平降低,IL-6升高,其水平与病情和神经功能缺损程度有一定相关性;let-7f、IL-6诊断脑梗死具有较高的灵敏度、特异度,可作为判定急性脑梗死的生物学标志物。

关键词：急性脑梗死微小RNA let-7f 白细胞介素-6 神经功能缺损诊断