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laminin在大白鼠胚脑的分布

神经解剖学杂志 1989年第1期5卷 21-24页

作者：徐慧君武义鸣冯家笙南通医学院人体解剖学教研室

本文用免疫组化ABC法观察了大白鼠胚脑中laminin的分布。结果发现12天胚鼠脑泡全层神经上皮细胞均呈laminin阳性反应,以内、外界膜处较深染。在15天以后的胚鼠,仅室周区神经上皮细胞深染,其它部分可见细胞外基质中淡染的laminin阳性物质... 详细信息

本文用免疫组化ABC法观察了大白鼠胚脑中laminin的分布。结果发现12天胚鼠脑泡全层神经上皮细胞均呈laminin阳性反应,以内、外界膜处较深染。在15天以后的胚鼠,仅室周区神经上皮细胞深染,其它部分可见细胞外基质中淡染的laminin阳性物质;还可见血管从软膜面伸入神经细胞之间分支成网状,其基膜呈laminin阳性反应。从室腔面向软膜面见有laminin阳性反应的放射胶质纤维,在中脑尤以中线处为密集,并向腹外侧放射。19天以后的胚鼠脑则未见放射胶质纤维。正常羊血清孵育的对照片上未见上述结构。实验表明laminin在胚脑中主要存在于神经上皮细胞以及放射胶质纤维中。本文还探讨了laminin与发育中神经细胞迁移的关系。

关键词： laminin 放射胶质纤维胚脑

laminin促进胚胎中脑多巴胺神经元生长发育的体外培养研究

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神经解剖学杂志 1992年第1期8卷 42-45页

作者：陆璐徐慧君武义鸣田美玲南通医学院神经解剖学研究室南通226001

在体外培养中研究了laminin(LN)对大鼠胚胎中脑多巴胺神经元生长发育的影响。将胚胎(E15天)腹侧中脑细胞悬液接种于底部涂有LN的24孔培养板中,培养2—6天后取出。用酪氨酸羟化酶免疫组化ABC法观察多巴胺神经元的生长情况。培养48小时后... 详细信息

在体外培养中研究了laminin(LN)对大鼠胚胎中脑多巴胺神经元生长发育的影响。将胚胎(E15天)腹侧中脑细胞悬液接种于底部涂有LN的24孔培养板中,培养2—6天后取出。用酪氨酸羟化酶免疫组化ABC法观察多巴胺神经元的生长情况。培养48小时后见酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞均有突起伸出,以双极细胞为主;有些突起分枝末端有活跃的生长锥,后者又司发出多根丝状伪足。在培养3到6天的标本中除见有单极和双极酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞外,每孔均见有多极阳性细胞。这些阳性细胞的突起具有较丰富的分枝,突起长度多数长于胞体直径的6倍,最长的可达400μm以上。每孔酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞数可达20到50个,并能见到群聚存在,与不含LN的对照组相比,在酪氨酸羟化酶免疫阳性突起的数量、长度及分枝等方面均有显著差异。实验表明LN可促进体外培养胚胎中脑神经元的生长发育及轴突延伸。

关键词： laminin 多巴胺神经元体外培养

Effects of laminin on hard tissue formation by bone marrow cells <i>in vivo</i>and <i>in vitro</i>

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Journal of Biomedical Science and Engineering 2014年第1期7卷 15-23页

作者： Masataka Yoshikawa Hideyuki Kakigi Takayoshi Yabuuchi Hiroyuki Hayashi Department of Endodontics Osaka Dental University Osaka Japan

The effect of laminin on hard tissue formation using rat bone marrow cells was assessed. Rat bone marrow cells were obtained from femora of 6-week-old male Fischer 344 rats. In this in vivo examination, porous cylindrical hydroxyapatite scaffolds with a hollow center were immersed in 100 mg/ml laminin solution and air-dried. Rat bone marrow cells in 200 ml culture medium at 1 × 106 cells/ml were seeded in the scaffolds. The scaffolds were implanted into the dorsal subcutis of 7-week-old male Fischer 344 rats for 6 weeks. The scaffolds were then removed and examined histologically. For in vitro examinations, 1 × 105 rat bone marrow cells in 2 ml culture medium were then cultured with the addition of dexamethasone and laminin. Rat bone marrow cells were also cultured in laminin-coated culture plates. In vitro examinations showed the effectiveness of laminin for hard tissue formation from the results of biochemical and immunochemical analysis. From the in vivo examination, laminin coating of the scaffolds induced hard tissue in the pores with the cells. It is concluded that laminin is useful for bone formation, as in an in vitro culture study using bone marrow cells, in hydroxyapatite scaffolds in vivo.

关键词： laminin Bone Marrow Cells Scaffold Hydroxyapatite Osteogenesis

laminin蛋白对UBM上BMSCs增殖及其向平滑肌细胞分化的影响

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Laminin蛋白对UBM上BMSCs增殖及其向平滑肌细胞分化的影响

作者：魏桂枝第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景与目的压力性尿失禁(Stress urinary incontinence,SUI)是老年妇女的常见临床疾病,在老年妇女中的发病率高达27.6%,严重影响了广大妇女生活质量[1-3]。SUI的发病机制与女性盆底结构改变密切相关,目前已经得到妇产科学界的重视... 详细信息

研究背景与目的压力性尿失禁(Stress urinary incontinence,SUI)是老年妇女的常见临床疾病,在老年妇女中的发病率高达27.6%,严重影响了广大妇女生活质量[1-3]。SUI的发病机制与女性盆底结构改变密切相关,目前已经得到妇产科学界的重视。手术治疗是SUI的常用治疗方法,悬吊术已成为SUI治疗的一线手术方式[4,5]。目前临床运用的吊带材料包括合成材料和生物材料[6]。合成材料因其具有组织侵蚀性强、瘢痕形成等难以克服的缺陷,不利于临床广泛推广。而经脱细胞处理的生物材料因保留了组织的完整性,且免疫源性低,已被广泛应用于组织工程和再生医学[7],脱细胞膀胱基质(Urinary bladder matrix,UBM)是生物材料的一种,初步研究表明其在SUI的治疗中具有一定的潜能[8],但面临的最大问题是降解周期短,从而导致SUI复发。一些学者提出将干细胞种植于生物材料上进行替代治疗可能是SUI的有效治疗手段[9],然而却存在着负载骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的UBM存在着BMSCs增殖率低以及向平滑肌细胞分化程度低的缺点[10],因此,如何提高UBM上BMSCs的增殖率及向平滑肌细胞分化率是目前亟待解决的热点问题。已有研究报道,laminin蛋白通过其LG端功能域与BMSCs表面的整合素受体相结合从而促进BMSCs的增殖[11],并且有报道称将laminin蛋白加入到培养人的骨髓间充质干细胞培养基中,作为体外扩增人的骨髓间充质干细胞的一种常用方法[12]。同时,laminin蛋白可促进BMSCs向成骨细胞、骨细胞等方向分化[13]。而laminin蛋白不仅是构成UBM材料基底层的基本结构,而且是UBM基底层最重要的功能蛋白[14]。但是UBM上的laminin蛋白是否具有促进负载BMSCs增殖及向平滑肌细胞分化的功能尚不明确。结合我们的前期研究发现经过脱细胞处理后的UBM上laminin蛋白的LG域在基底层面处于向外的游离状态,而通过交联剂交联后可使部分LG域相互融合而丧失功能[15],由此进一步证明laminin蛋白的LG功能域在BMSCs增殖、迁移以及分化中的作用。因此,我们推测ubm上的laminin蛋白也具有促进bmscs增殖及向平滑肌细胞分化的功能,探讨ubm上laminin蛋白的这一功能,对现有的ubm进行改善,从而为sui新型生物材料的构建奠定基础。1实验方法1.1bmscs的制备采用全骨髓贴壁法分离、培养3-4周雌性sd大鼠的bmscs,运用流式细胞学技术检测bmscs的免疫表型,进行干细胞鉴定,将p3代bmscs作为种子细胞。1.2ubm的制备采用机械分离和酶消化等方法对新鲜猪膀胱进行处理,达到脱细胞目的,进行冷冻干燥、消毒灭菌后密封保存,作为组织工程材料。1.3ubm复合材料的制备采用蛋白孵育法,制备ubm+laminin材料以及ubm+anti-laminin材料,进行免疫组化学检测laminin蛋白在复合材料组及单纯ubm组的表达情况。1.***.ldh检测bmscs活性取p3代bmscs,按3000/孔接种于96孔板,实验组为ubm+laminin组、ubm组和ubm+anti-laminin材料,每孔加120μl的细胞培养液,每组设置5个复孔,置于37℃,5%co2及饱和湿度下培养,隔日换液,并观察培养液有无浑浊。分别取培养1d、3d、5d、7d、9d细胞上清液行ldh检测。1.5ckk8检测bmscs增殖实验组分为3组,分别为:ubm+laminin组、ubm组和ubm+anti-laminin组。每组5个附孔,每孔3000个bmscs接种于96孔板,于培养1、3、5、7、9、12、14天的组织行cck8检测。1.6he染色观察bmscs迁移情况将p3代bmscs(1×105/cm2)接种于三组材料上,定期观察培养液有无浑浊,于接种3d、5d、7d、14d的组织行he染色,定向观察bmscs在不同材料上的迁移情况。1.7免疫组化学技术检测bmscs向smc分化情况取接种第14天的组织行免疫学检测bmscs表达α-sma情况,观察bmscs向平滑肌细胞分化情况。1.8统计学分析统计学分析应用spss17.0统计软件,计量资料以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析。2实验结果2.1bmscs的分离、培养及鉴定显微镜下观察原代分离的bmscs呈漩涡状、贴壁生长,杂细胞较多,培养1周后细胞融合达90%。传代后细胞较均一,形态规则,呈长梭型,增殖快。流式细胞学技术检测bmscs表达中胚层来源分子cd29,阳性率为98.0%,表达内皮细胞特征分子cd31,阳性率为4.56%,表达造血干细胞系特征分子cd34,阳性率为3.30%,符合bmscs的特征。2.2ubm的制备肉眼观察ubm材料呈致密均匀的半透明的膜状组织,

关键词：膀胱猪脱细胞基质骨髓间充质干细胞 laminin 增殖迁移分化

Influence of PrP 106―126 on expression of laminin and fibronectin in astrocyte

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Science Bulletin 2008年第14期 2161-2165页

作者： LI YuRong1,2, GUAN LeLuo3, YANG JianMin1, ZHOU XiangMei1, YIN XiaoMin1 & ZHAO DeMing1 1 National Animal Transmissible Spongiform Encephalopathy Laboratory, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100094, China 2 Department of Animal Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China 3 Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, Edmonton, Alberta T6G2P5, Canada

Astrogliosis is a hallmark of prion disease, but the metabolic alterations of astrocytes remain poorly documented. A synthetic peptide corresponding to amino acid 106―126 of the human prion protein (PrP) has been shown to be toxic to neurons. In this study, the effects of PrP 106―126 on astrocytes were investigated in vitro. The proliferation of astrocytes was significantly (P laminin (LN) and fibronectin (FN) was examined at both mRNA and protein levels. The results showed that ex- posure of astrocytes to PrP 106―126 enhanced the expression of LN and FN. The increase of FN in astrocyte cultures required cytokines previously released by activated microglia. This study reveals the expression of LN and FN affected by PrP106―126.

关键词： Prion peptide 106―126 (PrP 106―126) astrocyte microglia laminin fibronectin

Integrin betal mediates hepatocellular carcinoma cells chemotaxis to laminin

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Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2004年第4期3卷 548-551页

作者： Bian-Hong Fu, Ze-Zhi Wu and Cheng Dong Chongqing, China College of Bioengineering, Key Lab for Biomechanics and Tissue Engineering under the State Ministry of Education and College of Resources & Environmental Science , Chongqing University, Chongqing 400044, China Bioengineering Pro- gram, Pennsylvania State University, 205 Hallowell Building, University Park, Pennsylvania 16802-6804, USA

BACKGROUND: Chemotaxis is an important step durin the invasion of carcinoma cells. And integrins are most im portant receptors mediating interaction between cells an extracellular matrix ( ECM). This study was designed t study integrin betal mediating chemotaxis of hepatocellula carcinoma (HCC) cells to laminin (LN). METHODS: A micropipette technique was adopted to in vestigate the effect of blockade of integrin betal on pseudo pod protrusion of HCC cells in response to LN stimulation Chemotactic pseudopod protrusion of a HCC cell was eva luated using a dual-pipette set-up, in which two pipette filled with LN solution were positioned in close contact wit the same cell, and pseudopod protrusion into each pipett was viewed dynamically and recorded with a tape recorder The lengths of pseudopods were measured and plotte against time to obtain a pseudopod growth curve. The in tegrin betal subunit on the surfaces of HCC cells were ana lyzed by flow cytometry. RESULTS: In dual pipette chemotaxis experiment, whe the two pipettes were filled with LN(50 μg/ml, 200 μg/ml) pseudopods extended from the HCC cell into each of th pipettes nearly symmetrically, ie, with nearly identica maximum pseudopod length and similar pseudopod growth curves. Upon addition of anti-CD29 (20 μg/ml) to one o the pipettes, pseudopod protrusion was blocked nearly completely while protrusion into the opposite pipette be came more evidently, with a larger maximum length. Ex pression of integrin betal was up to 95.78% to cells chosen in the experiment. CONCLUSION: Integrin betal subunit was an importan constituent receptor subunit for mediating chemotactic pseudopod protrusion of HCC cell to LN.

关键词： hepatocellular carcinoma integrins laminin chemotaxis micropipette aspiration technique

不同空间排列静电纺丝对RSC96细胞表达NGF及laminin的研究

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中国临床解剖学杂志 2015年第1期33卷 60-63页

作者：曹欣赵利张贤祚秦建强李红吴刚南方医科大学附属小榄医院神经内科广东中山528415 南方医科大学解剖学教研室广东省组织构建与检测重点实验室广州510515 澳门科技大学中医药学院澳门999078 暨南大学理工学院材料科学与工程系广州510632 华南理工大学广州510641

目的研究不同空间排列静电纺丝对雪旺细胞株(RSC96)神经营养因子(NGF)及层粘连蛋白(laminin,LN)的表达情况。方法根据培养条件不同分3组,即平行静电纺丝培养组(A)、随机静电纺丝培养组(B)及膜上培养组(C)培养3天后用Trizol法提取细胞总R... 详细信息

目的研究不同空间排列静电纺丝对雪旺细胞株(RSC96)神经营养因子(NGF)及层粘连蛋白(laminin,LN)的表达情况。方法根据培养条件不同分3组,即平行静电纺丝培养组(A)、随机静电纺丝培养组(B)及膜上培养组(C)培养3天后用Trizol法提取细胞总RNA,用Oligo(d T)逆转录酶得到c DNA。经特定引物PCR扩增,取相同量的逆转录产物进行q PCR反应,检测NGF及LN的表达差异。结果平行静电纺丝组,随机静电纺丝组,膜上培养组上NGF基因表达依次递增,各组间差异明显;LN基因的表达依次递减,各组间差异明显。结论不同空间排列的静电纺丝对RSC96细胞表达NGF和laminin影响不同,平行的静电纺丝有促进细胞向成熟分化的可能。

关键词： RSC96细胞静电纺丝 NGF laminin

α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型及laminin β_1的影响

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时珍国医国药 2011年第5期22卷 1059-1061,1064页

作者：马美刚吴原吴月娟苏婕刘秀颖唐玉兰余璐广西医科大学第一附属医院广西南宁530021

目的研究α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型的影响及对laminin β1表达的干预作用,探讨α-细辛醚抗癫痫的作用机制。方法体外培养海马神经元至第9天,随机将培养细胞分为正常对照组、模型组、模型+α-细辛醚(7.5μg/ml)组、模型+α-细辛醚(1... 详细信息

目的研究α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型的影响及对laminin β1表达的干预作用,探讨α-细辛醚抗癫痫的作用机制。方法体外培养海马神经元至第9天,随机将培养细胞分为正常对照组、模型组、模型+α-细辛醚(7.5μg/ml)组、模型+α-细辛醚(15μg/ml)组、模型+α-细辛醚(30μg/ml)组、模型+2μl无水乙醇组,观察各组神经元的形态学变化,检测各组细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)在12,24,48 h的变化。采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组化检测各组laminin β1在处理后24 h的表达变化。结果①造模后少数神经元会发生迁移、融合,加α-细辛醚组均能减少神经细胞膜LDH的渗透。②在24 h,模型组lamininβ1 mRNA表达增加,各浓度α-细辛醚均能抑制laminin β1 mRNA的表达(均Plaminin β1蛋白在细胞质和细胞外基质表达,平均光密度值:对照组(0.094 7±0.025 86),模型组(0.135 1±0.026 16),模型+30μg/mlα-细辛醚组(0.097 9±0.032 81)。结论α-细辛醚能减少难治性癫痫细胞模型神经元的细胞膜损伤,抑制laminin β1基因及蛋白的过度表达,这可能是α-细辛醚抗癫痫的作用机制之一。

关键词： α-细辛醚 laminin β1 神经元癫痫模型

不同状态巨噬细胞对RSC96细胞NGF及laminin表达的影响

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中国临床解剖学杂志 2013年第3期31卷 321-324页

作者：赵利曹欣欧阳钧余磊张贤祚刘若岩薛旭凯卢智鹇秦建强南方医科大学解剖学教研室广东省组织构建与检测重点实验室广州510515 澳门科技大学中医药学院

目的研究不同活化状态的巨噬细胞与雪旺细胞株(RSC96)共培养条件下雪旺细胞神经营养因子(NGF)及层粘连蛋白(laminin,LN)的表达情况。方法利用Transwell建立大鼠腹膜腔巨噬细胞和RSC96细胞的共培养体系,分别将RSC96细胞与未激活巨噬细胞... 详细信息

目的研究不同活化状态的巨噬细胞与雪旺细胞株(RSC96)共培养条件下雪旺细胞神经营养因子(NGF)及层粘连蛋白(laminin,LN)的表达情况。方法利用Transwell建立大鼠腹膜腔巨噬细胞和RSC96细胞的共培养体系,分别将RSC96细胞与未激活巨噬细胞、激活态巨噬细胞共培养;采用Real-time PCR检测、Western blot分析、以及酶联ELISA测定等研究手段,比较各组NGF及LN的表达差异。结果与未激活巨噬细胞共培养组RSC96细胞NGF表达增强,激活态组表达明显增强;而各组LN表达差异不明显。结论巨噬细胞对RSC96细胞NGF表达有促进作用,受其活化状态的影响,激活状态的巨噬细胞的促进作用更明显;对影响RSC96细胞迁移功能的LN的表达作用不明显,无统计学意义,有待进一步研究。

关键词： RSC96细胞巨噬细胞 NGF laminin 共培养