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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第5期33卷 537-541页

作者：童芹张惠堂杨运桂杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心!上海200233

利用大肠杆菌素释放基因 (kil)能有效地增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理构建了含kil基因的大肠杆菌外泌表达系统。将大肠杆菌本身的周质分泌蛋白β 内酰胺酶和异源周质分泌蛋白点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶作为报告蛋白 ,观察... 详细信息

利用大肠杆菌素释放基因 (kil)能有效地增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理构建了含kil基因的大肠杆菌外泌表达系统。将大肠杆菌本身的周质分泌蛋白β 内酰胺酶和异源周质分泌蛋白点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶作为报告蛋白 ,观察kil蛋白对这两种通常极少分泌到胞外的周质蛋白胞外分泌的促进作用。我们的研究显示 :kil基因表达时 ,β 内酰胺酶的总活性较对照组提高 1倍 ,胞外分泌活性较对照组提高近 4倍。脯氨酰内肽酶的总活性较对照组提高 0 .8倍 ,胞外分泌活性较对照组提高 3倍

关键词： kil基因胞外分泌 β-内酰胺酶脯氨酰内肽酶

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里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶基因在大肠杆菌中的外分泌型表达

里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶基因在大肠杆菌中的外分泌型表达

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作者：文静内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本研究将含有β-甘露聚糖酶基因(ManI)的重组质粒pGEM-ManΙ经EcoRΙ、绿豆芽核酸酶、HindⅢ酶切处理和纯化后，获得目的基因（β-甘露聚糖酶基因）。同时，含有Ω序列和T7启动子以及信号肽OmpT序列的分泌型表达载体pT002经BamHΙ、绿... 详细信息

本研究将含有β-甘露聚糖酶基因(ManI)的重组质粒pGEM-ManΙ经EcoRΙ、绿豆芽核酸酶、HindⅢ酶切处理和纯化后，获得目的基因（β-甘露聚糖酶基因）。同时，含有Ω序列和T7启动子以及信号肽OmpT序列的分泌型表达载体pT002经BamHΙ、绿豆芽核酸酶、HindⅢ酶切处理。将目的基因连接在pT002质粒信号肽OmpT之后，构建表达载体pT002-ManΙ。将表达载体pT002-ManΙ转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，通过筛选获得阳性克隆子。对阳性克隆子进行PCR及酶切鉴定，并对载体中插入的目的基因进行测序。测序结果与GenBank中的里氏木霉RutC-30的β-甘露聚糖酶成熟肽cDNA序列同源性比较，结果二者序列完全一致。将表达载体pT002-ManΙ和质粒pUC18-kil共转化到大肠杆菌BL21（DE3）株，构建了外分泌型表达体系，经IPTG诱导，重组蛋白获得高效表达，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，表达的重组蛋白分子量约为51kD。将培养液浓缩纯化后，以槐豆胶为底物用3,5—二硝基水杨酸法（DNS）测定培养液中β-甘露聚糖酶的活力。纯化后的产物具有明显的β-甘露聚糖酶活性，证明重组β-甘露聚糖酶在分泌过程中得到正确加工。

关键词：里氏木霉RutC-30 β-甘露聚糖酶 kil基因外分泌型表达共表达

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On the Sequence and Function of kil Gene of P1 Phage

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Chinese Medical Sciences Journal 2000年第4期15卷 256-257页

作者：卢圣栋 National Laboratory of Medical Molecular Biology Institute of Basic Medical Sciences CAMS &amp PUMC Beijing 100005 China

Ｔｈｅｋｉｌｗａｓｍｅｎｔｉｏｎｅｄｉｎｔｈｅｐａｐｅｒｒｅｇａｒｄｉｎｇ“ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＩＳ1ｅｘｃｉｓｉｏｎｂｙｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅＰ1ｒｅｆｆｕｎｃｔｉｏｎ”(1 ) .Ｎｏｗ ,ｔｈｅｋｉｌｇｅｎｅ... 详细信息

Ｔｈｅｋｉｌｗａｓｍｅｎｔｉｏｎｅｄｉｎｔｈｅｐａｐｅｒｒｅｇａｒｄｉｎｇ“ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＩＳ1ｅｘｃｉｓｉｏｎｂｙｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅＰ1ｒｅｆｆｕｎｃｔｉｏｎ”(1 ) .Ｎｏｗ ,ｔｈｅｋｉｌｇｅｎｅ’ｓＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｅｄｉｔｓａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ ,ａｎｄｉｔｓｋｉｌｌｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｈａｖｅａｌｓｏｂｅｅｎｆｉｇｕｒｅｄｏｕｔ.ＴｈｅｒｅｆｇｅｎｅｉｓｌｏｃａｔｅｄｃｌｏｓｅｔｏａｎｏｔｈｅｒＰ1ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎ ,ｃｒｅ;ｋｉｌ,ａＰ1ｆｕｎｃｔｉｏｎｌｅｔｈａｌｔｏＥ .ｃｏｌｉ,ｌ

关键词： kil基因 P1 抗菌素 pLSD22 基因序列 rgf基因

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人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 169-170页

作者：龙建银王会信刘莉军事医学科学院基础医学研究所北京100850

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组... 详细信息

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明。

关键词：分泌表达人转化生长因子β1 大肠杆菌共表达培养基重组蛋白改善转运通路 kil基因一级结构免疫印迹分析

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