检索结果-南通市图书馆

Journal of Northeast Agricultural University(English Edition) 2011年第2期18卷 58-64页

作者： ZHU Wenhua XIE Meng LIN Yuheng YANG Mingyu MA Qiumin TIAN Huiqin QU Guiqin College of Food Science and Nutritional Engineering China Agricultural University Beijing 100083 China

The plasmid pGSA1285 was first modified by substituting its GUS sequence with the Chalcone synthase intron fragment from vector pFGC5941 to get the plant silencing expression vector that contained Kanamycin resistance site and was named as pGSA2285. Using PCR-based amplification, two different restriction sites at both ends of tobacco Bax inhibitor-1 （NtBI-I） gene were created, respectively, which made the construction of ihprna gene silencing vector more efficiently. Then, NtBI-1 genes were inserted into Multiple Cloning Site （MCS） of pGSA2285 respectively to form Bax inhibitor-1 ihprna gene silencing vector, named as pGSA4285, containing sense and anti-sense BI-1 sequence which was spliced by chalcone synthase intron. Combined PCR identification and enzyme restriction analyses, the results showed that Bax inhibitor-1 ihprna gene silencing vector had been constructed and transferred into Agrobacterium tumefaciens EHA105 successfully, which laid a foundation for the further study on the function of BI-1 in plant PCD regulation.

关键词： Bax inhibitor-1 silencing vector constrution ihprna

平邑甜茶MhVPE基因ihprna干扰载体的构建及转拟南芥验证

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园艺学报 2011年第12期38卷 2365-2372页

作者：冉昆杨洪强孙晓莉沈伟姜倩倩李强刘智新山东农业大学园艺科学与工程学院作物生物学国家重点实验室国家苹果工程技术研究中心山东泰安271018 山东农业大学信息科学与工程学院山东泰安271018

根据平邑甜茶液泡加工酶(vacuolar processing enzyme)基因MhVPE(GenBank登录号为FJ891065)cDNA序列,设计两对含有酶切位点的特异性引物F1/F2和R1/R2,以pMD-MhVPE质粒为模板,分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段pMD-F和pMD-R。将该... 详细信息

根据平邑甜茶液泡加工酶(vacuolar processing enzyme)基因MhVPE(GenBank登录号为FJ891065)cDNA序列,设计两对含有酶切位点的特异性引物F1/F2和R1/R2,以pMD-MhVPE质粒为模板,分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段pMD-F和pMD-R。将该正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置,构建成了含有内含子发夹结构的ihprna表达载体pART-RNAi-MhVPE。通过农杆菌介导,用花序浸泡法转化拟南芥进行验证,经过抗性筛选和PCR检测,得到17株转基因阳性植株;半定量RT-PCR结果显示所获得的转基因拟南芥植株中AtVPE同源基因的表达量明显降低,表明该干扰载体能够有效抑制VPE基因的表达,MhVPE基因的ihprna干扰载体构建成功,为进一步鉴定该基因的功能奠定了基础。

关键词：平邑甜茶 MhVPE RNA干扰 ihprna 拟南芥

利用ihprna介导的基因沉默培育抗冷糖化马铃薯

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西北植物学报 2007年第3期27卷 479-484页

作者：郭志鸿张金文王蒂陈正华甘肃农业大学农学院兰州730070 甘肃亚盛集团博士后科研工作站北京分站北京100101

为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihprna)载体pBIV;... 详细信息

为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihprna)载体pBIV;采用微束激光穿刺技术转化马铃薯品种,得到了149个转基因株系,其中139个转基因株系在低温贮藏35 d时块茎还原糖含量低于亲本材料。RT-PCR分析表明还原糖含量降低的转基因植株中检测不到AcInv基因mRNA的积累。本研究结果表明以3′UTR作为RNAi载体的干涉片段可以有效地抑制靶标基因mRNA的积累,通过对AcInv沉默可获得抗低温糖化的马铃薯育种材料。

关键词：马铃薯冷糖化酸性转化酶 3’端非翻译区 ihprna

棉花FAD2-1基因的克隆及其ihprna和amiRNA干扰载体的构建

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棉花学报 2011年第2期23卷 189-192,F0003页

作者：赵立群李仁李蔚谭小力杨佑明华金平郭仰东中国农业大学农学与生物技术学院北京100193 江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013

采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了... 详细信息

采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihprna干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。

关键词：棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因 ihprna amiRNA 高油酸

棉花PEPC基因种子特异性ihprna表达载体的构建及鉴定

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基因组学与应用生物学 2010年第2期29卷 233-238页

作者：彭苗苗于霁雯翟红红黄双领李兴丽张红卫喻树迅中国农业科学院棉花研究所安阳455000 西北农林科技大学农学院杨凌712100

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是控制植物体中蛋白质和脂肪酸含量比例的关键酶。本研究从棉花中克隆得到PEPC基因,长度为433bp,并将该基因的正反义片段分别和种子特异性启动子napin启动子(1123bp)、α... 详细信息

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是控制植物体中蛋白质和脂肪酸含量比例的关键酶。本研究从棉花中克隆得到PEPC基因,长度为433bp,并将该基因的正反义片段分别和种子特异性启动子napin启动子(1123bp)、α球蛋白B基因启动子(1149bp)连接,插入到植物表达载体pCADS1341中。经酶切和PCR鉴定,成功的构建了PEPC基因的种子特异性ihprna表达载体pCADSNPSPA和pCADSBPSPA,为后期高含油量棉花材料的选育打下了基础。

关键词： PEPC 种子特异性启动子 ihprna

烟草Bax inhibitor-1基因植物沉默表达载体的构建及对农杆菌的转化

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东北农业大学学报 2010年第1期41卷 67-72页

作者：谢萌朱文华林宇恒杨明瑜马秋敏田慧琴曲桂芹中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

试验首先对质粒pGSA1285进行改造,将pFGC5941质粒的查尔酮合酶的Intron片段取代pGSA1285的GUS片段,构建含有内含子并具有卡那抗性的pGSA2285植物沉默表达载体。同时设计引物、PCR扩增、在BI-1基因两端各加上两个酶切位点,将BI-1基因分... 详细信息

试验首先对质粒pGSA1285进行改造,将pFGC5941质粒的查尔酮合酶的Intron片段取代pGSA1285的GUS片段,构建含有内含子并具有卡那抗性的pGSA2285植物沉默表达载体。同时设计引物、PCR扩增、在BI-1基因两端各加上两个酶切位点,将BI-1基因分别反向、正向插入改造后的质粒pGSA2285Intron片段两端的多克隆位点中,构建得到烟草BI-1基因沉默载体pGSA4285。此沉默质粒经PCR鉴定、限制性酶切分析以及回复动员试验证明已正确构建并成功转入农杆菌,为获得含有BI-1基因沉默烟草植株及其在植物程序性死亡中调控作用的研究奠定试验基础。

关键词： Bax inhibitor 沉默载体 ihprna PCD

TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果遗传转化

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核农学报 2014年第1期28卷 44-51页

作者：高宜峰张菲菲张金文陆艳梅魏桂民马廷蕊甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室甘肃兰州730070 甘肃省于旱生境作物学重点实验室甘肃兰州730070 甘肃农业大学农学院甘肃兰州730070

人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物,连年种植易造成多种病毒病积累。为了寻求一种能同时抵御多种病毒病的方法,本试验以危害人参果的3种主要病毒为研究对象,根据GenBank中烟草花叶病毒(TMV)P126基因、马铃薯M病毒(PVM)CP基因... 详细信息

人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物,连年种植易造成多种病毒病积累。为了寻求一种能同时抵御多种病毒病的方法,本试验以危害人参果的3种主要病毒为研究对象,根据GenBank中烟草花叶病毒(TMV)P126基因、马铃薯M病毒(PVM)CP基因和黄瓜花叶病毒(CMV)2b蛋白基因序列,利用E-RNAi网站提供的分析软件,筛选出含有较多有效小干扰RNA[siRNA,19 nt]的长dsRNA(Long dsRNA)片段作为RNAi的靶序列。用重叠延伸PCR方法将三个靶标片段融合在一起,构建了一种具有内含子(intro)的反向重复结构和嵌合基因的植物RNAi表达载体pCEIHFR。将pCEIHFR通过冻融法导入农杆菌LBA4404并转化人参果,经过草甘膦筛选和PCR检测,确认其中的24株为转基因阳性植株。

关键词：烟草花叶病毒马铃薯M病毒黄瓜花叶病毒 ihprna 转基因人参果

干扰隐花色素Cry1a与Cry1b基因的表达对水稻若干农艺性状的影响

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福建农林大学学报（自然科学版） 2012年第2期41卷 153-158页

作者：李毓庄伟建庄春红王乃元戴飞福建农林大学作物科学学院福建福州350002 福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建福州350002 福建省分子与细胞生物学重点实验室福建福州350002

利用已公布的水稻Cry1a与Cry1b基因序列设计引物,PCR扩增基因部分片段,构建了一个包含2个隐花色素基因片段的ihprna表达载体pSC1301-347-Cry1aCry1b,并通过农杆菌介导转化水稻,以期同时导致这2个基因功能缺失.根据转基因植株主要农艺性... 详细信息

利用已公布的水稻Cry1a与Cry1b基因序列设计引物,PCR扩增基因部分片段,构建了一个包含2个隐花色素基因片段的ihprna表达载体pSC1301-347-Cry1aCry1b,并通过农杆菌介导转化水稻,以期同时导致这2个基因功能缺失.根据转基因植株主要农艺性状的表现,初步分析了Cry1a与Cry1b对水稻重要农艺性状的影响.结果表明,转基因水稻开花期推迟16 d,株高增加明显,粒型显著变长,而其他所观察的性状无明显改变.

关键词：水稻隐花色素 Cry1a/Cry1b基因 ihprna 农艺性状

TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果的遗传转化

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TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果的遗传转化

作者：高宜峰甘肃农业大学

学位级别：硕士

人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物，连年种植容易造成多种病毒病积累。为了培育同时抵御多种病毒病的人参果转基因植株，本试验以危害人参果的主要病毒烟草花叶病毒（TMV）、马铃薯M病毒和黄瓜花叶病毒（CMV）为对象，筛选... 详细信息

人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物，连年种植容易造成多种病毒病积累。为了培育同时抵御多种病毒病的人参果转基因植株，本试验以危害人参果的主要病毒烟草花叶病毒（TMV）、马铃薯M病毒和黄瓜花叶病毒（CMV）为对象，筛选靶标序列，用重叠延伸PCR方法将三个靶标片段融合在一起，构建了3种病毒基因靶标片段融合基因的植物ihprnai载体。 1. TMV、PVM和CMV靶标片段的选择与克隆。根据GenBank中烟草花叶病毒（TMV）P126基因[GI:371786069]、马铃薯M病毒（PVM）CP基因[GI:361071296]和黄瓜花叶病毒（CMV）2b蛋白基因[GI:83282715]序列，通过E-RNAi网站在线分析，筛选出TMV P126基因片段、PVM CP基因片段和CMV2b蛋白基因片段，这些片段含有较多有效小干扰RNA[siRNA，19nt]的长dsRNA片段，可作为构建干扰载体的目的片段。 2.靶标片段的融合及反向重复表达载体的构建。采用重叠延伸PCR技术（splicing-by-overlap extension PCR，SOE-PCR），首先构建融合基因PC和TPC（正向插入片段F），再扩增反向插入片段R。然后将正向片段TPC（F）和反向片段分别插入载体pHANNIBAL所含内含子（intron）两侧，获得重组质粒pHAIFR，再将含intron的正反向片段整体酶切后插入载体pCEPSPS，最终得到含融合基因TPC反向重复的植物表达载体pCEIHFR。 3.人参果的遗传转化。将pCEIHFR通过冻融法导入农杆菌LBA4404，采用叶盘法转化人参果，获得了人参果再生植株，为后续实验奠定了基础。并验证了人参果叶盘法遗传转化体系中最佳的激素组合为ZT和IAA。

关键词：烟草花叶病毒马铃薯M病毒黄瓜花叶病毒 ihprna 遗传转化

棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

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棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

作者：冀荣中国农业科学院

学位级别：硕士

本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色素物质及相对含量变化趋势进行了研究;利用基因工程方法构建CHS及F3’5’H基因的ihprna及amiRNA干扰载体并通过... 详细信息

本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色素物质及相对含量变化趋势进行了研究;利用基因工程方法构建CHS及F3’5’H基因的ihprna及amiRNA干扰载体并通过花粉管通道法转化棕色棉以进行基因功能验证;以RT-白絮、棕1-61为试验材料,通过实时荧光定量PCR结果分析类黄酮合成途径转录因子基因CPC、TT8及TTG1基因在不同纤维发育时期的表达量差异,试图从分子水平解释彩色棉纤维品质及色素物质形成的关系。本研究主要结论如下:1.通过RT-白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段纤维及叶、花、蕾甲醇提取液的NaOH、盐酸-镁粉显色反应和紫外光谱扫描,综合分析以上结果得出结论认为RT-白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段未成熟纤维中均含有黄酮醇或二氢黄酮醇,成熟纤维中则不含有;纤维发育各阶段相关色素物质含量比较结果:棕1-61>棕絮1号>RT-白絮,其中+28DPA后白色棉与棕色棉色素相关物质含量基本一致,棕1-61+60DPA棉纤维色素相关物质含量高于棕絮1号及RT-白絮;白色棉各时期色素相关物质含量差异较小,棕色棉各时期色素相关物质含量变化趋势一致,均在+17DPA达到最大,棕絮1号在+60DPA最低,棕1-61在+28DPA达到最低。2.利用NCBI公布序列信息,设计特异引物,获得了查尔酮合成酶基因CHS及类黄酮3’5’羟基化酶基因F3’5’H的mRNA序列全长;利用pHANNIBAL载体及棉花纤维发育特异启动子SCFP,构建了由组成型启动子CaMV35S及SCFP共同启动的分别靶向CHS及F3’5’H基因的ihprna干扰载体,并通过花粉管通道法进行了遗传转化试验。3.以棉花microRNA序列Ghr-MIR156d作为骨架,利用micrRNA设计平台WMD-3(http://***)设计了靶向CHS及F3’5’H基因的amiRNA前体序列,并通过与植物表达载体重组连接,构建了靶向CHS及F3’5’H基因的amiRNA干扰载体,并通过花粉管通道法进行了遗传转化试验。4.通过实时定量荧光PCR分析了3个不同看家基因Hitone、Actin及Gbpolyubiquitin在RT-白絮和棕1-61+13、+17、+23、+28DPA纤维样品中的相对表达量的差异,获得了适用于在+13DNA至+18DPA纤维基因表达分析的稳定内参基因Gbpolyubiquitin基因;5.通过实时定量荧光PCR分析了3个类黄酮合成途径转录因子基因CPC、TT8及TTG1在RT-白絮和棕1-61+13、+17、+23及+28DPA纤维样品中的相对表达量差异,CPC及TTG1基因在白色棉纤维发育各个时期表达量均高于棕色棉,TT8基因在棕色棉纤维发育各个时期表达量均高于白色棉,结合RT-白絮及棕1-61纤维品质特征,得出结论认为:CPC、TT8及TTG1可能形成类似MYB-bHLH-WD40复合体共同调控天然棕色棉纤维发育,CPC及TTG1可能参与棉纤维发育的产量性状形成的调控途径,而TT8可能参与调控棕色棉色素物质合成途径。

关键词：棕色棉色素物质 ihprna amiRNA 基因表达