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棉铃虫核多角体病毒进化保守性基因iap2基因表达载体的构建及表达

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昆虫知识 2003年第1期40卷 35-39页

作者：张小霞梁振普张忠信丁清泉中国科学院武汉病毒研究所武汉430071

分析棉铃虫核多角体病毒基因组 ,结合GenBank中已知的序列 ,发现iap2基因位于其基因组的BamHⅠ F片段上 ,回收此片段作为模板 ,设计引物 ,通过PCR扩增得到了抗细胞凋亡基因iap2的DNA片段。将扩增产物克隆到pGEM T载体上 ,再进一步将插... 详细信息

分析棉铃虫核多角体病毒基因组 ,结合GenBank中已知的序列 ,发现iap2基因位于其基因组的BamHⅠ F片段上 ,回收此片段作为模板 ,设计引物 ,通过PCR扩增得到了抗细胞凋亡基因iap2的DNA片段。将扩增产物克隆到pGEM T载体上 ,再进一步将插入片段酶切并连接到表达载体pET 2 8a上 ,构建了重组质粒pET iap2。DNA序列分析结果表明 ,克隆得到的DNA序列与所发表序列完全相同。含重组质粒pET iap2的大肠杆菌BL2 1 (DE3)表达了抗细胞凋亡蛋白iap2。

关键词：棉铃虫核多角体病毒进化保守性基因 iap2 基因表达载体构建表达

基因编辑BmNPV iap2和orf59的家蚕抗性素材创制

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基因编辑BmNPV iap2和orf59的家蚕抗性素材创制

作者：董非凡西南大学

学位级别：硕士

家蚕作为具有重要经济价值的鳞翅目昆虫,每年受蚕病危害十分严重,严重制约了我国蚕丝产业的可持续发展。其中家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)所造成的家蚕血液型脓病是最常见的且危害最大的蚕病之一。由于... 详细信息

家蚕作为具有重要经济价值的鳞翅目昆虫,每年受蚕病危害十分严重,严重制约了我国蚕丝产业的可持续发展。其中家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)所造成的家蚕血液型脓病是最常见的且危害最大的蚕病之一。由于传统抗性育种的周期过长,加之抗性多与经济性状成负相关,因此,迫切需要通过分子育种来提高家蚕的抗病性。本研究首先在细胞水平敲除BmNPV凋亡抑制因子iap2和增殖复制相关基因orf59,检测其对BmNPV增殖复制的影响;其次通过转基因技术构建了共同敲除BmNPV iap2和orf59基因的转基因家蚕,对构建的转基因家蚕的基因编辑效率和脱靶效率进行了系统的检测;进而检测了转基因家蚕对BmNPV的抗性效果,以及对BmNPV的DNA复制和基因转录影响,并鉴定转基因家蚕对个体生长发育和经济性状的影响;最后通过转录组数据初步分析转基因家蚕品系调控细胞凋亡,进而抑制BmNPV增殖复制的作用机制。论文取得的主要结果如下:*** iap2和orf59对BmNPV增殖的影响利用CRISPR/Cas9系统构建了单独敲除BmNPV iap2和orf59的表达载体。相对定量检测病毒不同时期基因的转录水平变化,发现敲除BmNPV iap2和orf59,病毒基因的表达量在48h都有了明显的下调。进一步同时敲除BmNPV iap2和orf59,荧光定量分析显示病毒基因转录水平进一步下调,同时对敲除BmNPV iap2之后对宿主凋亡相关基因进行检测,发现caspase家族基因BmICE的表达量有明显上调,而Bcl-2家族基因BmBuffy的表达与对照相比没有明显变化。以上结果表明,可以通过敲除BmNPV抗凋亡基因iap2和复制相关基因orf59引起家蚕细胞凋亡通路变化,从而抑制BmNPV增殖复制,应用于家蚕抗病育种研究。2.基因编辑BmNPV iap2和orf59的抗性素材创制为了进一步分析应用抗凋亡作用提高家蚕抗病毒作用的效率,本研究成功的构建了转基因注射载体piggyBac[U6-sgiap2-U6-sgORF59-3×P3 DsRed afm],通过显微注射技术获得表达sgiap2&sgORF59的转基因家蚕,与表达Cas9蛋白的转基因家蚕杂交之后获得获得双阳性品系Cas9(+)/sgiap2&sgORF59(+)和对照品系Cas9(+)/sgiap2&sgORF59(-)、Cas9(-)/sgiap2&sgORF59(+)和Cas9(-)/sgiap2&sg ORF59(-)。通过T7E1酶切和T克隆测序检测发现双阳性品系在添食BmNPV 12h起就能够有效的编辑靶位点,48h编辑效率达到100%,并持续到120h。靶基因的编辑频率进行统计结果表明,从添食病毒12h开始出现比例较小的大片段缺失,仅有19.4%,到120h大片段缺失的比例达到62.5%。对2个靶位点预测的6个脱靶率最高的脱靶位点经T克隆测序分析未检测到脱靶现象。以上研究表明我们获得了能够特异性的编辑BmNPV基因组的转基因基因编辑家蚕。3.转基因家蚕的抗性鉴定和主要经济性状分析通过对双阳性品系和对照品系在4龄起蚕添食不同剂量的BmNPV,鉴定这两个家蚕品系对BmNPV的抗性水平。结果显示,Cas9(+)/sgiap2&sgORF59(+在添食不同剂量的ODV之后相比于Cas9(-)/sgiap2&sgORF59(-)的发病时间均推迟1天,且最终的死亡率均高于Cas9(-)/sgiap2&sgORF59(-)。SPSS软件进一步分析Cas9(+)/sgiap2&sgORF59(+)家蚕的LD为2.25×10多角体/头,相比对照品系Cas9(-)/sgiap2&sgORF59(-)的LD为2.46×10多角体/头,其抗性提高了近100倍。通过荧光定量PCR检测病毒DNA的拷贝数,结果显示转基因家蚕在4龄起的添毒实验中,病毒DNA的拷贝数从72h起明显低于Cas9(-)/sgiap2&sgORF59(-),在5龄起添食BmNPV后,从96h开始双阳性品系的DNA拷贝数受到了明显的抑制。qRT-PCR检测结果显示双阳性品系的病毒基因ie-1、gp64、vp39、poly在4龄起蚕添食BmNPV后的转录水平从48h起显著低于对照品系,5龄起蚕添食病毒后病毒基因的转录水平则从96h起开始明显低于对照品系。为了分析转基因品系个体发育和经济性状是否受到了影响,本研究对获得的4种杂交品系的幼虫体重和全茧量、茧层量和茧层率进行称重统计分析,结果显示均没有明显变化。以上结果表明,本实验所构建的转基因家蚕不仅可以提高对BmNPV的抗性,而且对其经济性状没有影响。4.转基因家蚕的抗性差异基因分析为了探究转基因家蚕凋亡调控的抗性机制,本研究对Cas9(+

关键词：家蚕 BmNPV 基因编辑 iap2 orf59

褐飞虱细胞凋亡抑制蛋白基因iap2的克隆及表达

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褐飞虱细胞凋亡抑制蛋白基因IAP2的克隆及表达

作者：程丹湖北大学

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褐飞虱(Nilaparvata lugens)是我国和其它亚洲国家的主要水稻害虫之一。由于褐飞虱防治长期以化学防治为主,而杀虫剂的滥用导致了褐飞虱对许多农药产生了抗性,并且造成了环境的严重污染。我们的前期工作表明,褐飞虱若虫在生长发育过程中... 详细信息

褐飞虱(Nilaparvata lugens)是我国和其它亚洲国家的主要水稻害虫之一。由于褐飞虱防治长期以化学防治为主,而杀虫剂的滥用导致了褐飞虱对许多农药产生了抗性,并且造成了环境的严重污染。我们的前期工作表明,褐飞虱若虫在生长发育过程中,中肠细胞存在凋亡和坏死的现象。本课题通过对褐飞虱细胞凋亡基因的研究,为揭示褐飞虱中肠细胞凋亡的分子机理提供一定的参考数据。有关褐飞虱的iaps类似基因的克隆及表达的研究尚未见报道。本研究首先采用简并RT-PCR技术与RACE技术相结合,克隆褐飞虱凋亡抑制基因LAP2。iap2基因的cDNA序列全长为3250bp,含375bp的5’非翻译序列、907bp的3’非翻译序列和一个长度为1968bp的开放阅读框,编码一个含655个氨基酸的多肽,分子量大约是73.1kD,等电点为4.89。该预测的蛋白含有昆虫iap2的标志性结构域‘’BIR1","BIR2","BIR3"和‘’RING".Blast分析表明褐飞虱的iap2氨基酸序列与家蚕、印度跳蚁、切叶蚁等昆虫的iap2一致性在30%以上。其次以β-actin作为内参基因,采用实时定量PCR的方法研究褐飞虱iap2基因在中肠、脂肪体和体壁中的组织表达水平,结果表明,iap2在体壁中的表达水平分别约是脂肪体的10倍,中肠33倍。同时,构建了褐飞虱iap2原核表达载体pET23a-iap2,并在大肠杆菌BL21菌株中成功进行了异源表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blotting检测,检测到的条带与理论值相符,并且表达量较高。本研究为进一步研究iap2蛋白的功能研究奠定了基础,而且为继续研究iaps家族成员在细胞凋亡通路中的作用机制提供了必要的参考数据。本研究结果也为寻找新的防治褐飞虱的措施提供了线索。比如可以将这些凋亡抑制基因或者蛋白作为新靶标来设计药物,抑制这类基因或蛋白的功能,诱导褐飞虱组织细胞的过度凋亡,使其生理功能丧失,以期达到防治褐飞虱的目的。

关键词：褐飞虱转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 快速扩增cDNA末端(RACE) iap2 实时定量PCR 原核表达

BmNPV凋亡相关基因iap2抗病毒机制及应用研究

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BmNPV凋亡相关基因iap2抗病毒机制及应用研究

基因编辑BmNPV iap2创制转基因家蚕抗病毒素材

中国蚕学会第十届青年学术研讨会

作者：黄亮董战旗董非凡陈鹏鲁成潘敏慧西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室

家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）所造成的家蚕血液型脓病是蚕业生产上最常见且危害最大的蚕病之一。凋亡是家蚕抗病毒反应的重要途径,宿主细胞通过自身凋亡从而抑制病毒增殖复制,先前研究表明BmNPV iap2... 详细信息

家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）所造成的家蚕血液型脓病是蚕业生产上最常见且危害最大的蚕病之一。凋亡是家蚕抗病毒反应的重要途径,宿主细胞通过自身凋亡从而抑制病毒增殖复制,先前研究表明BmNPV iap2能够抑制宿主细胞凋亡,从而促进自身增殖复制。因此,本研究通过转基因技术构建了敲除BmNPV iap2基因的转基因家蚕,鉴定其是否能够调控细胞凋亡途径,具有抗病毒能力。本研究首先对构建的转基因家蚕的基因编辑效率和脱靶效率进行了系统的检测,结果显示该转基因品系能够显著编辑靶标基因;进而检测了转基因家蚕对BmNPV的抗性效果,以及对BmNPV的DNA复制和基因转录影响,确定该品系能够抑制BmNPV增殖复制。经济性状显示转基因品系对家蚕个体生长发育和经济性状的没有显著的影响;最后通过转录组数据分析转基因家蚕品系能够调控细胞凋亡途径,进而抑制BmNPV增殖复制的作用机制。该研究为家蚕凋亡途径解析提供了基础支持,为家蚕抗病毒研究提供了指明了一个新的方向。

关键词：家蚕转基因基因编辑 BmNPV iap2

来源： cnki会议评论

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基因编辑BmNPV iap2创制转基因家蚕抗病毒素材

棉铃虫核多角体病毒iap2基因的克隆和序列分析

中国蚕学会2021年学术年会

作者：黄亮董战旗董非凡于兴波胡志刚廖纳川陈鹏鲁成潘敏慧家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室西南大学

细胞凋亡是一种用于清除受病毒感染的宿主细胞的细胞免疫途径。病毒在协同进化过程中已经进化出能抑制宿主细胞凋亡的抑凋亡因子以利于自身增殖。目前杆状病毒的抑凋亡因子虽已被报道,但其发挥的具体功能仍不清楚。我们利用CRISPR/Cas9... 详细信息

细胞凋亡是一种用于清除受病毒感染的宿主细胞的细胞免疫途径。病毒在协同进化过程中已经进化出能抑制宿主细胞凋亡的抑凋亡因子以利于自身增殖。目前杆状病毒的抑凋亡因子虽已被报道,但其发挥的具体功能仍不清楚。我们利用CRISPR/Cas9系统构建了敲除BmNPV iap2的转基因品系,靶位点测序分析发现靶基因的编辑效率达到100%,且转基因品系经济性状并未受到影响。比较其与对照品系的抗病毒能力发现,其半致死剂量相比于对照提高了三个数量级,且发病时间延缓,死亡率显著降低以及病毒各个时期的关键基因表达量显著下调。对转基因品系感染病毒后的凋亡水平进行检测发现,抑凋亡因子Bmiap2的表达水平显著下调,凋亡相关基因BmICE,BmDredd显著上调,宿主的caspase 9酶活性明显上升。综上所述,敲除BmNPV iap2显著抑制了病毒的复制增殖,并且被感染的宿主细胞凋亡水平显著提高。本研究为实用品种的遗传改良提供素材支撑为抗病毒素材创制提供了一个全新的思路。

关键词：家蚕 BmNPV iap2 转基因凋亡

来源： cnki会议评论

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中国病毒学 2001年第4期16卷 338-343页

作者：张小霞张忠信丁清泉中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071

棉铃虫核多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasinle nucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2。该基因位于病毒基因组的BamHI F片段 ,全长 75 3个核苷酸 ,编码 2 5 0个氨基酸 ,预计蛋白质分子量 2 9... 详细信息

棉铃虫核多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasinle nucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2。该基因位于病毒基因组的BamHI F片段 ,全长 75 3个核苷酸 ,编码 2 5 0个氨基酸 ,预计蛋白质分子量 2 9.2kD。在iap2基因上游 - 30～ - 33的位置有一个TATA框 ,在 5 0～ 5 3的位置有一个早期转录信号CAAT ,在终止密码子下游有一个poly(A)信号AATAAA ,HaSNPViap2基因编码一个锌指结构和两个BIR结构。与LdMNPV、AcMNPV、SeMNPV和OpMNPV的iaps及果蝇Diap2和人类Xiap等九种iaps相比较 ,HaSNPViap2与其它的BIR(baculovirusiaprepeater)和RING结构在Cys/His基元 (motif)

关键词：棉铃虫核多角体病毒细胞凋亡 BIRs 锌指结构 iap iap2 基因序列克隆

重组病毒AcMNPV-BmK IT侵染Sf9细胞后凋亡相关基因的表达分析

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植物保护 2015年第1期41卷 23-27,44页

作者：付月君林桃桃梁爱华山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚... 详细信息

将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚未阐明。本试验从草地贪夜蛾Sf9细胞中克隆获得了凋亡相关基因Sfp53,制备了抗体,分析了AcMNPV-BmK IT对Sfp53表达的影响,结果表明被重组病毒感染的细胞所表达的Sfp53时间与表达量与野生型相比都有所提前和提高,说明重组病毒可加速细胞的凋亡;同时通过半定量PCR分析了AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞时病毒抗凋亡基因iap2的表达,结果表明重组型病毒抗凋亡基因iap2表达量减少。以上结果在细胞分子水平上解释了AcMNPV-BmK IT杀虫活性提高的原因。

关键词： AcMNPV-BmK IT 凋亡 Sfp53 iap2

甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的分子进化及功能研究

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甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的分子进化及功能研究

作者：牛国栋中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)

学位级别：硕士

本论文由四章组成。第一章对杆状病毒及泛素系统的研究作了简要的论述。首先从杆状病毒的基础和应用研究两个方面进行了综述，然后单独总结了甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodptera exigua Multi Nucleocapsid Nucleopolyhedrovirus, SeMNPV... 详细信息

本论文由四章组成。第一章对杆状病毒及泛素系统的研究作了简要的论述。首先从杆状病毒的基础和应用研究两个方面进行了综述，然后单独总结了甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodptera exigua Multi Nucleocapsid Nucleopolyhedrovirus, SeMNPV）最近的研究进展，最后对泛素系统进行了阐述。第二章进行了SeMNPV泛素基因的原核表达和序列分析的研究。该基因编码区全长243bp，编码80个氨基酸，预计蛋白质分子量为9.4kD。将这一ubiquitin基因克隆到原核表达载体pET-28a上，用IPTG进行诱导表达，对表达的条件进行了优化，并且用特异性的抗体进行了检测。对不同来源的泛素进行了同源性分析，与真核细胞中的泛素相比较，杆状病毒泛素的氨基酸序列有较大的变化，杆状病毒的泛素基因在分子进化上可能有比较独特的途径。第三章介绍了SeMNPV宿主甜菜夜蛾的一个泛素同源基因。从甜菜夜蛾幼虫中用3'RACE－PCR技术得到了一个新的泛素延伸基因，并对其进行了序列分析和原核表达。根据已知的草地夜蛾（Spodptera frugiperda）的ubiquitin extension gene 5'端核苷酸序列设计引物，应用3'RACE－PCR技术，从甜菜夜蛾脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素基因的cDNA片段。扩增得到的片段全长513bp，3'末端有123bp的非翻译区(UTR)，翻译区编码一个长为129个氨基酸的蛋白质，预测分子量为14.8kD。同源分析表明，此cDNA为ubiquitin 53aa extension gene(ubi53)，在该基因的编码蛋白在泛素后融合了一个核糖体L40蛋白（Ribosomal L40 protein）。将甜菜夜蛾的ubi-53基因克隆到原核表达载体pET-28a上，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，用IPTG进行诱导表达，用异源泛素单克隆抗体进行Western blot检测，证明了原核表达蛋白是目的蛋白。第四章报道了利用酵母双杂交系统研究SeMNPV的Ubiquitin分别和抗细胞凋亡蛋白iap2，iap3在体外的相互作用。实验表明，用Clontech 公司的MACHMAKER GAL4 Two-hybrid system 3，只在低严谨型筛选培养基上得到了一些阳性克隆，这说明Ubiqutin和iap2, iap3在体外可能存在着较弱的相互作用，这种相互作用也可能是因为Ubiqutin和iap利用了酵母中本身存在的E1和E2。需要进一步证明SeMNPV的Ubiquitin和E1，iap和E2有直接相互作用。

关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒泛素泛素延伸基因 iap2 iap3 酵母双杂交系统

AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞对凋亡基因表达和actin重排的影响

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AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞对凋亡基因表达和actin重排的影响

作者：林桃桃山西大学

学位级别：硕士

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus, AcMNPV)的DNA分子约为130 Kbp,含有150多个开放阅读框,是已知昆虫病毒中研究最多且应用广泛的一种杆状病毒。昆虫杆状病毒具有杀虫率高,不产... 详细信息

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus, AcMNPV)的DNA分子约为130 Kbp,含有150多个开放阅读框,是已知昆虫病毒中研究最多且应用广泛的一种杆状病毒。昆虫杆状病毒具有杀虫率高,不产生抗药性,宿主特异性高,对人畜安全,不污染环境,不易造成生态平衡的破坏等特点,是新型生物农药的代表。蝎为了生存和防卫的需要在体内表达一系列毒素蛋白,这些毒素蛋白可特异结合并调控可兴奋细胞膜上的离子通道。其中,蝎昆虫神经毒素(insect-selective scorpion neurotoxin)只作用于于昆虫细胞,对哺乳动物细胞毒害小,因此广泛被用于新型重组病毒杀虫剂的研发。本课题组将从东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)中克隆到的兴奋型蝎昆虫毒素基因(BmK IT)重组到AcMNPV基因组中,抗虫实验结果表明,重组杆状病毒AcMNPV-BmKIT (IE1)杀虫活能力明显显优于野生型杆状病毒,但是其抗虫分子机制尚未阐明。本研究主要分为三个部分：第一部分：重组病毒AcMNPV-BmkIT对草地贪夜蛾Sf9细胞凋亡蛋白Sfp53表达的影响。克隆Sfp53基因并构建了表达质粒pRSETc-Sfp53,制备了抗体。用2.28×1012vp/mL(10MOI)的AcMNPV和AcMNPV-BmK IT分别感染Sf9细胞6-45h, western blot检测细胞内凋亡蛋白Sfp53的表达水平。结果显示,病毒感染细胞12、21、27和33 h时,AcMNPV-BmK IT处理组SfP53蛋白的表达水平分别是AcMNPV处理组的4.16、3.50、4.01和2.56倍;病毒感染细胞39和45 h时,AcMNPV处理组SfP53蛋白表达水平是分别是AcMNPV-BmK IT处理组的5.30和2.91倍,即AcMNPV-BmKIT处理组SfP53蛋白表达水平急剧减少,说明AcMNPV-BmK IT在感染前期提前促进细胞SfP53蛋白的高表达,可加速细胞的凋亡进程。第二部分：重组病毒AcMNPV-BmK IT对病毒抗凋亡基因iap1、iap2、p35转录水平的影响。用2.28×1012vp/mL (10 MOI)的AcMNPV和AcMNPV-BmK IT分别感染Sf9细胞6-72 h,qRT-PCR检测AcMNPV-BmK IT对抗凋亡基因iop1、iap2、p35转录水平的影响。结果显示,在感染36、48和72h时,AcMNPV-BmKIT处理组细胞内iapl基因转录水平是AcMNPV处理组的20.15、6.88和2.35倍,说明AcMNPV-BmK IT促进了iapl转录水平的升高,因该iap1蛋白前期证明是促凋亡的功能,结果暗示iapl转录水平的升高促使细胞凋亡的能力增强,利于病毒子代包涵体的传播。AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞各时间点iap2基因转录水平均低于AcMNPV处理组,且感染细胞36、48和72 h时,AcMNPV处理组中iap2基因转录水平是AcMNPV-BmK IT处理组的15.22、12.00和3.70倍,说明AcMNPV-BmK IT强烈抑制了iap2基因的转录。AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞不同时间点p35基因转录均强于AcMNPV处理组,且感染细胞36、48和72 h时,AcMNPV-BmK IT处理组p35基因转录水平分别是AcMNPV处理组的15.47、22.94和2.61倍,说明AcMNPV-BmK IT促进了抗凋亡基因p35的转录,增强了病毒的抗凋亡能力,推测是此时细胞SfP53蛋白水平提高所致。第三部分：重组病毒AcMNPV-BmK IT对Sf9细胞肌动蛋白缆索结构形成及其在核内聚集的影响。首先,用2.28×1012vp/mL(10 MOI)的AcMNPV与AcMNPV-BmKIT分别感染草地贪夜蛾Sf9细胞2h和3h,免疫荧光分析结果显示,未感染组细胞内没有肌动蛋白缆索结构的形成;在各时间点,AcMNPV-BmK IT处理组细胞内肌动蛋白缆索结构形成量低于AcMNPV处理组,说明AcMNPV-BmK IT对肌动蛋白缆索结构的形成具有削弱作用。接着,用相同病毒滴度的AcMNPV与AcMNPV-BmK IT分别感染Sf9细胞6-46h,结果显示,病毒感染细胞6-25h时,两组病毒处理的细胞内肌动蛋白于细胞内表面都形成腹面聚集体、细胞核内出现少许肌动蛋白;在感染细胞31h和37h时,AcMNPV处理组中有大量肌动蛋白向核内聚集,AcMNPV-BmK IT肌动蛋白向细胞核内聚集程度和聚集时间都远低于AcMNPV处理组;在病毒感染细胞46 h后,AcMNPV处理组肌动蛋白仍

关键词： AcMNPV-BmK IT Sf9细胞肌动蛋白重排 Sfp53 iap1 iap2 p35