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采用itraq方法研究男性弱精子症精子蛋白的差异表达

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武汉大学学报（医学版） 2012年第3期33卷 373-377页

作者：石理华魏茂提李辉孙光天津医科大学第二医院泌尿外科天津300162 武警医学院附属医院肾脏病科天津300162 武警医学院天津300162

目的:探讨精子蛋白在成年男性弱精子症中的差异表达情况。方法:用itraq标记以及二维高效液相色谱/串联质谱联用的方法研究成年男性正常精子以及轻、中、重度弱精症患者的精子蛋白表达情况。结果:以正常组作为参照,本研究共发现1 073个... 详细信息

目的:探讨精子蛋白在成年男性弱精子症中的差异表达情况。方法:用itraq标记以及二维高效液相色谱/串联质谱联用的方法研究成年男性正常精子以及轻、中、重度弱精症患者的精子蛋白表达情况。结果:以正常组作为参照,本研究共发现1 073个蛋白质与弱精症相关。其中,与正常相比,轻度、中度和重度精子表达上调蛋白数为474,232和311,精子表达下调蛋白数为529,800和719,上调和下调的蛋白质数量在弱精子症患者组构成比存在明显差别(Pitraq标记技术能很好的应用于弱精症精子蛋白质组学研究。同时,弱精症中部分精子蛋白质表达以蛋白质数量降低为主,并且其变化幅度与弱精症严重程度相关。

关键词： itraq 弱精子症差异蛋白质组

基于itraq技术对植物乳杆菌FS5-5的耐盐特性分析

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微生物学报 2017年第10期57卷 1461-1470页

作者：王茜茜宋雪飞郭晶晶张颖乌日娜沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110866

【目的】对大酱中耐盐性较好的植物乳杆菌进行蛋白质组学研究,为植物乳杆菌盐胁迫应激机制的研究提供实验数据。【方法】本项研究以筛选自东北传统农家大酱的耐盐性较好的植物乳杆菌FS5-5为研究对象,绘制了其在0%、6.0%、7.0%和8.0%(W/V... 详细信息

【目的】对大酱中耐盐性较好的植物乳杆菌进行蛋白质组学研究,为植物乳杆菌盐胁迫应激机制的研究提供实验数据。【方法】本项研究以筛选自东北传统农家大酱的耐盐性较好的植物乳杆菌FS5-5为研究对象,绘制了其在0%、6.0%、7.0%和8.0%(W/V)Na Cl浓度下的生长曲线,并利用i TRAQ技术研究了其在0%、6.0%、7.0%和8.0%(W/V)Na Cl浓度下的蛋白质表达情况。【结果】植物乳杆菌FS5-5在0%、6.0%、7.0%和8.0%(W/V)Na Cl浓度下到达对数生长期中期的时间点分别为5、10、12和12 h;以差异倍数在1.2倍以上且P<0.05为筛选条件对6.0%、7.0%和8.0%(W/V)Na Cl浓度下与0%进行差异蛋白质的筛选,共筛选出1271个差异蛋白质。这些差异蛋白质主要参与糖代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、核苷酸代谢、应激反应、转运、PTS系统和核糖体代谢等。【结论】植物乳杆菌在高盐浓度下生长与能量合成蛋白质、应激蛋白质以及相容性溶质转运蛋白质的表达上调有密切关系。

关键词：植物乳杆菌FS5-5 盐胁迫 itraq 差异蛋白质表达

itraq联合质谱技术研究孕期惊恐刺激下仔鼠脑发育的差异表达蛋白

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中国妇幼保健 2014年第21期29卷 3505-3508页

作者：杨丽萍陈蕾陈四清李新民高爱社詹向红侯俊林河南中医学院中西医结合基础学科河南郑州450046

目的:应用蛋白组学筛选孕期惊恐刺激下的模型组仔鼠和对照组仔鼠海马组织中的差异表达蛋白质,分析其与脑发育的关系。方法:采集模型组和对照组仔鼠海马组织提取蛋白质,进行蛋白变性、还原及酶解,最后采用核素标记相对和绝对定量技术(iso... 详细信息

目的:应用蛋白组学筛选孕期惊恐刺激下的模型组仔鼠和对照组仔鼠海马组织中的差异表达蛋白质,分析其与脑发育的关系。方法:采集模型组和对照组仔鼠海马组织提取蛋白质,进行蛋白变性、还原及酶解,最后采用核素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,itraq)试剂标记,液相色谱串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)筛选鉴定差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物学分析。结果:质谱共鉴定出惊恐刺激下仔鼠海马组织蛋白质215个,符合条件的差异蛋白质158个,58个蛋白质表达上调,100个蛋白质表达下调。158个差异表达蛋白质共参与150种生物过程、48种细胞组分和52种分子功能。蛋白质交互网络图显示Ctnnb1、Vcl和14-3-3蛋白质家族(Ywhag、Ywhae、Ywhah、Ywhaq、Ywhab)处于网络图主要交叉点。结论:处于蛋白质交互网络主要交叉点位置的蛋白质可能在孕期惊恐刺激下仔鼠脑发育过程中发挥重要作用。

关键词： itraq 蛋白质组学海马组织脑发育

基于itraq技术的不同耐旱性甘薯苗期根系差异蛋白分析

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核农学报 2017年第10期31卷 1904-1912页

作者：汪宝卿解备涛张海燕董顺旭段文学王庆美张立明山东省农业科学院作物研究所山东济南250100 山东省农业科学院山东济南250100

为从蛋白水平揭示不同甘薯品种的苗期耐旱性差异,明确甘薯耐旱性生理机制,以耐旱性强的济薯21(JS)和耐旱性弱的济紫薯1(JH)为材料,采用PEG-6000模拟田间梯度干旱胁迫过程,采用i TRAQ技术开展甘薯苗期根系全蛋白组差异蛋白分析。结果表明... 详细信息

为从蛋白水平揭示不同甘薯品种的苗期耐旱性差异,明确甘薯耐旱性生理机制,以耐旱性强的济薯21(JS)和耐旱性弱的济紫薯1(JH)为材料,采用PEG-6000模拟田间梯度干旱胁迫过程,采用i TRAQ技术开展甘薯苗期根系全蛋白组差异蛋白分析。结果表明,在4个比较组中,共筛选到567个差异表达蛋白,其中上调表达蛋白302个,覆盖率达20%以上的蛋白占鉴定总蛋白数的58.6%。GO分析发现,JS苗期根系差异蛋白主要集中在胁迫响应、非生物刺激响应等生物过程,而JH苗期根系差异蛋白主要集中在糖基复合物代谢和辅酶代谢等生物过程,干旱均主要影响2个品种的细胞质、细胞溶质等细胞组分,2个品种的差异蛋白分子功能均涉及催化活性、氧化还原酶活性等方面。KEGG分析发现,正常条件下,耐旱性强的较耐旱性弱的甘薯品种苗期根系中的过氧化物酶(POD)和肉桂醇脱氢酶(CAD)表达上调;在干旱条件下,次生代谢合成过程中的苯丙烷合成通路中上调表达的差异蛋白最多,耐旱性强的JS苗期根系中主要是胁迫响应相关蛋白,而耐旱性弱的JH苗期根系中主要是能量代谢相关蛋白。总之,干旱对甘薯苗期根系细胞质中次生物质合成和能量代谢影响较大,耐旱性强的甘薯苗期根系氧化还原酶类蛋白表达上调,不同耐旱性甘薯苗期根系在蛋白组学水平上响应干旱的生理调控途径存在明显差异。本研究为甘薯耐旱性品种生理鉴定和耐旱基因发掘提供了线索。

关键词：甘薯干旱苗期根系 itraq

应用8标itraq技术结合2D LC-MS/MS分析大鼠再生肝的差异蛋白质组

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分析测试学报 2010年第5期29卷 421-429页

作者：张一甫秦兆宇刘晓慧林成招贺福初复旦大学生物医学研究院系统生物学实验室上海200032 复旦大学生物医学研究院蛋白质组研究中心上海200032 北京放射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206

首次应用8标itraq(Isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术结合2D LC-MS/MS(Two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry),以部分肝切除的大鼠为模型,全面分析了再生早期(6、12 h)、中期(24、48 h)和晚期(72、120 h)肝脏蛋白质的表达差异。共鉴定357种蛋白质,6个时间点共有60种蛋白质的表达量与对照组(手术切下的正常肝组织)有显著差异。其中,ADH1(Alcohol dehy-drogenase 1)和PRDX1(Peroxiredoxin 1)等的表达变化趋势与已有报道相同,GO(Gene ontology)的蛋白质功能注释提示ADH1、CAT(Catalase)、ENO1(Enolase 1)和APOA1(Apolipoprotein A-Ⅰ)等可能通过影响细胞凋亡和能量供给等方式参与肝再生调控。聚类分析表明,术后12 h和24 h蛋白质的整体表达模式相似,6 h与此二者相近,48 h和72 h相似,而120 h与这些时间点相差最远。该研究验证了8标itraq是并行处理多组样本的有效技术,适合于生理和病理过程多时间点蛋白质组的定量差异分析,可以监控关键分子的动态变化,更易发掘重要的调控靶点分子。该文为进一步探讨肝再生机理提供了有价值的线索。

关键词： itraq 2D LC-MS/MS 肝脏再生差异蛋白质组

应用itraq标记技术结合2DLC-MS/MS分析家蝇幼虫免疫诱导后血淋巴蛋白质组

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四川动物 2014年第3期33卷 370-375页

作者：张勇吴建伟付萍国果贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004

目的分析家蝇幼虫免疫诱导前后血淋巴中的免疫防御相关靶标,探索其先天性免疫机制。方法采用同位素标记及相对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,itraq)结合2D LC-MS/MS对家蝇幼虫诱导前后的血淋巴蛋白... 详细信息

目的分析家蝇幼虫免疫诱导前后血淋巴中的免疫防御相关靶标,探索其先天性免疫机制。方法采用同位素标记及相对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,itraq)结合2D LC-MS/MS对家蝇幼虫诱导前后的血淋巴蛋白质组进行研究。结果与对照组比较研究后共获得237个不同肽段,鉴定到13个具有定量信息的差异蛋白。免疫刺激后显著上调的蛋白有9个,下调蛋白4个(Pitraq标记技术结合2D LC-MS/MS可以有效地分离鉴定昆虫血淋巴蛋白质组,为深入研究差异蛋白的功能奠定了基础。

关键词：家蝇幼虫蛋白质组血淋巴 itraq

利用itraq蛋白质组技术筛选福寿螺抗药相关的候选蛋白

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华中农业大学学报 2019年第6期38卷 116-122页

作者：牟希东徐猛杨叶欣顾党恩罗渡危起伟胡隐昌农业农村部休闲渔业重点实验室/广东省现代休闲渔业工程技术中心/中国水产科学研究院珠江水产研究所广州510380 华中农业大学水产学院武汉430070 中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223

采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,itraq)技术对杀螺剂胁迫下福寿螺肝脏蛋白质组进行研究,以期从蛋白质组学水平了解福寿螺对杀螺剂四聚乙醛的胁迫应答。结果鉴定到108个具有定量信... 详细信息

采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,itraq)技术对杀螺剂胁迫下福寿螺肝脏蛋白质组进行研究,以期从蛋白质组学水平了解福寿螺对杀螺剂四聚乙醛的胁迫应答。结果鉴定到108个具有定量信息的差异蛋白(P<0.05),其中显著上调的蛋白有55个,下调蛋白53个。理化性质分析和GO(gene ontology)注释分析发现,这些蛋白分别具有抗氧化、催化结合、抗菌等功能,并影响福寿螺的细胞结构组成、肌肉收缩、代谢调节和免疫调节,引起神经毒性。研究测定出57个具有不同活性的细胞色素450酶系蛋白(CYP450),推测CYP450活性是福寿螺对四聚乙醛产生抗药性的重要原因。

关键词：福寿螺四聚乙醛 itraq 差异表达蛋白

基于itraq技术的天然富硒与非富硒水稻差异蛋白分析

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中国粮油学报 2019年第11期34卷 1-9页

作者：曾睿张果郑腾达粟阳叶小英贾晓梅朱建清四川农业大学水稻研究所成都611130 都江堰市农业农村局都江堰611830 成都农业科技职业学院成都611130

为解析不同基因型水稻次生代谢差异成因及其富硒品质形成的蛋白质机制提供参考。采用同位素标记相对和绝对定量(itraq)技术对天然富硒与非富硒水稻进行定量蛋白质组学研究,探讨两种基因型水稻蛋白质组表达水平的差异。结果共鉴定到定量... 详细信息

为解析不同基因型水稻次生代谢差异成因及其富硒品质形成的蛋白质机制提供参考。采用同位素标记相对和绝对定量(itraq)技术对天然富硒与非富硒水稻进行定量蛋白质组学研究,探讨两种基因型水稻蛋白质组表达水平的差异。结果共鉴定到定量蛋白质有3161个,差异蛋白为401个,其中上调差异蛋白193个,下调蛋白208个,生物信息学分析得出77个目标差异蛋白,主要分成10类:氧化还原酶、转移酶、异构酶、热休克蛋白、裂解酶、水解酶、连接酶、合成酶、微管蛋白、肌动蛋白。分析表明天然富硒水稻的抗应激、抗氧化、活性氧代谢、碳水化合物和氨基酸代谢较非富硒水稻强,但参与淀粉合成途径作用较非富硒水稻弱。CYS和metE可能是导致两种类型水稻氨基酸差异的2种关键蛋白,OsAPx02、CatC、riPHGPX、HSP70和HSP90可能是调节两种类型水稻抗氧化和抗应激作用的蛋白基因。

关键词：水稻天然富硒非富硒蛋白质组学 itraq

基于itraq技术挖掘猪肾组织高原低氧适应性关键蛋白

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畜牧兽医学报 2021年第5期52卷 1238-1246页

作者：李梦柔韦明邦张健邢璐徐士军肖青青叶幼荣董世雄段梦琪商鹏西藏农牧学院动物科学学院林芝860000

旨在探究高原低氧环境下藏猪与大约克猪肾组织中低氧适应的差异表达蛋白(differentially expressed protein,DEPs)。本试验选择藏猪与大约克猪两个品种无亲缘关系的去势公猪,饲养于海拔3000 m的高原,按自由采食方式饲养至180日龄,每个... 详细信息

旨在探究高原低氧环境下藏猪与大约克猪肾组织中低氧适应的差异表达蛋白(differentially expressed protein,DEPs)。本试验选择藏猪与大约克猪两个品种无亲缘关系的去势公猪,饲养于海拔3000 m的高原,按自由采食方式饲养至180日龄,每个品种随机选择生长情况相近的9头猪采集肾组织。利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,itraq)技术对藏猪和大约克猪肾组织中蛋白差异表达情况进行分析,并对差异表达蛋白进行GO(Gene Ontology)功能注释及KEGG通路分析。结果发现,在两猪种肾脏组织中共获得4370个蛋白质,以FC>1.2或<0.833,P<0.05为筛选条件共筛选出181个DEPs,其中在藏猪中上调的蛋白质有138个,下调的有43个。这些DEPs主要功能富集在HIF-1信号通路、PPAR信号通路、补体和凝血级联信号通路、氧化还原酶活性、碳代谢、血压调节、线粒体等与低氧适应相关的条目和通路上,进一步综合分析后共筛选出5个与低氧适应相关的重要DEPs(CD59、A2M、eNOS、CDKN1B和PGK1)。这些DEPs分别在维持血液动力学、调节能量代谢与生理环境稳态等方面的调节中起到重要作用,为进一步研究猪的高原低氧适应性提供一定理论依据。

关键词： itraq 猪肾低氧适应性