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Expression of the Tribolium castaneum (Coleoptera: Tenebrionidae) hsp83 gene and its relation to oogenesis during ovarian maturation

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Journal of Genetics and Genomics 2010年第8期37卷 513-522页

作者： Jingjing Xu 1, Juan Shu 1, Qin Zhang Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding of the Ministry of Agriculture, College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding of the Ministry of Agriculture College of Animal Science and Technology China Agricultural University Beijing 100193 China

Heat shock proteins （hsp） can protect organisms and cells from thermal damage. In this study, we cloned the full length cDNA encoding the hsp83 protein （the homologue of hsp90） of Tribolium castaneum（red flour beetle）. The isolated cDNA contains the full coding sequence, a partial 5＇ untranslated region of 55 bp and the complete 3＇ untranslated region. We found the hsp83 gene is located on chromosome 5 of the T. castaneum genome. The predicted hsp83 protein sequence has a high similarity （on average 86.77%） with that of other insect species. The expression of the hsp83 gene in the whole body and in the ovary could be induced with heat stress （40℃ for 1 h） in newly hatched （within 3 h post emergence） and mature （10 days post emergence） beetles. Under normal conditions, the hsp83 expression in the ovary is about 3-fold higher than in the whole body at both stages. No significant difference in hsp83 expression was observed between the two ovarian developmental stages regardless if the beetles were treated with heat shock or not. The expression of the hsp83 protein in the whole body could also be induced with heat stress in newly hatched and mature beetles. However, in the ovary, hsp83 was only expressed in the follicle cells of mature beetles and not in newly hatched beetles, regardless if the beetles were treated with heat shock or not. Furthermore, the females were not able to produce mature oocytes after knock-down of the hsp83 expression by injecting dsRNA. These results suggest that the hsp83 protein is involved in protection against heat stress and could be involved in oogenesis during ovarian maturation of T. castaneum.

关键词： hsp83 cDNA cloning Tribolium castaneum expression heat shock

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果蝇hsp83的纯化及其定位

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医学分子生物学杂志 1991年第1期 38-38页

作者：邬堂春

hsp83是果蝇产生的最主要的热休克蛋白之一,具有高度的保守性。与脊椎动物的hsp90类似,hsp83与类固醇受体复合物、癌基因的酪氨酸激酶家族的蛋白产物有暂时的联系;也有人认为它是一种肌动蛋白结合蛋白。作者选用果蝇S;细胞进行培养,在3... 详细信息

hsp83是果蝇产生的最主要的热休克蛋白之一,具有高度的保守性。与脊椎动物的hsp90类似,hsp83与类固醇受体复合物、癌基因的酪氨酸激酶家族的蛋白产物有暂时的联系;也有人认为它是一种肌动蛋白结合蛋白。作者选用果蝇S;细胞进行培养,在33℃条件下进行热休克处理,用非电离性去污剂溶解细胞,采用

关键词： hsp83 果蝇热休克

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大螟热激蛋白83基因克隆及序列分析

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应用昆虫学报 2014年第5期51卷 1246-1254页

作者：孙猛陆明星汤小天杜予州扬州大学园艺与植物保护学院扬州225009

【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。hsp83家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正确折叠及胁迫信号传递有着重要意义。本研究旨在克隆大... 详细信息

【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。hsp83家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正确折叠及胁迫信号传递有着重要意义。本研究旨在克隆大螟hsp90家族hsp83基因的c DNA及基因组全长序列,分析其基本特性。【方法】应用RT-PCR及RACE技术从大螟中克隆hsp83基因的c DNA序列;获取基因组序列,进行基因组验证,并与c DNA序列比较分析其有无内含子;进行系统发育分析。【结果】大螟hsp83基因被命名为Sihsp83(Gen Bank登录号:KM077137),长度为2 496 bp,开放阅读框长2 154 bp,编码717个氨基酸,推测分子量为82.6 ku。该基因编码的氨基酸序列中含有5个hsp90家族保守序列,在C-末端存在细胞质定位信号。大螟hsp83基因组序列长度为2 218 bp(Gen Bank登录号:KM077138),不含内含子。在系统发育树中,大螟hsp83与其他夜蛾科昆虫的hsp90家族聚为一支。【结论】获得的大螟hsp83基因是hsp90基因家族成员;大螟的hsp83是细胞质热激蛋白,具有很高的保守性。

关键词：大螟 hsp83 基因克隆序列分析

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昆虫双杂交实验中家蚕Bmhsp83和BmMAD3蛋白引起的假性现象

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环境昆虫学报 2022年第1期44卷 170-176页

作者：方康彭海涛胡琼波华南农业大学植物保护学院广州510642

昆虫双杂交(Insect two-hybrid, I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法。本研究利用Gateway克隆技术,构建了家蚕Bombyx mori蛋白Bmhsp83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体;然后,将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细... 详细信息

昆虫双杂交(Insect two-hybrid, I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法。本研究利用Gateway克隆技术,构建了家蚕Bombyx mori蛋白Bmhsp83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体;然后,将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细胞,检测其发光值。结果表明,转染pIE2-AD-Bmhsp83或pIE2-AD-BmMAD3载体与转染pUAS-Luc的对照组的细胞发光值无明显差异,报告基因未被激活;分别单独用pIE2-DBD-Bmhsp83或pIE2-DBD-BmMAD3质粒转染细胞时,发光强度显著增加,报告基因被激活,说明Bmhsp83和BmMAD3造成了假阳性结果;并且当细胞共转染pIE2-DBD-Bmhsp83和pIE2-AD-BmPDIA5、pIE2-DBD-BmMAD3和pIE2-AD-BmMAN1时报告基因的激活反应显著提高,提示Bmhsp83与BmPDIA5、BmMAD3与BmMAN1存在互作关系从而引起阳性反应,且与Bmhsp83和BmMAD3的假阳性形成叠加效应;然而,当共转染pIE2-AD-Bmhsp83和pIE2-DBD-BmPDIA5、pIE2-AD-BmMAD3和pIE2-DBD-BmMAN1时报告基因未被激活,显示pIE2-AD-Bmhsp83/BmMAD3导致了假阴性。Bmhsp83和BmMAD3引起I2H假性现象可能与该二种蛋白具有转录激活功能有关,当其与DNA结合结构域(DNA binding domain, DBD)融合表达时,该融合体即具备了DNA结合及转录激活两个功能,因而可以启动下游报告基因的表达;反之,当其与转录激活结构域(AD)融合表达时,则阻止了他们各自与BmPDIA5、BmMAN1蛋白的互作。本研究结果为那些利用I2H体系研究具有转录激活功能的蛋白质相互作用提供借鉴。

关键词：昆虫双杂交假性家蚕 hsp83 MAD3

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黑腹果蝇保幼激素反应区(JHRR)与核蛋白结合能力调控的分子机制

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昆虫学报 2016年第12期59卷 1325-1331页

作者：何倩毓张原熙黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 大庆市环保局环境监测中心站黑龙江大庆163316

【目的】保幼激素反应区(juvenile hormone response region,JHRR)是在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Krüppel homolog 1(Kr-h1)启动子转录调控区中鉴定获得的长120 bp的核苷酸序列。本研究旨在检测果蝇JHRR中3个类E-box序列(2个B box和1个C box)对JHRR核蛋白结合能力的影响,以及保幼激素(juvenile hormone,JH)、JH受体Met(Methoprene-tolerant)和热激蛋白hsp83对JHRR核蛋白结合能力的调控。【方法】利用凝胶迁移阻滞(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)技术分析果蝇JHRR中2个B box或1个C box突变后JHRR与Kc细胞中核蛋白的结合情况;提取游走早期JH滴度较高时期JH缺失果蝇(Aug21-GAL4>UAS-Grim)、Met/Gce双缺失果蝇(Met^(27)gce^(2.5k))、Met超表达果蝇(Lsp2-GAL4>UAS-Met-V5)以及hsp83纯合突变果蝇(hsp8308445)脂肪体组织中的核蛋白,利用EMSA技术分析它们对JHRR核蛋白结合能力的调控情况。【结果】EMSA检测结果表明,B box或C box突变后均可降低JH促进的JHRR与Kc细胞中核蛋白的结合,且C box的效果更强;JH缺失果蝇、Met/Gce双缺失果蝇脂肪体组织中核蛋白与JHRR的结合几乎检测不到,而在hsp83纯合突变果蝇脂肪体组织中核蛋白与JHRR的结合显著下降。相反,JHRR与核蛋白的结合在Met超表达果蝇中显著增强。【结论】B box和C box对JHRR与核蛋白结合是必需的,且JHRR与核蛋白的结合依赖于JH和Met,并且受hsp83的调控。

关键词：黑腹果蝇保幼激素 Met JHRR hsp83 核蛋白结合

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