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hsc70-Auxilin复合物的拉伸分子动力学模拟

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生物信息学 2014年第2期12卷 110-116页

作者：周雷徐利楠周小红薛友林李辉宋有涛辽宁大学环境学院辽宁沈阳110036 辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁大学轻型产业学院辽宁沈阳110036

hsc70与auxilin蛋白组成的系统是Hsp70/Hsp40分子伴侣系统家族的一员,在热休克反应中发挥重要作用。本文为得出auxilin蛋白J结构域的关键氨基酸,首先采用由二硫键交联的hsc70 R171C与auxilin D876C的复合物结晶结构作为初始模型,进行分... 详细信息

hsc70与auxilin蛋白组成的系统是Hsp70/Hsp40分子伴侣系统家族的一员,在热休克反应中发挥重要作用。本文为得出auxilin蛋白J结构域的关键氨基酸,首先采用由二硫键交联的hsc70 R171C与auxilin D876C的复合物结晶结构作为初始模型,进行分子动力学模拟,通过比较平衡后的结合部位发现,将形成二硫键的氨基酸突变为原来的氨基酸结构在结合位点上与生化结果较为相近,之后利用此结构通过拉伸动力学模拟分析了auxilin蛋白J结构域与hsc70的ATPase功能域的解离过程,并探讨了hsc70与auxilin蛋白之间的相互作用力。结果表明位于HPD loop上的His874,Asp876,Thr879,螺旋Ⅲ上的Glu884,Asn895,Asp896,Ser899,Glu902,Asn903为关键氨基酸,这些数据符合之前核磁共振实验证实的T抗原J结构域的HPD基序和螺旋Ⅲ与hsc70的ATPase功能域之间的相互作用。

关键词： Auxilin J-domain hsc70 蛋白相互作用拉伸分子动力学

人源热休克蛋白hsc70与HPV16型E7融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

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河北医药 2008年第9期30卷 1279-1281页

作者：侯红军李淑媛赵民朝河北省医疗保险中心石家庄市050051 河北医科大学第三医院

目的克隆人热休克蛋白hsc70的N端具有ATPase活性的结构域(简称为A基因)与HPV16型E7的融合基因,在大肠杆菌中表达,并纯化获得有生物活性的AE7融合蛋白。方法利用PCR方法扩增获得A基因片段,插入原核表达载体pET29b中,再通过PCR方法扩增HP... 详细信息

目的克隆人热休克蛋白hsc70的N端具有ATPase活性的结构域(简称为A基因)与HPV16型E7的融合基因,在大肠杆菌中表达,并纯化获得有生物活性的AE7融合蛋白。方法利用PCR方法扩增获得A基因片段,插入原核表达载体pET29b中,再通过PCR方法扩增HPV16型E7基因片段,插入A基因的3′端,构建原核表达质粒pET29b-AE7,并转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物经离子交换层析和金属螯合层析纯化后,在一定的剂量下皮下免疫小鼠,检测对HPV-16的E7基因感染的预防及治疗作用。结果重组质粒pET29b-AE7经DNA序列测定确认。SDS-PAGE检测,表达产物分子量为66kD,大部分为包涵体。纯化后产物经SDS-PAGE电泳分析纯度>90%。纯化产物AE7在一定的剂量下皮下免疫小鼠,对HPV-16的E7基因的感染有预防及治疗作用。结论AE7融合蛋白的获得为进一步临床研究奠定基础。

关键词：人乳头瘤病毒(HPV) 热休克蛋白 hsc70 E7 融合蛋白

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热应激致hsc70出入核与细胞凋亡的关系

热应激致Hsc70出入核与细胞凋亡的关系

肿瘤相关抗原hsc70在食管癌中的鉴定与表达研究

中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：陈洪博段滇宁鲍恩东龙岩学院生命科学学院南京农业大学动物医学院

(目的)本研究旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(Constitutive or Cognate HSPs,hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。(方法)以体外高温(42℃)作为热应激模型温度,通过转染hsc70 si RNA抑制hsc70表达,Western blot检测检测细胞浆和细... 详细信息

(目的)本研究旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(Constitutive or Cognate HSPs,hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。(方法)以体外高温(42℃)作为热应激模型温度,通过转染hsc70 si RNA抑制hsc70表达,Western blot检测检测细胞浆和细胞核内hsc70表达,ELISA检测细胞培养液LDH浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。(结果)结果表明,正常H9c2心肌细胞浆hsc70表达量较高,细胞核中表达量很低,细胞浆和细胞核Hsp72表达量非常低;热应激后细胞浆hsc70表达量无显著差异,而细胞核hsc70热应激100 min后极显著升高(P hsc70抑制表达后,细胞浆hsc70水平显著降低,热应激后hsc70入核明显减少,但仍然有入核现象;hsc70抑制表达对细胞浆和细胞核Hsp72表达无显著影响。与热应激组相比,热应激+hsc70 si RNA组LDH表达量呈升高趋势,热应激100 min两组出现显著差异(P hsc70抑制表达后H9c2细胞在热应激后更容易发生凋亡,而且在热应激30 min和100 min内,两组之间存在显著差异(P hsc70出入细胞核,hsc70抑制表达后热应激诱导hsc70入核显著降低,细胞损伤加重,细胞凋亡升高。

关键词：热应激 hsc70 出入核细胞凋亡

来源： cnki会议评论

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实用肿瘤学杂志 2012年第2期26卷 137-140页

作者：高红军岳志刚周艳秋许慧段志玲郑朝旭煤炭总医院检验科北京100028 中国医学科学院肿瘤医院腹部外科

目的探索食管鳞状细胞癌的肿瘤相关抗原.方法提取食管鳞状细胞癌组织蛋白,用20例食管癌患者血清和20例健康对照血清分别作为检测抗体进行Western blot分析,比较分析二者的差异,将差异蛋白酶解后用质谱进行鉴定分析;用免疫组化方法对... 详细信息

目的探索食管鳞状细胞癌的肿瘤相关抗原.方法提取食管鳞状细胞癌组织蛋白,用20例食管癌患者血清和20例健康对照血清分别作为检测抗体进行Western blot分析,比较分析二者的差异,将差异蛋白酶解后用质谱进行鉴定分析;用免疫组化方法对鉴定的肿瘤相关抗原进行验证.结果食管癌血清的阳性信号比较多,其中70kDa的蛋白阳性率为40%（8/20）,而健康对照血清阳性率为0%（0/20）,该蛋白被鉴定为hsc70或称HSPA8.免疫组化结果显示hsc70在食管癌组织主要表达于细胞浆和细胞核,且表达明显高于癌旁正常组织.结论联合免疫印记和质谱技术可以鉴定肿瘤相关抗原;hsc70可能是食管癌发生的重要参与蛋白,可能是食管癌诊断和治疗的关键靶分子.

关键词：食管鳞状细胞癌肿瘤相关抗原 hsc70

大鼠增龄过程中髓核组织hsc70的表达及其意义

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岭南现代临床外科 2010年第5期10卷 361-363页

作者：叶伟徐康朱伟荣杜开利张新亮黄东生李春海中山大学孙逸仙纪念医院脊柱外科广东广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院普外科实验室广东广州510120

目的探讨在增龄过程中SD大鼠髓核组织中hsc70的表达及其意义。方法 3月龄、12月龄、24月龄SD大鼠各8只,HE染色检测椎间盘组织的退变情况;RT-PCR法测定髓核组织中hsc70的表达;Western blot检测髓核组织中hsc70的表达。结果大鼠增龄过程... 详细信息

目的探讨在增龄过程中SD大鼠髓核组织中hsc70的表达及其意义。方法 3月龄、12月龄、24月龄SD大鼠各8只,HE染色检测椎间盘组织的退变情况;RT-PCR法测定髓核组织中hsc70的表达;Western blot检测髓核组织中hsc70的表达。结果大鼠增龄过程可部分反映椎间盘的退变变化;RT-PCR和Western blot均显示hsc70在不同年龄组SD大鼠髓核中均有表达,且24月龄(1.26±0.21;0.56±0.07)表达较3月龄组(1.60±0.30;0.68±0.07)表达明显降低(Phsc70变化(1.49±0.29;0.61±0.09)无差异(P>0.05;P>0.05)。结论 hsc70在椎间盘退变过程中的表达降低,提示hsc70的降低可能与椎间盘退变的发展进程有关。

关键词：椎间盘退变增龄 hsc70

反义hsc70与mtP53和肿瘤耐药关系的探讨

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肿瘤 2001年第5期21卷 324-326,333页

作者：范云霞赵玫黄常志施一江袁兴华徐枫杜菲中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所北京100021

目的　观察反义hsc 70RNA对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响 ,探讨其与突变型p5 3稳定性和肿瘤耐药间的关系。方法　利用DNA重组技术将人hsc70cDNA片段反向克隆至真核表达载体pLXSN中 ,构建反义人hsc70真核表达质粒pX Ahsc70。用脂质体... 详细信息

目的　观察反义hsc 70RNA对MCF7/Adr人乳腺癌细胞耐药性影响 ,探讨其与突变型p5 3稳定性和肿瘤耐药间的关系。方法　利用DNA重组技术将人hsc70cDNA片段反向克隆至真核表达载体pLXSN中 ,构建反义人hsc70真核表达质粒pX Ahsc70。用脂质体方法将重组质粒转染至MCF7/Adr人乳腺癌细胞内 ,以PCR确定转染细胞中外源DNA存在后 ,Westernblot检测hsc70蛋白的抑制程度。MTT法检测细胞耐药性的影响。p5 3稳定性实验分析反义hsc70RNA对突变型p5 3半衰期的改变。结果　经G418筛选获得稳定表达反义hsc70RNA的细胞株MAc70 ,与空载体MAX细胞相比 ,hsc70蛋白表达下降 42 % ,细胞耐药性显著下降。p5 3稳定性实验表明 ,其胞内突变型p5 3含量下降 ,半衰期缩短 ,稳定性明显下降。结论　反义hsc70RNA能够明显降低hsc70蛋白表达 ,导致乳腺癌细胞的耐药性下降 ,提示hsc70可能通过增强突变型p5 3稳定性的途径而参与MCF7/Adr乳腺癌细胞的耐药。

关键词： hsc70 mtP53 反义RNA 乳腺癌

TGEV膜蛋白协同hsc70分子介导病毒入侵宿主细胞

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中国预防兽医学报 2023年第4期45卷 441-441页

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)属于α-冠状病毒,是引起仔猪腹泻脱水的常见病原之一。因其是现有的猪肠道冠状病毒中受体较为明确的成员,所以是研究冠状病毒入侵机制的理想模型。冠状病毒的纤突蛋白(S)... 详细信息

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)属于α-冠状病毒,是引起仔猪腹泻脱水的常见病原之一。因其是现有的猪肠道冠状病毒中受体较为明确的成员,所以是研究冠状病毒入侵机制的理想模型。冠状病毒的纤突蛋白(S)蛋白属于I类病毒糖蛋白,有识别并结合宿主细胞受体的功能,负责病毒粒子的入侵,即吸附和内化过程。冠状病毒膜蛋白(M)是病毒包膜的主要成分,在病毒生命周期中发挥着重要作用。目前对冠状病毒M功能的研究主要聚焦于病毒粒子的组装和出芽阶段,先前有研究表明针对TGEV M的抗体具有一定的中和效果,并利用电镜观察到M的C-末端位于病毒粒子的包膜外表面,这为M参与病毒的入侵过程提供了可能,那么M能否在病毒的入侵过程中发挥作用?以及具体作用机制是什么?

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TGEV 猪肠道病毒粒子纤突蛋白冠状病毒宿主细胞 hsc70

Identification of heat shock cognate protein 70 gene （Alhsc70） of Apolygus lucorum and its expression in response to different temperature and pesticide stresses

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Insect Science 2016年第1期23卷 37-49页

作者： Yang Sun Jing Zhao Yang Sheng Ying-Fang Xiao Yong-Jun Zhang Li-Xin Bai Yongan Tan Liu-Bin Xiao Guang-Chun Xu Institute of Plant Protection Jiangsu Academy of Agricultural Sciences Nanjing China Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests Institute of Plant Protection Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing China Entomology and Nematology Mid-Florida Research and Education Center University of Florida Apopka Florida USA

Heat shock cognate protein 70 （hsc70） is a very important stress-resistance protein of insects against environmental stresses. We employed fluorescent real-time quan- titative polymerase chain reaction and Western-blot techniques to analyze the transcrip- tional and translational expression profiles of AIhsc70 under extreme temperature （4℃ and 40℃） or 4 pesticide stresses in Apolygus lucorum. The results showed that the expres- sion of AIhsc70 were significantly induced by cyhalothrin or extremely high temperature （40℃） in both transcriptional and translational levels （P 〈 0.05）, while the transcriptional and translational level of AIhsc70 decreased significantly in treatments of chlorpyrifos or extreme cold temperature （4℃）（P 〈 0.05）. Moreover, afterApolygus lucorum treated by imidacloprid or emamectin benzoate, the expression of AIhsc70 was only up-regulated significantly at the transcriptional level （P 〈 0.05）, although obviously up-regulated at the translational level of AIhsc70. Therefore, this study confirmed that the Alhsc70 gene played important roles in response to both temperature and pesticide stresses, especially for cyhalothrin or extremely high temperature （40℃）. In addition, the significant polynomial regression correlations between temperature and the Alhsc70 expression level were shown in all the nymph and adult stages （P 〈 0.01）, indicating temperature was an important factor to affect the relative expression of Alhsc70.

关键词： Apolygus lucorum expression files extreme temperature hsc70 pesticide

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灰飞虱Lhsc70基因表达特性及功能

中国水稻科学 2015年第4期29卷 424-430页

作者：王利华单丹方继朝江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014

灰飞虱是我国主要水稻害虫之一,在各水稻种植区均有分布,对环境具有较强的适应性。HSP70作为分子伴侣在生物生长发育和外界刺激应激中发挥重要作用。hsc70是HSP70家族重要成员之一,具有组成型表达特性。为探讨灰飞虱对环境适应的分子机... 详细信息

灰飞虱是我国主要水稻害虫之一,在各水稻种植区均有分布,对环境具有较强的适应性。HSP70作为分子伴侣在生物生长发育和外界刺激应激中发挥重要作用。hsc70是HSP70家族重要成员之一,具有组成型表达特性。为探讨灰飞虱对环境适应的分子机理,本研究采用qPCR、RNA干涉等技术研究了灰飞虱hsc70的表达特性和功能。结果表明,灰飞虱hsc70基因长1971bp,命名为Lhsc70,编码656个氨基酸,推测分子量为71.6kD,等电点为5.46,含HSP70家族3个标签序列,具有HSP70典型结构特征。系统进化分析表明Lhsc70与褐飞虱hsc70同源性最高,达到99%。Lhsc70基因的表达与龄期有关,1~5龄若虫的表达量无显著差异,但雌成虫的表达量明显高于若虫和雄成虫;10、16、22、26、30、34、38、42℃下,雌成虫Lhsc70基因表达量变化不显著。RNA干涉抑制雌成虫Lhsc70基因表达,导致其耐热性下降,而产卵量变化不大。这些结果说明灰飞虱Lhsc70为组成型热激蛋白70,与组成抗性有关,与繁殖关系不大,且不受热激诱导。

关键词：灰飞虱 hsc70 表达量 RNAi 组成抗性