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作者：李文艳陕西师范大学

学位级别：硕士

核内不均一核糖核蛋白(Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hn RNPs)是一类RNA结合蛋白,可以通过与相应的靶标RNA结合,在RNA转录调控过程中发挥重要作用。hn RNPA/b亚家族蛋白是hn RNPs家族中最丰富的RNA结合蛋白,是形成核糖核... 详细信息

核内不均一核糖核蛋白(Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hn RNPs)是一类RNA结合蛋白,可以通过与相应的靶标RNA结合,在RNA转录调控过程中发挥重要作用。hn RNPA/b亚家族蛋白是hn RNPs家族中最丰富的RNA结合蛋白,是形成核糖核蛋白复合物的核心。而hn RNPA2/b1是hn RNPA/b亚家族的一名成员。hn RNPA2/b1通过其外显子的可变剪接产生四种异构蛋白hn RNPA2、hn RNPb1、hn RNPA2b和hn RNPb1b,这些异构蛋白在结构组成上较为类似,但是却具有不同的功能。此外,在hn RNPA2/b1 N端含有两个RNA识别序列(RNA recognition motifs,RRM),分别为RRM1(RNA recognition motif 1)和RRM2(RNA recognition motif2),这两个区域高度保守,是自身抗体识别的主要抗原表位区,同时与RNA-蛋白质相互作用有关,并且参与调节RNA的可变剪接。在hn RNPA2/b1 C端含有一个富含甘氨酸的低复杂性(Gly-rich low-complexity area,LC)区域,该区域包括病毒样结构域(Prion-like domain,Pr LD)、精氨酸-甘氨酸-甘氨酸框(Arginineglycine-glycine box,RGG)及含有M9的核定位信号(M9 nuclear localization signal,PY-NLS),LC区域与蛋白质-蛋白质相互作用、RNA结合和核定位等过程密切相关。hn RNPA2/b1可以通过这些结构域与DNA、RNA、转录因子和受体蛋白等结合,从而在多种生理和病理过程中发挥重要作用。单克隆抗体对抗原的识别具有较高的特异性和亲和力,是目前研究蛋白生物学功能的重要工具。尽管目前有商业化的hn RNPA2/b1单克隆抗体,但尚无针对该蛋白不同结构域的单克隆抗体的报道,而hn RNPA2/b1不同结构域又具有非常重要的功能。因此制备针对hn RNPA2/b1不同结构域的单克隆抗体对深入研究hn RNPA2/b1的生物学功能具有重要作用。为了获得针对hn RNPA2/b1不同结构域的单克隆抗体,本课题的工作主要从以下四个方面展开。1.hn RNPA2/b1全长蛋白和截短体蛋白的制备:首先分别克隆编码hn RNPA2/b1全长、hn RNPA2/b1 N端(aa 1-192)、hn RNPA2/b1 C端(aa 293-353)、hn RNPA2/b1截短体1(aa 21-104)、hn RNPA2/b1截短体2(aa 112-191)、hn RNPA2/b1截短体3(aa 202-230)、hn RNPA2/b1截短体4(aa 231-308)及hn RNPA2/b1截短体5(aa 309-331)等蛋白的8个基因片段,并将它们分别连入相应的原核表达载体中,成功获得p ET-28a/hn RNPA2/b1 no stop、p RSETb/GRNE-hn RNPA2/b1 N端、p RSETb/GRN-E-hn RNPA2/b1 C端、p GEX-4T-3/hn RNPA2/b1 N端、p GEX-4T-3/hn RNPA2/b1 C端及p RSETb/GRN-Ehn RNPA2/b1截短体1-5等共10个原核表达载体。将上述原核表达载体转入Rosetta(DE3)感受态中进行蛋白表达与纯化,共获得相应的10种原核蛋白。所获蛋白将用于后续单克隆抗体制备所需的免疫原以及单克隆抗体的鉴定。2.hn RNPA2/b1单克隆抗体的制备:将hn RNPA2/b1全长蛋白作为免疫原及筛选原,获得1株针对hn RNPA2/b1的单克隆抗体;将GRN-E-hn RNPA2/b1 N端蛋白作为免疫原,GST-hn RNPA2/b1 N端蛋白作为筛选原,获得20株针对hn RNPA2/b1的单克隆抗体;将GRN-E-hn RNPA2/b1 C端蛋白作为免疫原,GSThn RNPA2/b1 C端蛋白作为筛选原,获得3株针对hn RNPA2/b1的单克隆抗体。3.hn RNPA2/b1单克隆抗体的鉴定:首先通过Western blot对所获得的抗体的特异性进行鉴定,然后进一步鉴定其所识别的结构域及蛋白异构体,最后通过免疫荧光染色鉴定其是否可以识别天然的人源和鼠源的hn RNPA2/b1蛋白。结果显示这24株抗体特异性良好。获得的抗体hn RNPA2/b1 No.2-1(N),括号内的N指的是采用hn RNPA2/b1 N端蛋白作为免疫原所获得抗体,其所针对的结构域为hn RNPA2/b1 RRM2结构域;hn RNPA2/b1 No.3-1(N)、hn RNPA2/b1 No.6-1(N)、hn RNPA2/b1 No.9-1(N)、hn RNPA2/

关键词： hnrnpa2/b1 单克隆抗体结构域蛋白异构体神经退行性疾病

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hnrnpa2/b1蛋白抑制剂筛选及其在乳腺癌中的作用研究

hnRNPA2/B1蛋白抑制剂筛选及其在乳腺癌中的作用研究

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作者：郑远荣厦门大学

学位级别：硕士

目的:核不均一核糖核蛋白hnrnpa2/b1作为RNA结合蛋白,通过参与细胞特定RNA分子的加工和代谢过程,在乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的发生发展中具有重要的调控作用,为肿瘤的治疗提供了新的药物靶点。目前还没有特异性靶向hnrnpa2/b1蛋白RRM的... 详细信息

目的:核不均一核糖核蛋白hnrnpa2/b1作为RNA结合蛋白,通过参与细胞特定RNA分子的加工和代谢过程,在乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的发生发展中具有重要的调控作用,为肿瘤的治疗提供了新的药物靶点。目前还没有特异性靶向hnrnpa2/b1蛋白RRM的小分子抑制剂。本研究旨在筛选出以hnrnpa2/b1蛋白的RNA识别结构域(RRM)为靶点的小分子化合物作为竞争性功能抑制分子,并分析小分子抑制剂对包括乳腺癌在内的肿瘤细胞的抑制作用及机制。方法:利用hnrnpa2/b1蛋白已解析的RRM结构域的晶体结构和计算机虚拟筛选技术,以及bIAcore分子互作系统,从天然化合物库及人工合成小分子药物库中高通量筛选结合能力较强的化合物;利用原核表达系统在体外表达和纯化hnrnpa2/b1蛋白;利用等温滴定量热技术(ITC)以及荧光淬灭实验,验证筛选出的化合物和hnrnpa2蛋白在体外的结合能力;利用分子对接方法分析小分子化合物与hnrnpa2蛋白晶体的具体结合位点;利用细胞热迁移实验(CETSA)验证小分子化合物和细胞内源表达的hnrnpa2蛋白的结合情况;利用SRb增殖实验检测小分子化合物药物对乳腺癌细胞增殖的影响,并通过hnrnpa2/b1敲除细胞验证增殖抑制作用的依赖性;同时检测药物分子对乳腺癌细胞集落形成能力的影响。结果:计算机虚拟筛选技术以及等温滴定量热法表明天然化合物AMG-337、EpimedinA1能与hnrnpa2蛋白发生有效的结合;bIAcore分子互作系统以及荧光淬灭技术表明人工合成化合物6A-1、G38和GXG14、18能与hnrnpa2蛋白发生有效的结合;分子对接表明AMG-337、EpimedinA1、6A-1、G38与hnrnpa2蛋白晶体在空间上具有高度的契合性,能够占据hnrnpa2蛋白晶体RNA结合位点;细胞热迁移实验表明G38和GXG18能显著增加hnrnpa2蛋白的热稳定性,证实了其与细胞内源表达的hnrnpa2蛋白的结合;6A-1、G38通过靶向hnrnpa2显著抑制乳腺癌MDA-Mb-231细胞的增殖,同时6A-1、G38抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖;G38显著抑制乳腺癌MDA-Mb-231和MCF-7细胞集落形成能力。结论:天然化合物AMG-337和EpimedinA1以及人工合成化合物6A-1、G38和GXG14、18在体外能与hnrnpa2重组蛋白发生有效的结合;G38、GXG18能靶向结合细胞内源表达的hnrnpa2蛋白;6A-1、G38通过靶向hnrnpa2蛋白显著抑制乳腺癌MDA-Mb-231细胞和MCF-7细胞的的增殖;G38显著抑制乳腺癌MDA-Mb-231和MCF-7细胞集落形成能力。

关键词： hnrnpa2/b1 蛋白纯化虚拟筛选分子对接

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hnrnpa2/b1与肺癌的早期诊断

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实用放射学杂志 2002年第3期18卷 228-231页

作者：史艳侠王绪章龙珍张敬川徐州医学院附属医院肿瘤科徐州医学院附属医院放射科徐州医学院附属医院肿瘤科江苏徐州221002

目的　研究核内不均一核糖核蛋白A2 /b1(hnrnpa2 /b1)与肺癌的相关性及其用于肺癌早期诊断的可行性。方法　利用RT -PCR方法分别扩增癌组织、癌旁组织、正常组织、良性病变组织、纤支镜和经皮穿刺肺活检标本中hnrnpa2 /b1外显子 1～ 2 ... 详细信息

目的　研究核内不均一核糖核蛋白A2 /b1(hnrnpa2 /b1)与肺癌的相关性及其用于肺癌早期诊断的可行性。方法　利用RT -PCR方法分别扩增癌组织、癌旁组织、正常组织、良性病变组织、纤支镜和经皮穿刺肺活检标本中hnrnpa2 /b1外显子 1～ 2 ,分析比较其表达水平的差异及变化趋势。结果　①hnrnpa2 /b1在正常肺组织、癌旁组织、肺癌组织中表达水平依次增高 ,其阳性率分别为 6 .98%、37.2 %、76 .7%,三组比较有显著性差异 (Ρ hnrnpa2 /b1表达水平在不同的病理类型中的表达阳性率虽有不同 (鳞癌 88.2 %,小细胞肺癌 5 7.1%) ,而且随病理分化程度的降低而增高 ,但是均无统计学差异 (Ρ >0 .0 5 )。②纤支镜和经皮穿刺肺活检标本中hnrnpa2 /b1外显子 1～ 2mRNA阳性率为 6 0 %( 6 /10 ) ,与手术标本的癌组织阳性率比较稍低 ,但无统计学差异(Ρ >0 .0 5 )。结论　hnrnpa2 /b1是肺癌发生、发展过程中的早期事件 ,有可能用于肺癌的早期诊断。

关键词： hnrnpa2/b1 RT-PCR 肺癌早期诊断

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hnrnpa2/b1上调COX-2促进非小细胞肺癌生长的作用机制及临床意义

hnRNPA2/B1上调COX-2促进非小细胞肺癌生长的作用机制及临床意义

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作者：宣泱大连医科大学

学位级别：硕士

目的:COX-2(环氧合酶-2,cyclooxygenase-2)在肿瘤细胞中高表达,被作为肿瘤标志物。目前研究已发现COX-2在肿瘤细胞中有多种启动子结合蛋白,这些调控因子如何差异性地与COX-2启动子结合,调控COX-2表达及参与肿瘤形成的具体分子机制尚不... 详细信息

目的:COX-2(环氧合酶-2,cyclooxygenase-2)在肿瘤细胞中高表达,被作为肿瘤标志物。目前研究已发现COX-2在肿瘤细胞中有多种启动子结合蛋白,这些调控因子如何差异性地与COX-2启动子结合,调控COX-2表达及参与肿瘤形成的具体分子机制尚不明确。本研究通过启动子结合蛋白垂钓鉴定系统,并且联合蛋白质组学质谱技术,鉴定能够与COX-2启动子区相结合的蛋白,并鉴定出其中之一为hn RNPA2/b1(核不均一核糖核蛋白A2/b1,heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/b1)。进一步,为了明确hn RNPA2/b1对COX-2的调控机制及生物学功能,选择不同肺癌细胞系,敲低或过表达hn RNPA2/b1之后,探索hn RNPA2/b1对COX-2的表达调控,COX-2启动子驱动的活性,并分析hn RNPA2/b1对COX-2下游产物的影响;为了在裸鼠体外成瘤模型中验证hn RNPA2/b1调控COX-2与细胞学实验中的机制研究结果一致,对成瘤的裸鼠进行hn RNPA2/b1 si RNA治疗后,动态观察裸鼠肿瘤体积大小及体重的变化,使用裸鼠肿瘤组织检测hn RNPA2/b1与COX-2表达的相关性;最后,通过对临床标本中hn RNPA2/b1和COX-2在肺癌细胞和正常癌旁组织中的表达情况,分析hn RNPA2/b1与COX-2表达的相关性,分析高表达hn RNPA2/b1和COX-2的患者预后因素,评估其与肺癌分期、生存、转移、复发等的相关性。深入研究hn RNPA2/b1对COX-2表达调控的分子机制及明确hn RNPA2/b1的临床意义。旨在确立hn RNPA2/b1/COX-2作为肺癌治疗新靶点提供理论和实验依据。方法:使用DNA结合蛋白垂钓方法(biotin-Streptavadin-Agarose Pulldown),联合蛋白质组学质谱技术,蛋白鉴定hn RNPA2/b1与COX-2启动子特异性结合。在非小细胞肺癌细胞系A549,H322,H460,H1299中,使用染色质免疫共沉淀CHIP及Pull down方法验证hn RNPA2/b1与COX-2启动子区结合。在非小细胞肺癌细胞系及肺癌组织中,使用Western blot,RT-PCR及免疫组化检测hn RNPA2/b1,COX-2等表达情况。选取H460或H1299肺癌细胞系敲低或高表达hn RNPAb之后,用RT-PCR、Western blot检测在转录水平及翻译水平COX-2的变化,ELISA方法检测细胞培养基中PGE2含量,用荧光报告基因检测hn RNPA2/b1对COX-2启动子活性的影响,用划痕实验检测细胞迁移能力,用MTT实验检测细胞增殖及细胞活力。使用免疫共沉淀Co-IP检测蛋白之间的相互作用,并在hn RNPA2/b1过表达的情况下敲低p300表达或阻断p300活性,以及在p300过表达的情况下敲低hn RNPA2/b1,观察二者对于COX-2表达和肺癌细胞增殖的协同调控。建立肺癌的小鼠皮下移植肿瘤模型,观察不同组别之间裸鼠肿瘤形成和生长速度,评价使用hn RNPA2/b1 si RNA对裸鼠肿瘤治疗的疗效。采用组织芯片、免疫组化、Western blot等技术检测肺癌组织和正常癌旁组织标本中hn RNPA2/b1和COX-2的表达水平,结合临床资料,使用统计学软件SPSS分析hn RNPA2/b1和COX-2表达与肺癌的分期、转移、复发、生存等因素的相关性,并评估它们在肺癌临床诊断、预测预后、转移复发上的价值和意义,以期确定它们作为新型的肺癌分子标记和治疗靶点。结果:1.在肺癌细胞系A549,H1299,H322,H460及非正常细胞系HLF中,发现并验证了hn RNPA2/b1为特异性的COX-2启动子结合蛋白。2.在肺癌细胞系H460及H322中,敲低hn RNPA2/b1后,COX-2转录水平、蛋白表达及前列腺素E2(PGE2)合成减少,COX-2启动子区活性降低。3.在肺癌细胞系H1299,H460及H322中,过表达hn RNPA2/b1后,COX-2转录水平、蛋白表达及前列腺素E2(PGE2)合成增加,COX-2启动子区活性升高。4.在肺癌细胞系H460中,敲低hn RNPA2/b1后,细胞迁移能力下降,细胞形态皱缩、变小、发亮。5.在小鼠皮下注射H460肺癌细胞系的成瘤模型实验中,裸鼠经过hn RNPA2/b1si RNA治疗之后的si RNA组,肿瘤体积及重量均小于对照组(定点注射Ctrl si RNA)。裸鼠经过si RNA治疗之后腹腔注射脂多糖LPS诱导全身炎症的实验组裸鼠肿瘤与对照组(定点注射Ctrl si RNA)相比,肿瘤体积及重量未见明显变化。6.采用组织芯片、免疫组化、Western blot等技术检测肺癌组织和正常癌旁组织,hn RNPA2/b

关键词： hnrnpa2/b1 COX-2 p300 非小细胞肺癌

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食管鳞状细胞癌组织中S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1的表达及其临床意义的研究

食管鳞状细胞癌组织中S100A11、14-3-3、Gstp和HnRNPA2/B1的表达...

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作者：朱丽娟新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：研究食管鳞状细胞癌组织中S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测68例食管鳞状细胞癌组织和48例癌旁切端正常食管组织,观察S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1的表达,并应用统计... 详细信息

目的：研究食管鳞状细胞癌组织中S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测68例食管鳞状细胞癌组织和48例癌旁切端正常食管组织,观察S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1的表达,并应用统计学方法分析其表达与临床病理学指标的意义。结果：（1）食管鳞状细胞癌组织中S100A11、14-3-3蛋白、Gstp和hnrnpa2/b1的阳性表达率分别为：55.9%（38/68）、69.1%（47/68）、60.3%（41/68）和54.4%（37/68）;正常食管组织中阳性表达率分别为：25%（12/48）、33.3%（16/48）、27.1%（13/48）和29.1%（14/48）,经比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）食管鳞状细胞癌组织中S100A11在不同性别、年龄、民族、肿瘤大小及不同浸润深度组之间的表达无显著差异（P＞0.05）;在不同分化程度、有无淋巴结转移及不同临床分期组之间的表达有显著差异（P＜0.05）。（3）食管鳞状细胞癌组织中14-3-3在不同性别、年龄、民族及不同肿瘤大小组之间的表达无显著差异（P＞0.05）;在不同分化程度、不同浸润深度、有无淋巴结转移及不同临床分期组之间的表达有显著差异（P＜0.05）。（4）食管鳞状细胞癌组织中Gstp在不同性别、年龄、民族、肿瘤大小及不同浸润深度组之间的表达无显著差异（P＞0.05）;在不同分化程度、有无淋巴结转移及不同临床分期组之间的表达有显著差异（P＜0.05）。（5）食管鳞状细胞癌组织中hnrnpa2/b1在不同性别、年龄、民族、肿瘤大小、不同浸润深度及不同临床分期组之间的表达无显著差异（P＞0.05）;在不同分化程度、有无淋巴结转移组之间的表达有显著差异（P＜0.05）。结论：（1）提示S100A11、14-3-3、Gstp和hnrnpa2/b1在食管鳞状细胞癌的发生和发展中可能起到一定作用。（2）S100A11、14-3-3、Gstp在不同分化程度、有无淋巴结转移及不同临床分期组之间的表达均有显著差异,提示S100A11、14-3-3、Gstp可能对食管鳞状细胞癌恶性程度判断有一定的指导意义。（3）hnrnpa2/b1在不同分化程度、有无淋巴结转移组之间的表达有显著差异,提示hnrnpa2/b1可能与食管鳞状细胞癌的发生和发展密切相关,对其进一步研究有望成为食管鳞状细胞癌早期诊断的参考指标。本研究为今后食管鳞状细胞癌发病机制探讨、早期诊断、恶性程度和预后判断及个体化治疗奠定了理论和实验基础。

关键词：食管鳞状细胞癌 S100A11 14-3-3 Gstp hnrnpa2/b1

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基于hnrnpa2/b1-PI3K/AKT信号通路研究雷公藤甲素抗非小细胞肺癌的分子机制

基于HnRNPA2/B1-PI3K/AKT信号通路研究雷公藤甲素抗非小细胞肺癌...

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作者：胡明亮宜春学院

学位级别：硕士

目的:基于Hn RNPA2/b1-PI3K-AKT信号通路探讨雷公藤甲素抗非小细胞肺癌的作用机制。方法:采用CCK-8法检测雷公藤甲素对肺癌A549细胞增殖的影响;采用细胞划痕实验检测雷公藤甲素对A549细胞迁移的抑制作用;采用流式细胞术检测雷公藤甲素... 详细信息

目的:基于Hn RNPA2/b1-PI3K-AKT信号通路探讨雷公藤甲素抗非小细胞肺癌的作用机制。方法:采用CCK-8法检测雷公藤甲素对肺癌A549细胞增殖的影响;采用细胞划痕实验检测雷公藤甲素对A549细胞迁移的抑制作用;采用流式细胞术检测雷公藤甲素对肺癌A549细胞周期的影响及细胞凋亡的情况;用Western blotting检测雷公藤甲素对肺癌A549细胞内Hn RNPA2/b1-PI3K-AKT信号通路上相关蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤甲素对肺癌A549细胞内PI3K、AKT及相关基因表达的影响;采用裸鼠皮下植瘤做体内试验,验证雷公藤甲素对肺癌组织内Hn RNPA2/b1-PI3K-AKT信号通路上相关蛋白表达的影响以及PI3K、AKT及相关基因表达的影响。结果:经雷公藤甲素(10、20、40、50、100n M)对A549细胞处理24h后,通过CCK-8毒性测试计算得出雷公藤甲素对A549细胞的IC为50n M;通过细胞划痕实验,设置空白组和100n M雷公藤甲素组,经过0、24h、48h处理后,雷公藤甲素组的愈合面积明显低于空白组;50n M、100n M的雷公藤甲素作用于A549细胞24h后,通过流式细胞术检测细胞的凋亡率分别为8.2%、22.8%,雷公藤甲素诱导A549细胞凋亡;以50n M、100n M的雷公藤甲素处理A549细胞24h,经q PCR检测,随着雷公藤甲素浓度的增高,A549细胞内Hn RNPA2/b1、PI3K、AKT等基因的表达逐渐下降;50n M、100n M的雷公藤甲素处理A549细胞24h后,通过Western blotting检测,A549细胞内Hn RNPA2/b1、PI3K、AKT等蛋白的表达随雷公藤甲素剂量的增高而下降;在裸鼠皮下注射A549肺癌细胞系的成瘤模型实验中,体内试验q PCR和Western blotting的结果均为经雷公藤甲素处理后,Hn RNPA2/b1、PI3K、AKT等基因的表达被抑制,Hn RNPA2/b1、PI3K、AKT等蛋白下调。结论:雷公藤甲素能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞内Hn RNPA2/b1的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及信号通路上相关蛋白的表达,从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡,发挥其抗肿瘤的作用。

关键词：雷公藤甲素 hnrnpa2/b1 PI3K/AKT 非小细胞肺癌

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检测血液及痰液中hnrnpa2/b1的表达在非小细胞肺癌诊断中的意义

检测血液及痰液中hnRNPA2/B1的表达在非小细胞肺癌诊断中的意义

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作者：钱晓慧南昌大学

学位级别：硕士

目的：本研究采用免疫组化法检测非小细胞肺癌、肺部良性病变及正常对照者的痰液及血液中hnrnpa2/b1表达，探讨并分析hnrnpa2/b1与非小细胞肺癌的临床相关性（包括年龄、性别、吸烟情况、病理类型）。材料与方法：本研究60例非小细... 详细信息

目的：本研究采用免疫组化法检测非小细胞肺癌、肺部良性病变及正常对照者的痰液及血液中hnrnpa2/b1表达，探讨并分析hnrnpa2/b1与非小细胞肺癌的临床相关性（包括年龄、性别、吸烟情况、病理类型）。材料与方法：本研究60例非小细胞肺癌患者、30例肺部良性疾病患者、20例健康体检者均来自2010年9月至2011年5月在南昌大学一附属医院住院患者。所有病例（健康对照组除外）经过经皮肺穿、支气管镜下活检或手术切除病理确诊。取标本时未行放疗、化疗。采用SPSS17.0软件对相关数据进行统计学分析。结果： 1、60例肺癌患者痰液表达hnrnpa2/b1有36例（+），24例（-），阳性率60%。血液表达hnrnpa2/b1有48例（+），12例（-），阳性率80%。 2、30例肺部良性病患者痰液表达hnrnpa2/b1有11例（+），19例（-），阳性率36%。血液表达hnrnpa2/b1有9例（+），21例（-），阳性率30%。 3、20例健康对照者血液表达hnrnpa2/b1有1例（+），19例（-），阳性率5%。 4、确定免疫组化检测血液hnrnpa2/b1截断值以阳性率为10%判断。 5、血液检测及痰液检测hnrnpa2/b1与性别、年龄、吸烟情况、病理类型中均不相关。 6、血液检测hnNRNPA2/b1灵敏度80%、特异度70%，痰液检测hnrnpa2/b1灵敏度60%、特异度63%。结论： 1血液及痰液使用免疫组化法检测hnrnpa2/b1在肺癌诊断中均具有一定的诊断价值。 2血液细胞采用免疫组化检测hnrnpa2/b1对肺癌有诊断及鉴别意义，并较痰液检测效能更高。 3hnrnpa2/b1表达与吸烟情况、年龄，性别及病理类型均无明显相关。

关键词： hnrnpa2/b1 非小细胞肺癌免疫组化学

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慢病毒介导shRNA沉默hnrnpa2/b1基因对宫颈癌细胞化疗敏感性的影响及作用机制初探

慢病毒介导shRNA沉默hnRNPA2/B1基因对宫颈癌细胞化疗敏感性的影...

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作者：刘瑶贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:分析不均一核糖核蛋白A2/b1(heterogeneous nuclear ribonucleoproteinA2/b1,hnrnpa2/b1)基因对宫颈癌细胞的平板克隆形成、转移、侵袭能力和增殖能力、细胞周期的影响;以及探讨其改变宫颈癌细胞化疗药物敏感性及作用机制。方法:... 详细信息

目的:分析不均一核糖核蛋白A2/b1(heterogeneous nuclear ribonucleoproteinA2/b1,hnrnpa2/b1)基因对宫颈癌细胞的平板克隆形成、转移、侵袭能力和增殖能力、细胞周期的影响;以及探讨其改变宫颈癌细胞化疗药物敏感性及作用机制。方法:设计含有hnrnpa2/b1 shRNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列4对、阴性对照1对。构建含靶向hnrnpa2/b1 shRNA的重组慢病毒质粒,并稳定转染Caski细胞、Hela细胞,qRT-PCR检测hnrnpa2/b1 mRNA表达水平,Western blot检测hnrnpa2/b1蛋白表达水平;分别用平板克隆形成实验、划痕实验、细胞侵袭实验检测细胞的生物功能;MTT比色法检测细胞的增殖能力、洛铂(Lobaplatin)作用于细胞的IC50、伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)作用于细胞的IC50;流式细胞术分析hnrnpa2/b1基因沉默后细胞周期以及洛铂、伊立替康对细胞凋亡作用的改变;用qRT-PCR和Western blot检测相关基因bax、bcl-2和CDH1在基因和蛋白水平的变化。结果:成功构建含有hnrnpa2/b1 shRNA的慢病毒载体,并且稳定转染Caski细胞、hela细胞。qRT-PCR检测第三和第四条干扰序列均显著降低了hnrnpa2/b1 mRNA在Caski细胞中的表达(Phnrnpa2/b1 mRNA在Hela细胞中的表达(Pblot检测第一、第二、第三和第四干扰序列均显著降低了hnrnpa2/b1蛋白在Caski细胞中的表达(Pblot检测第一、第二、第三和第四干扰序列均显著降低了hnrnpa2/b1蛋白在Hela细胞中的表达(P0.05);与对照组相比,Caski及Hela细胞基因沉默组的细胞增殖能力明显受到抑制(P0.05);与对照组相比,Caski及Hela细胞基因沉默组洛铂的IC50、伊立替康的IC50均明显降低(P0.05);与对照组相比,Caski及Hela细胞基因沉默组的G1期细胞数明显高于对照组(P0.05);与对照组相比,Caski及Hela细胞基因沉默组的洛铂、伊立替康分别作用的凋亡率明显高于对照组(P0.05);与对照组相比,Caski及Hela细胞基因沉默组的bax、bcl-2和CDH1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:hnrnpa2/b1基因沉默能够降低宫颈癌细胞的克隆形成、转移、侵袭能力,抑制宫颈癌细胞增殖,阻滞细胞处于G1期,增强对洛铂、伊立替康化疗药物的敏感性。

关键词：宫颈癌细胞 hnrnpa2/b1 shRNA 细胞凋亡药物敏感性

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hnrnpa2/b1在肺癌检测研究进展

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江西医药 2011年第9期46卷 865-867页

作者：钱晓慧马琳南昌大学第一附属医院呼吸内科南昌330006

全球肺癌在因癌症致死原因中占了主要地位,且死亡率及发病率呈上升趋势。但肺癌的早期诊断,仍然是一个未解决的难题。近年来研究表明,核内不均一核糖核蛋白（Heterogeneous nuclear ribonu-cleoproteinA2／b1，hnrnpa2／b1）在早期肺癌... 详细信息

全球肺癌在因癌症致死原因中占了主要地位,且死亡率及发病率呈上升趋势。但肺癌的早期诊断,仍然是一个未解决的难题。近年来研究表明,核内不均一核糖核蛋白（Heterogeneous nuclear ribonu-cleoproteinA2／b1，hnrnpa2／b1）在早期肺癌和癌前病变中过度表达，在癌变的组织、患者血液、痰液可以被检出．其在肺癌早期诊断中的作用受到人们的关注。

关键词： hnrnpa2/b1 肺癌检测

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hnrnpa2/b1在恶性肿瘤中的研究进展

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中国医药导报 2019年第12期16卷 23-26页

作者：刘雅雯张尤历徐岷江苏大学附属医院消化内科江苏镇江212003

核内不均一核糖核蛋白(hn RNPs)是一类RNA结合蛋白,主要参与RNA剪切、m RNA的加工、端粒合成、DNA修复、基因表达调控及蛋白质翻译等复杂多样的生物进程。hn RNPA2/b1属于该蛋白家族中的成员之一,其在人体大多数组织中表达且具有多种功... 详细信息

核内不均一核糖核蛋白(hn RNPs)是一类RNA结合蛋白,主要参与RNA剪切、m RNA的加工、端粒合成、DNA修复、基因表达调控及蛋白质翻译等复杂多样的生物进程。hn RNPA2/b1属于该蛋白家族中的成员之一,其在人体大多数组织中表达且具有多种功能。研究发现hn RNPA2/b1在多种恶性肿瘤中均存在差异性表达,并且可参与调控基因的表达、促进增殖与迁移能力、抑制凋亡及调控肿瘤耐药,在恶性肿瘤的诊断、治疗以及预后判断等方面都具有重要的临床价值。本文就hn RNPA2/b1在肺癌、乳腺癌、胰腺癌及肝癌等多种恶性肿瘤中的研究进展作一综述。

关键词：核内不均一核糖核蛋白 hnrnpa2/b1 恶性肿瘤

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