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牛BLG/hepo和大鼠WAP/hepo基因在家兔乳腺中的表达

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中国兽医学报 2002年第3期22卷 238-240页

作者：乔贵林赵君岳军明宇丽赖良学张守峰王风阳扈荣良殷震解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控... 详细信息

将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控序列和 h EPO融合基因 p WAP- EPO- WAP3′U TR(p WE3′)和 p CMV- WAP- EPO- b GH poly A (p CWEA )经脂质体包裹后 ,通过显微外科方法 ,经乳腺导管注入妊娠中后期家兔乳腺内 ,进行短暂表达。于家兔分娩后 1～ 2 5 d采奶 ,EL ISA检测乳汁中 EPO含量 ,3个载体均获得表达。表达水平从高到低依次为 p CWEA、p CBEA、p WE3′;表达量为 0 .116～ 0 .75 3μg/ L 。

关键词：牛 BLG hepo 大鼠 WAP 家兔乳腺基因表达

hepo和海泡石改性丙烯酸涂料的合成及其阻燃性能研究

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HEPO和海泡石改性丙烯酸涂料的合成及其阻燃性能研究

作者：张焘湖南科技大学

学位级别：硕士

丙烯酸涂料具有优异的耐水性、耐碱性和粘接性,被广泛用于汽车、飞机、木材、内外墙涂料和机械制造等领域。但由于丙烯酸涂料热稳定差,在工程应用领域需要进行阻燃处理。采用阻燃改性和添加无机填料的方法改善涂料阻燃性能是当前的研究... 详细信息

丙烯酸涂料具有优异的耐水性、耐碱性和粘接性,被广泛用于汽车、飞机、木材、内外墙涂料和机械制造等领域。但由于丙烯酸涂料热稳定差,在工程应用领域需要进行阻燃处理。采用阻燃改性和添加无机填料的方法改善涂料阻燃性能是当前的研究热点。磷杂菲阻燃剂DOPO及其衍生物可作为阻燃剂添加进丙烯酸涂料,其具有低毒、不迁移、与聚合物相容性好以及燃烧时生烟量低等特点。海泡石拥有优良的热稳定性和一定的机械强度,可作为填料加入聚合物,可以改善聚合物的阻燃性能和机械性能。而寻找DOPO衍生物/海泡石协同阻燃丙烯酸涂料的制备方法并研究其协同阻燃机制,对于丙烯酸涂料的应用具有非常重要的意义。本文采用实验研究和理论分析相结合的方法。制备了一种DOPO衍生物hepo/Mo-Sep复合阻燃涂料,通过TG测试、Mcc测试、燃烧测试、NBS测试和SEM测试对hepo和Mo-Sep的协同阻燃抑烟性能进行了表征,并分析复合涂料的阻燃机理。同时对制备的涂料进行了理化性能测试。进行的实验和测试如下:(1)通过乳液聚合法合成了hepo阻燃改性的丙烯酸乳液,并研究其阻燃性能。结果表明,hepo中的磷酸基团促进了乳液的热分解和熔融成炭,而残炭占比随之提高。hepo提高了乳液的各项阻燃指标,加入了50%hepo的乳液HRC、PHRR和THR分别降低了59.7%、79.4%和47.2%。随着hepo含量的增加,乳液涂覆木板的质量损失、炭化体积减少。同时,添加hepo能够减少炭层的塌陷和孔洞,提高炭层质量。(2)通过沉淀法将钼酸锌包覆至海泡石表面,制备了一种钼酸锌改性海泡石(Mo-Sep),并研究Mo-sep的结构性能。结果表明,相较于未改性Sep,Mo-Sep的热稳定更高,阻燃和抑烟性能更好。改性前海泡石具有明显的纤维状结构且碎片较多,改性后的海泡石纤维状结构变粗且不明显,块状结构较多。(3)通过插层—原位聚合法,将hepo和Mo-Sep共同引入丙烯酸乳液中制备hepo/Mo-Sep复合涂料,并研究hepo和Mo-Sep的协同阻燃效果。结果表明,MoSep的加入能够进一步提高涂料的热稳定性和残余质量。30%hepo/3%Mo-Sep涂料的阻燃效果最好,HRC、PHRR和THR分别下降了50.8%、39.5%和39.9%。燃烧测试的结果与Mcc测试基本一致。此外,Mo-Sep能够降低涂料的烟密度。Mo-Sep的加入能够进一步提高涂料炭层的致密程度和平整性。最后,对hepo和Mo-Sep的协同阻燃机理进行了分析。论文的研究成果为丙烯酸酯阻燃涂料的制备提供了新的思路,拓宽了海泡石的在阻燃领域的应用。制得的阻燃涂料具有绿色环保、低毒低烟,可作为木板、墙面等材料表面的阻燃涂料。

关键词： hepo 海泡石丙烯酸涂料协同阻燃接枝改性抑烟性能

牛乳腺细胞系BME-L1β-酪蛋白分泌的诱导及人促红细胞生成素(hepo)的表达

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农业生物技术学报 1999年第1期7卷 69-72页

作者：李震林爱星陈永福夏国良山东农业大学动物科技学院!山东泰安中国农业大学生物学院!北京 100094 271018 中国农业大学生物技术国家重点实验

用悬浮胶元（floatiflggel）及生乳激素（lactOgenichormones）诱导BME－L．细胞合成并分泌了β-酪蛋白，证明了BME－L1所具有的上皮性质。用质脂体介导法向BME－L1转入含人促红细胞生成素（hepo）基因的质粒pBCE，经生乳激素及悬浮胶... 详细信息

用悬浮胶元（floatiflggel）及生乳激素（lactOgenichormones）诱导BME－L．细胞合成并分泌了β-酪蛋白，证明了BME－L1所具有的上皮性质。用质脂体介导法向BME－L1转入含人促红细胞生成素（hepo）基因的质粒pBCE，经生乳激素及悬浮胶元诱导，这些细胞短暂表达hepo。讨论了影响乳腺细胞内源乳蛋白基因及外源基因表达效率的因素。

关键词：牛乳腺细胞系 β-酪蛋白 hepo

用荧光原位杂交技术检测hepo转基因山羊染色体上外源基因的整合状况

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中国比较医学杂志 2003年第3期13卷 132-134,i001页

作者：曹莹莹王晴陈冰吴国祥赵建阳陈建泉汤家铭成国祥上海转基因研究中心上海201203 上海第二医科大学附属瑞金医院血液学研究所

目的　对采用受精卵显微注射方法获得的 3头hepo转基因山羊进行检测和整合状况分析。方法　用荧光原位杂交的方法 ,以正常羊及正常人染色体标本为对照 ,通过生物素标记的探针与转基因羊染色体标本进行杂交。结果　经信号放大及DAPI染色... 详细信息

目的　对采用受精卵显微注射方法获得的 3头hepo转基因山羊进行检测和整合状况分析。方法　用荧光原位杂交的方法 ,以正常羊及正常人染色体标本为对照 ,通过生物素标记的探针与转基因羊染色体标本进行杂交。结果　经信号放大及DAPI染色后 ,3头转基因羊分别在不同染色体上各有一对明显的荧光信号 ,而对照组无信号。结论　hepo基因在转基因山羊染色体上的整合是单位点整合。

关键词：荧光原位杂交技术 hepo 转基因山羊染色体外源基因染色方法

重组人促红细胞生成素四环素调控真核表达载体的构建与鉴定

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中国医师杂志 2005年第9期7卷 1164-1166页

作者：徐卓佳戴勇李体远彭武建暨南大学附属深圳市人民医院临床医学研究中心广东深圳518020

目的构建并鉴定含有四环素调控的pTRE顺式作用元件的质粒型载体pTRE2hyg-rhepo。方法设计含BamHI和ClaI酶切位点的hepo基因引物,采用RT-PCR法从含有rhepo基因的CHO细胞中克隆hepo基因片段,亚克隆至pTRE2hyg真核表达载体。转化感受态大... 详细信息

目的构建并鉴定含有四环素调控的pTRE顺式作用元件的质粒型载体pTRE2hyg-rhepo。方法设计含BamHI和ClaI酶切位点的hepo基因引物,采用RT-PCR法从含有rhepo基因的CHO细胞中克隆hepo基因片段,亚克隆至pTRE2hyg真核表达载体。转化感受态大肠杆菌Top10,酶切鉴定阳性重组子,并进行序列测定。结果经RT-PCR能扩增出604bp的片段,与预期片段大小相符,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段,测序结果与预期序列完全一致。结论成功构建了重组人EPO四环素调控真核表达载体pTRE2hyg-rhepo。

关键词：重组人促红细胞生成素真核表达载体基因扩增序列分析酶切鉴定四环素调控 RT-PCR法顺式作用元件 hepo

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人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

生物工程学报 2000年第1期16卷 46-50页

作者：张传溪姜育蕾胡萃吴祥甫中国科学院上海生物化学研究所浙江大学应用昆虫学研究所杭州310029 浙江大学应用昆虫学研究所

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ,使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPVDNA共转染BmN... 详细信息

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ,使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPVDNA共转染BmN细胞,经空斑纯化,获插入EPOcDNA的重组病毒rBmNPVEPO。经Sonthern杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹,收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～65d蛹血淋巴。用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Westernblot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD。用TF1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u。

关键词： hepo 杆状病毒-昆虫表达系统家蚕基因表达

乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备

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中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 439-443页

作者：张爱民陈建泉刘思国沙红英徐旭俊吴友兵陈娟成国祥同济大学生命科学与技术学院上海转基因研究中心上海201203 上海转基因研究中心

目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hepo)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hepo全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hepo转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中... 详细信息

目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hepo)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hepo全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hepo转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hepo基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20d死亡;3头转基因母羊hepo基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hepo分子质量为32kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hepo活性分别达到1.17×102IU、1.90×104IU、1.91×104IU。结论牛BLG能够调控hepo基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。

关键词： hepo 奶山羊乳腺表达原核注射

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人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究

黑龙江医药 2000年第1期13卷 21-22页

作者：朱绿松李文辉梁秋波哈尔滨医药工程技术研究开发中心 150020

将杂交瘤细胞接种子BAIB/C小鼠腹腔内,令细胞增殖,抽取接种杂交瘤细胞后两周左右的腹水,采用硫酸胺盐析,饱和度为50％,然后上DEAE-Cellulose DE52柱,NaCl浓度梯度洗脱,所得单克隆抗体纯度达90％,可用于免疫亲和柱的制备。

关键词：人经细胞生成素单克隆抗体制备 hepo