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生物工程学报 2018年第10期34卷 1642-1649页

作者：赵春霖金莉莉邰思佳张学敏史天聪吴飞王秋雨辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036

旨在研究重组融合多肽hegf-awrk6(EK)对烫伤模型小鼠感染创面的治疗功效。采用大肠杆菌表达系统表达、纯化融合多肽EK,抑菌实验检测EK抑菌活性;构建小鼠II度烫伤和铜绿假单胞菌感染模型,实验组创面滴注EK(30 mg/L),以PBS、庆大霉素(30 m... 详细信息

旨在研究重组融合多肽hegf-awrk6(EK)对烫伤模型小鼠感染创面的治疗功效。采用大肠杆菌表达系统表达、纯化融合多肽EK,抑菌实验检测EK抑菌活性;构建小鼠II度烫伤和铜绿假单胞菌感染模型,实验组创面滴注EK(30 mg/L),以PBS、庆大霉素(30 mg/L)、烫伤膏(10 mg/L)为对照,计算烫伤后创面愈合率及菌落数;伤后10 d,取各组小鼠的伤口及周边皮肤进行HE染色及胶原蛋白的Western blotting检测,分析创面病理组织结构。实验结果纯化得到了具有抑菌活性的重组表达融合肽EK;伤后6 d始,EK组小鼠创面菌落数少于对照组,差异极显著(P<0.01);EK组小鼠烫伤愈合率显著高于PBS对照组(P<0.01);与对照组相比,EK组小鼠创面真皮层细胞排列规则,再上皮化较快,毛囊生长较多,Ⅰ型胶原蛋白表达显著增加。结果表明EK具有抑制小鼠烫伤创面感染、促创面愈合功效,具有开发成为治疗烧伤药物的潜力。

关键词： hegf-awrk6 纯化烫伤模型创面感染创面愈合

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融合肽hegf-awrk6的毒性研究

融合肽hEGF-AWRK6的毒性研究

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作者：李函频辽宁大学

学位级别：硕士

融合肽hegf-awrk6是利用大肠杆菌表达系统,通过IPTG诱导,表达纯化得到的人表皮生长因子(hegf)和抗菌肽awrk6的重组融合肽。实验室前期研究结果证明融合肽hegf-awrk6是具有抗菌活性和促伤口愈合活性的双功能多肽,有望开发成为治疗烧伤和... 详细信息

融合肽hegf-awrk6是利用大肠杆菌表达系统,通过IPTG诱导,表达纯化得到的人表皮生长因子(hegf)和抗菌肽awrk6的重组融合肽。实验室前期研究结果证明融合肽hegf-awrk6是具有抗菌活性和促伤口愈合活性的双功能多肽,有望开发成为治疗烧伤和创伤等病症的临床药物。一种药物的开发研究,前期必须要进行急性毒性研究,一般的方法是采用小鼠经口或者注射药物进行急毒测试。现如今利用动物进行急性毒性试验,因涉及到伦理问题而备受争议,再加上动物使用3R原则的提出,发展细胞毒性和模式生物毒性预筛模型来预测动物急性毒性,成为毒性研究领域的热点研究方向。为了进一步临床应用,本实验研究了融合肽hegf-awrk6对正常细胞、模式生物和啮齿类动物的毒性作用。本文首先进行细胞体外毒性测试和秀丽隐杆线虫毒性测试,然后根据测试结果,估算小鼠体内急性毒性测试的用药剂量,以此达到减少实验动物使用量、精确毒性测试结果和探究体外替代毒理研究方法目的。实验方法：本实验首先进行细胞毒性检测,所选用的细胞有小鼠成纤维细胞(3T3)和人角质形成细胞(HACAT)。利用CCK8方法测定5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、50mg/mL融合肽hegf-awrk6对细胞活性的影响。在细胞毒性测试的基础上,以相同浓度梯度的融合肽hegf-awrk6作用于秀丽隐杆线虫进行毒性测试,测量指标包括秀丽隐杆线虫的半致死率、生殖能力、运动能力和最长寿命等。根据细胞和秀丽隐杆线虫毒性测试结果,设定小鼠腹腔注射毒性试验的抗菌肽用量,分别以40mg/kg、200mg/kg、1000mg/kg、2500mg/kg、5000mg/kg的hegf-awrk6对小鼠进行腹腔注射,测量指标包括小鼠半死率、脏器指数、精子畸形率和血生化指标等。实验结果：细胞毒性检测的结果显示，,融合肽hegf-awrk6对正常细胞毒性较低,IC50>50mg/mL。在秀丽隐杆线虫毒性实验中,融合肽hegf-awrk6的MTC=50mg/mL,LC50=22.01mg/mL,其95%置信区间为19.18-25.76,对秀丽隐杆线虫的生殖能力、运动能力和最长寿命无显著影响。小鼠急性毒性试验中,融合肽hegf-awrk6的MTD>5000mg/kg BW,LD50>5000mg/kg BW,根据急毒分级标准,hegf-awrk6属无毒级,且对小鼠的脏器指数、精子畸形率、血生化指标等无显著影响。结论：融合肽hegf-awrk6无实际毒性,通过对细胞毒性、秀丽隐杆线虫毒性试验结果进行分析,发现秀丽隐杆线虫毒性研究模型是替代传统啮齿类毒性研究的可行性方法。

关键词：融合肽 hegf-awrk6 细胞毒性线虫毒性小鼠急毒

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