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Genomics, Proteomics & Bioinformatics 2011年第4期9卷 151-157页

作者： Kalimuthusamy Natarajaseenivasan Santhanam Shanmughapriya Sridhar Velineni Sergey C. Artiushin John F. Timoney Medical Microbiology Laboratory Department of Microbiology School of Life Sciences Bharathidasan University Gluck Equine Research Center University of Kentucky

Leptospirosis is an infectious bacterial disease caused by Leptospira species. In this study, we cloned and se- quenced the gene encoding the immunodominant protein groel from L. interrogans serovar Autumnalis strain N2, which was isolated from the urine of a patient during an outbreak of leptospirosis in Chennai, India. This groel gene encodes a protein of 60 kDa with a high degree of homology （99% similarity） to those of other leptospiral serovars. Recombinant groel was overexpressed in Escherichia coli. lmmunoblot analysis indi- cated that the sera from confirmed leptospirosis patients showed strong reactivity with the recombinant groel while no reactivity was observed with the sera from seronegative control patient. In addition, the 3D structure of groel was constructed using chaperonin complex cpn60 from Thermus thermophilus as template and vali- dated. The results indicated a Z-score of -8.35, which is in good agreement with the expected value for a pro- tein. The superposition of the Ca traces of cpn60 structure and predicted structure of leptospiral groel indicates good agreement of secondary structure elements with an RMSD value of 1.5A. Further study is necessary to evaluate groel for serological diagnosis of leptospirosis and for its potential as a vaccine component.

关键词： groel expression homology modeling leptospirosis serodiagnosis

Single-step Purification of Molecular Chaperone groel by Expanded Bed Chromatography

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Chinese Journal of Chemical Engineering 2003年第4期11卷 460-463页

作者：佟晓冬杨征董晓燕孙彦 Department of Biochemical Engineering School of Chemical Engineering and TechnologyTianjin University Tianjin 300072 China

Expanded bed adsorption (EBA) is an integrative downstream processing technique for the purification of biological substances directly from unclarified feedstock. In this study, molecular chaperone groel, an important protein folding helper both in vivo and in vitro, was purified by the single-step EBA technique from the unclarified homogenate of recombinant E. coli cells. Compared with packed bed adsorption, the EBA technique provided a single-step approach to yield an electrophoretic purity of groel. After the homogenate loading and column washing in the expanded bed mode, the groel protein was recovered by stepwise salt-gradient elution in packed-bed or expanded-bed modes, respectively. The expanded-bed elution mode was found as efficient as the packed-bed mode in the purification of groel from cell disruptate.

关键词：膨胀床吸附技术纯化分子伴侣 groel 分离

牙龈卟啉单胞菌groel对人脐静脉内皮细胞影响的研究

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口腔医学研究 2022年第9期38卷 872-876页

作者：闫锐郭凯利曹丰弟张军马哲河北医科大学口腔医学院•口腔医院河北石家庄050017 河北省口腔医学重点实验室河北石家庄050017 墨尔本大学牙学院澳大利亚墨尔本VIC 3010

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的代谢产物groel对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨P.g致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:用不同浓度的P.g groel(2、4、6... 详细信息

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的代谢产物groel对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨P.g致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:用不同浓度的P.g groel(2、4、6、8、10μg/mL)处理HUVEC 24 h,观察处理前后细胞形态的变化。通过CCK-8法检测HUVEC的增殖活性,流式细胞学检测细胞凋亡,RT-qPCR和ELISA法分别检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附因子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)的表达。结果:P.g groel处理HUVEC 24 h后,显著降低了细胞活力并增加了细胞凋亡率(Pgroel浓度的增加,对细胞活性的抑制作用和细胞凋亡数量也逐渐增加。P.g groel还显著刺激了HUVEC分泌IL-6、IL-8、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin(Pgroel以浓度依赖性方式抑制HUVEC活性并诱导细胞发生凋亡。P.g groel还能引起HUVEC的炎症反应,从而在牙周炎促进动脉粥样硬化的发生中发挥重要作用。

关键词：牙龈卟啉单胞菌 groel 牙周炎人脐静脉内皮细胞动脉粥样硬化

分子伴侣GroES和groel通过介导铜绿假单胞菌抗原PcrV-OprI七聚体化增强其保护效果及机制研究

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分子伴侣GroES和GroEL通过介导铜绿假单胞菌抗原PcrV-OprI七聚体...

作者：曾升西南大学

学位级别：硕士

研究背景:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种在自然界中广泛存在的革兰阴性条件致病菌,特别容易造成院内免疫功能低下患者感染。PA感染会导致多种急慢性疾病,如皮炎、肺炎、骨关节炎和泌尿系统炎症等,其中肺炎较为常见。... 详细信息

研究背景:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种在自然界中广泛存在的革兰阴性条件致病菌,特别容易造成院内免疫功能低下患者感染。PA感染会导致多种急慢性疾病,如皮炎、肺炎、骨关节炎和泌尿系统炎症等,其中肺炎较为常见。目前临床上主要使用抗生素进行治疗,但因为PA具有很强的耐药性导致效果不佳,感染PA的肺炎患者死亡率就高达40.2%。此外,多重耐药和广泛耐药的PA菌株在全球范围内的流行,已经成为严峻的公共卫生问题,急需研究预防和控制PA感染的新策略。安全有效的PA疫苗是解决该问题经济和实用的手段,尽管已有60余种候选PA疫苗开展了动物实验或临床人体试验,但目前为止仍没有成功,其中原因可能是因为缺乏高效的抗原递送载体,导致疫苗免疫保护效果有限。高度保守的铜绿假单胞菌V抗原(PcrV)位于细菌Ⅲ型分泌系统的针尖处,是细菌分泌和转运毒素的核心组件。基于PcrV抗原的候选疫苗在抵抗肺部和烧伤创面PA感染中可提供有效保护。OprI是PA具有佐剂效应的外膜脂蛋白,与多肽或蛋白抗原融合后可提高其免疫原性,诱导强烈的体液免疫应答和细胞免疫应答。课题组在前期研究中将PcrV、OprI抗原经柔性Linker连接成融合抗原PcrV-OprI(rePO),在动物实验中显示出良好的保护效果并获得了国家发明专利授权。通过纳米颗粒载体递送是增强抗原免疫原性和保护效果的有效途径之一。PA自身的热休克蛋白GroES和groel可自发组装成七聚体,形成粒径均一,生物相容性良好的纳米颗粒。因此,我们推测以GroES或groel为载体,递送rePO抗原可能诱导更强的免疫应答和保护效果,以期成功研制PA疫苗。研究目的:为了进一步提高rePO的免疫原性和保护效果,本研究以GroES或groel为载体,构建递送rePO的两种纳米颗粒疫苗rePO-GroES和rePO-groel,评价其保护效果并阐明免疫保护机制,为研制高效且安全的PA疫苗奠定基础。研究方法与结果:1.融合蛋白rePO-GroES的制备、理化性质及安全性检测从NCBI上获得PA(PAO1菌株)的GroES基因序列,通过In-Fusion基因融合的方法构建p ET-28a(+)-reGroES和p ET-28a(+)-rePO-GroES重组质粒。经表达、亲和层析后得到质量合格的reGroES和rePO-GroES蛋白。通过分子筛层析、动态光散射和电镜对reGroES和rePO-GroES进行理化性质检测,结果发现reGroES和rePO-GroES蛋白在溶液中的估算分子量分别约为70.0 k Da和315.5 k Da,形成分布均匀的纳米颗粒,粒径分别约为10.2 nm和28.2 nm。通过细胞溶血实验、CCK-8细胞毒性实验以及小鼠急性毒性评价实验对rePO-GroES进行体内外安全性评价,结果表明rePO-GroES在浓度为10～80μg/m L范围内未发生溶血反应,在浓度为50～200μg/m L范围内对DC 2.4细胞活率无明显影响。rePO-GroES免疫组和空白组小鼠的组织病理检测结果未见明显差异。以上结果表明rePO-GroES成功自组装为七聚体纳米颗粒且安全性良好。2.融合蛋白rePO-GroES对PA感染的免疫保护效果及机制研究为了探究rePO-GroES的免疫原性,肌注免疫小鼠后使用ELISA法检测血清中的特异性抗体效价和抗体亚型,结果表明rePO-GroES免疫组小鼠血清中抗rePO Ig G抗体效价显著高于单体rePO免疫组,且以Ig G亚型为主(Pgroel的制备、理化性质及免疫原性检测从NCBI上获得PA(PAO1菌株)的groel基因序列,通过In-Fusion基因融合的方法构建p ET-28a(+)-regroel和p ET-28a(+)-rePO-groel重组质粒。经表达、亲和层析后得到质量合格的regroel和rePO-groel蛋白。通过分子筛层析、动态光散射和电镜对regroel和rePO-groel进

关键词：铜绿假单胞菌纳米颗粒 PcrV-OprI GroES groel

牙龈卟啉单胞菌groel对人脐静脉内皮细胞影响的研究

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牙龈卟啉单胞菌GroEL对人脐静脉内皮细胞影响的研究

作者：闫锐河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)的代谢产物groel对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨***致心血管疾病的发病机制提供理论... 详细信息

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)的代谢产物groel对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨***致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:不同浓度*** groel(2、4、6、8、10μg/m L)处理HUVEC24 h,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。用CCK-8法检测HUVEC的增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerse chain reaction,RT-q PCR)及酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、细胞间黏附分子-1(Intracellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)的表达水平。应用SPSS 21.0软件进行统计分析,单因素方差分析检验各组之间的差异,以Pgroel处理HUVEC 24 h后,2μg/m L *** groel组HUVEC的正常鹅卵石样外观消失,呈成纤维细胞形态改变;4μg/m L *** groel组和6μg/m L *** groel组HUVEC密度下降;8μg/m L *** groel组和10μg/m L *** groel组表现出明显的细胞毒性,细胞形态缩小变圆和脱落;10μg/m L GST组(阴性对照组)HUVEC形态与正常HUVEC相似。***-8实验结果显示:不同浓度*** groel处理HUVEC24 h后,*** groel(4、6、8、10μg/m L)组OD值显著低于正常对照组和GST组,差异具有统计学意义(Pgroel浓度的增加,对细胞活性的抑制作用逐渐增加。而2μg/m L *** groel组OD值与正常对照组和GST组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3.流式细胞术实验结果显示:不同浓度*** groel处理HUVEC 24 h后,*** groel(4、6、8、10μg/m L)组的凋亡率显著高于正常对照组和GST组,差异具有统计学意义(Pgroel浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐增加。而2μg/m L *** groel组与正常对照组和GST组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。***-q PCR及ELISA实验结果显示:*** groel在m RNA及蛋白水平上都显著刺激了HUVEC分泌IL-6、IL-8、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin,与正常对照组和GST组相比,差异具有统计学意义(Pgroel能以浓度依赖性方式抑制HUVEC增殖活性。*** groel能以浓度依赖性方式诱导HUVEC发生凋亡。*** groel还能引起HUVEC的炎症反应,从而在牙周炎促进动脉粥样硬化的发生中发挥着重要作用。

关键词：牙龈卟啉单胞菌 groel 牙周炎人脐静脉内皮细胞动脉粥样硬化

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groel的耗能分子伴侣机制

生物化学与生物物理进展 2015年第2期42卷 154-160页

作者：姚玲蔺宗傅正伟浙江工业大学生物与环境工程学院杭州310014 浙江清华长三角研究院嘉兴314000

双环结构Gro EL及其辅分子伴侣Gro ES是目前研究得最深入的分子伴侣.然而,Gro EL/Gro ES帮助蛋白质折叠的一些关键理化机制,尤其是水解ATP,Gro EL发生构象改变,能否主动调节蛋白质错误折叠中间体的构象,以促进错误折叠中间体的复性,仍... 详细信息

双环结构Gro EL及其辅分子伴侣Gro ES是目前研究得最深入的分子伴侣.然而,Gro EL/Gro ES帮助蛋白质折叠的一些关键理化机制,尤其是水解ATP,Gro EL发生构象改变,能否主动调节蛋白质错误折叠中间体的构象,以促进错误折叠中间体的复性,仍然存在争议.结合本研究组近年的工作,作者着力介绍Gro EL促进蛋白质折叠的主动解折叠机制.

关键词：蛋白质折叠分子伴侣主动解折叠 groel GroES

分子伴侣groel对青霉素G酰化酶亚基折叠的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第2期28卷 168-171页

作者：徐京宁杨运桂龚毅杨胜利俞俊棠华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国科学院上海生物工程研究中心上海200233

采用 Tac启动子控制表达质粒 ,在不同的宿主细胞中表达了青霉素 G酰化酶 ( PAC)。检测这些菌株所表达的 PAC活性 ,分析细胞内分子伴侣 Gro EL含量、PAC翻译后加工为 α、β亚基的状况 ,以及它们之间的关系。结果表明 :质粒 p KK- SP在... 详细信息

采用 Tac启动子控制表达质粒 ,在不同的宿主细胞中表达了青霉素 G酰化酶 ( PAC)。检测这些菌株所表达的 PAC活性 ,分析细胞内分子伴侣 Gro EL含量、PAC翻译后加工为 α、β亚基的状况 ,以及它们之间的关系。结果表明 :质粒 p KK- SP在不同宿主中表达时 ,翻译后加工状况有明显差异 ,单位质量细胞所表达的 PAC活性与翻译后加工效率相关 ,且与细胞内分子伴侣 Gro EL在菌体总蛋白中含量正相关。同时也阐明了亚基的折叠成为翻译后加工过程的限制步骤 ,细胞内分子伴侣 Gro EL有助于

关键词：青霉素G酰化酶翻译后加工分子伴侣 groel 宿主

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分子伴侣groel促进溶菌酶复性动力学

化工学报 2001年第12期52卷 1049-1053页

作者：董晓燕白姝刘晓光孙彦天津大学化工学院生物工程系天津300072

建立了溶菌酶复性的表观动力学模型 ,研究了分子伴侣groel促进变性溶菌酶复性的动力学行为 ,包括酶浓度、三磷酸腺苷 (ATP)浓度、groel与酶的摩尔比对复性率和复性速率常数的影响 .酶浓度对复性速率常数的影响比对复性率的影响显著 ;酶... 详细信息

建立了溶菌酶复性的表观动力学模型 ,研究了分子伴侣groel促进变性溶菌酶复性的动力学行为 ,包括酶浓度、三磷酸腺苷 (ATP)浓度、groel与酶的摩尔比对复性率和复性速率常数的影响 .酶浓度对复性速率常数的影响比对复性率的影响显著 ;酶的复性率和复性速率常数随ATP浓度的增大而提高 ;在蛋白质浓度一定的情况下 ,存在适宜的groel和ATP浓度。

关键词：复性分子伴侣 groel 动力学模型溶菌酶蛋白质变性

幽门螺杆菌外膜蛋白groel优势T—B联合抗原表位的鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第2期34卷 133-140页

作者：吴圆圆严杰孙爱华潘建平浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 浙江医学高等专科学校基础医学部杭州310053 浙江大学城市学院医学院

目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白groel的优势T细胞和B细胞（T．B）联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groel基因并构建其原核表达系统，SDS—PAGE检查目的重组蛋白rgroel表达情况。Ni—NTA亲和层析法提纯rgroel。采... 详细信息

目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白groel的优势T细胞和B细胞（T．B）联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groel基因并构建其原核表达系统，SDS—PAGE检查目的重组蛋白rgroel表达情况。Ni—NTA亲和层析法提纯rgroel。采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株中groel分布。TritonX-114法提取上述菌株外膜蛋白样本，采用Westernblot法检测外膜蛋白样本中的groel。采用专业生物信息学软件预测groel的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统。采用Westernblot法和ELISA分别检测含T—B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T—B联合表位肽的免疫反应性。结果幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株groel基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97．68％-99．63％。所构建原核表达系统能有效表达可溶性rgroel。groel定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜。groel168、groel258、groel288、groel365、groel396和GroEIA38六个主要的预测T—B联合抗原表位中，groel168显示了很强的阳性杂交信号。ELISA结果显示，groel168免疫反应性最强（P〈0．01），其次为groel258和groel288（P〈0．05）。结论groel是幽门螺杆菌外膜蛋白。groel168是groel的优势T-B联合抗原表位，可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗。

关键词：幽门螺杆菌外膜蛋白 groel T-B联合抗原表位噬菌体展示

沙门菌groel基因序列在系统发育分析和PCR-限制性片段多态性分析鉴定中的应用

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南方医科大学学报 2009年第10期29卷 2037-2039,2043页

作者：胡玉山刘俊华庞杏林陈守义陈晓光南方医科大学病原生物学系广东广州510515 广州市疾病预防控制中心广东广州510080

目的探讨groel基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门... 详细信息

目的探讨groel基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门菌血清群groel基因保守序列与变异序列呈锯齿状排列,其groel氨基酸系统发育树与groel基因系统发育树结果不完全相同,但O8、O9、O10之间亲缘关系最近,PCR-RFLP分析有5种模式图。结论groel基因序列在沙门菌系统发育中可作为遗传标记,同时也可作为分型鉴定的靶序列。

关键词： groel 系统发育 PCR-限制性片段多态性分析