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FMDV P1基因转化玉米和HIV-1 gag与gp120基因转化番茄的研究

FMDV P1基因转化玉米和HIV-1 gag与gp120基因转化番茄的研究

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作者：余云舟中国人民解放军军需大学

学位级别：硕士

本研究分别将编码口蹄疫病毒(Foot and Mouth disease Virse，FMDV)的结构蛋白P1全长基因，人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV-1)的结构蛋白gag基因、外膜糖蛋白gp120基因及gag-gp120嵌合基因克隆到含CaMV35S启动子控... 详细信息

本研究分别将编码口蹄疫病毒(Foot and Mouth disease Virse，FMDV)的结构蛋白P1全长基因，人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV-1)的结构蛋白gag基因、外膜糖蛋白gp120基因及gag-gp120嵌合基因克隆到含CaMV35S启动子控制下的植物表达载体中，构建了七种植物表达载体，pBI131SP1、pBI121P1、pBI121AP1、pBI121gag、pBI121gp120、pBI121gag-gp120和pBI131Sgp120，利用改进的冻融法将其导入农杆菌LBA4404和EHA105，构建了植物双元表达载体，为利用基因枪和农杆菌转化玉米、番茄提供了载体系统。以玉米自交系8902、340、4112未成熟幼胚为材料，诱导、继代筛选出良好的Ⅱ型胚性愈伤组织，以其Ⅱ型胚性愈伤组织为受体，通过农杆菌介导法和基因枪轰击法将FMDV的P1基因转化玉米，获得抗性转化再生植株25株，其中通过农杆菌转化为20株，转化频率为0.4％，基因枪转化为5株，转化频率为1.0％。GUS染色证明外源目的基因在玉米细胞中得到了表达，PCR、PCR-Southern杂交和基因组DNA点杂交及Southern blot分析证实目的基因P1已整合到转基因玉米的基因组中，获得阳性转化再生植株9株，其中农杆菌转化为8株，转化频率为0.16％，而基因枪转化为1株，转化频率为0.2％。为利用玉米作为生物反应器生产口蹄疫新型食用性疫苗作了探索性的基础研究。以番茄中蔬5号，中蔬9号，东农704和利生1号为材料，建立了番茄再生体系和遗传转化体系。通过农杆菌转化法将HIV-1的gag基因、即120基因和gag-gp120嵌合基因导入番茄，获得抗性转化再生植株13株，转化频率为1.4％。PCR、基因组DNA点杂交及PCR-Southern杂交分析证实目的基因已整合到转基因番茄的基因组中，获得阳性转化再生植株8株，其中gag-gp120基因转化为4株，gag基因转化为2株，gp120基因转化为2株，阳性转化频率为0.9％。为利用番茄作为生物反应器生产艾滋病新型口服疫苗提供了良好的基础。

关键词： FMDV HIV PI基因 gag基因 gp12基因玉米番茄疫苗

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