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gfp基因转化香樟胚性愈伤组织的研究

西北植物学报 2008年第3期28卷 465-469页

作者：杜丽曾晓慧周索包满珠南阳师范学院生命科学与技术学院河南南阳473000 华中农业大学园艺林学学院教育部园艺植物生物学重点实验室武汉430070

以香樟胚性愈伤组织作为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(gfp)的遗传转化研究。经农杆菌侵染后的胚性愈伤组织通过共培养、选择培养后获得抗性愈伤组织和体胚,对抗性愈伤组织及体胚的诱导过程进行了gfp荧光检测。结果... 详细信息

以香樟胚性愈伤组织作为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(gfp)的遗传转化研究。经农杆菌侵染后的胚性愈伤组织通过共培养、选择培养后获得抗性愈伤组织和体胚,对抗性愈伤组织及体胚的诱导过程进行了gfp荧光检测。结果表明,gfp基因能在抗性愈伤组织和体胚中强烈表达,证明gfp基因能够在香樟遗传转化中得到应用。对抗性愈伤组织的PCR检测初步证实外源gfp基因已整合到香樟胚性愈伤组织的基因组中。

关键词： gfp基因香樟根癌农杆菌 PCR

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gfp基因转化藿香的研究

生物技术通报 2010年第8期26卷 116-119页

作者：程志号惠荣奎蔡明历郝大翠刘焰华中农业大学药用植物研究所武汉430070

以藿香无菌苗幼嫩茎段为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(gfp)的遗传转化研究。经农杆菌侵染,通过共培养、选择培养后获得其抗性愈伤组织,对抗性愈伤组织的诱导过程进行了gfp荧光检测。结果表明,gfp基因能在抗性愈伤... 详细信息

以藿香无菌苗幼嫩茎段为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(gfp)的遗传转化研究。经农杆菌侵染,通过共培养、选择培养后获得其抗性愈伤组织,对抗性愈伤组织的诱导过程进行了gfp荧光检测。结果表明,gfp基因能在抗性愈伤组织中强烈表达,证明gfp基因能够在藿香遗传转化中得到应用。对抗性愈伤组织的PCR检测初步证实外源gfp基因已整合到藿香愈伤组织的基因组中。

关键词：藿香 gfp基因根癌农杆菌 PCR

羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控gfp基因在乳腺细胞的表达

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生物工程学报 2002年第1期18卷 112-116页

作者：刘明军李文蓉武坚黄俊成郭志勤曲新勇 Paul Kroon 新疆畜牧科学院乌鲁木齐830000 澳大利亚昆士兰大学生化系

and 3′ flanking region of ovine BLG were amplified from sheep genomic DNA according to the published whole sequence of ovine BLG and cloned to pGEM-T vector *** partially sequencing,the sequences of BLG 5′ and 3′ flanking were the same as that of publication *** recombinant structure used to direct exogenous gene especially to express in mammary gland was constructed by joining 4.2kb 5′ flanking with 2.1kb 3′ *** order to assess the efficiency of BLG regulatory elements,green fluorescent protein (gfp) gene as a reporter was fused with BLG construct and transfected the mammary epithelial cells (TD47).Through observation under UV microscope and detection by fluorometer,it is demonstrated that the gfp has been successfully expressed in TD47 cell *** virtue of direct observation and quantitative analysis,the BLG-gfp construct can be served as a model for the quick assessment of mammary gland expression construct.

关键词：羊BLG基因 3′调控区调控 gfp基因羊乳球蛋白基因克隆绿色荧光蛋白乳腺细胞系表达

马铃薯质体表达载体构建及gfp基因在块茎中的瞬时表达

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作物学报 2008年第6期34卷 978-983页

作者：丁玉梅杨正安周晓罡张绍松孙茂林云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所／云南省农业生物技术重点实验室云南昆明650223 云南大学生命科学学院云南昆明650091 云南农业大学园林园艺学院云南昆明650201

利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-... 详细信息

利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的马铃薯质体定点转化载体pBMLSIA-gfp,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计。采用该载体对马铃薯块茎进行基因枪法转化,结果表明,gfp基因可在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下在马铃薯块茎中瞬时高量表达,经基因枪轰击后马铃薯块茎在紫外投射仪下产生很强的绿色荧光,在距离为6cm,压力1100psi轰击2枪的条件下产生的绿色荧光最强。马铃薯块茎可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析表明,gfp蛋白表达量约占总可溶性蛋白的15.4%-30.2%,均达到了较高的表达水平。该载体对后期马铃薯质体转化体系的建立和其他功能基因导入马铃薯质体进行性状改良具有重要应用价值。

关键词：马铃薯质体载体构建 gfp基因瞬时表达

生防菌株ZA1的gfp基因标记及其功能稳定性测定

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植物保护学报 2017年第4期44卷 657-663页

作者：王颖杨成德薛莉张振粉冯中红张俊莲甘肃农业大学植物保护学院甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室兰州730070 甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室兰州730070

为明确生防莫海威芽胞杆菌Bacillus mojavensis菌株ZA1在作物体内定殖与作物和病原物的作用机理,运用电击转化法将绿色荧光蛋白表达载体pgfp78导入菌株ZA1体内,并采用细菌培养法、继代培养法和平板抑制法检测其功能稳定性。结果表明,质... 详细信息

为明确生防莫海威芽胞杆菌Bacillus mojavensis菌株ZA1在作物体内定殖与作物和病原物的作用机理,运用电击转化法将绿色荧光蛋白表达载体pgfp78导入菌株ZA1体内,并采用细菌培养法、继代培养法和平板抑制法检测其功能稳定性。结果表明,质粒pgfp78成功导入菌株ZA1,标记后菌株ZA1-gfp经形态学和分子生物学验证均证明菌株ZA1已成功标记,标记菌株ZA1-gfp与菌株ZA1形态一致,在荧光显微镜下呈现明亮的绿色,并且能够提取导入质粒pgfp78,扩展出质粒所携带的启动子78序列。功能稳定性鉴定结果表明,标记菌株ZA1-gfp遗传稳定性达100%;与菌株ZA1的生长速率差异不显著,且不影响菌株的运动性;菌株ZA1对马铃薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌的抑制率分别为64.50%、68.35%和66.55%,标记菌株ZA1-gfp对3种病原真菌的抑制率分别为67.46%、76.56%和66.75%,表明外源质粒的导入,不影响菌株的抑菌能力。

关键词：莫海威芽胞杆菌 gfp基因标记稳定性

山羊BLG基因5′调控序列克隆及其调控gfp基因细胞的表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第5期33卷 12-14,18页

作者：宋红卫郑月茂张明烽唐爽张涌西北农林科技大学生物工程研究所陕西杨凌712100

通过PCR扩增出2.2kb的山羊β-乳球蛋白基因5′端的调控序列,包括第一外显子和第一内含子。测序结果表明,该序列与GenBank中登录序列相比,同源性为99.5%。用其替代表达载体pEgfp-c1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(gfp)在山... 详细信息

通过PCR扩增出2.2kb的山羊β-乳球蛋白基因5′端的调控序列,包括第一外显子和第一内含子。测序结果表明,该序列与GenBank中登录序列相比,同源性为99.5%。用其替代表达载体pEgfp-c1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(gfp)在山羊乳腺细胞中的瞬时表达,结果发现该调控序列可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊乳球蛋白(BLG)基因表达调控序列的有效性。表明克隆的调控序列可用于乳腺生物反应器的研究。

关键词：山羊 β-乳球蛋白基因 gfp基因

精子载体法转gfp基因文昌鱼活体胚胎的获得

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科学通报 2005年第4期50卷 402-404页

作者：喻丹张培军中国科学院海洋研究所中国科学院研究生院北京100039

头索动物文昌鱼是脊椎动物与无脊椎动物在进化上的过渡类型, 是进化发育生物学研究的模式生物[1]. 研究和比较文昌鱼和脊椎动物发育过程的基因调控, 对于了解脊椎动物的起源和进化, 尤其是了解在原始脊索动物向脊椎动物进化的转折点, ... 详细信息

头索动物文昌鱼是脊椎动物与无脊椎动物在进化上的过渡类型, 是进化发育生物学研究的模式生物[1]. 研究和比较文昌鱼和脊椎动物发育过程的基因调控, 对于了解脊椎动物的起源和进化, 尤其是了解在原始脊索动物向脊椎动物进化的转折点, 基因调控变化如何影响了身体图式(body plan)进化有着重大意义. ......

关键词：文昌鱼进化脊椎动物 gfp基因体胚精子载体法脊索活体基因调控胚胎

生菜质体表达载体构建及gfp基因原核表达分析

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西南农业学报 2015年第6期28卷 2644-2648页

作者：周丽英李虎丁玉梅卜璐璐侯思明许俊强张应华杨正安云南农业大学园林园艺学院云南昆明650201 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南昆明650223 云南省农业生物技术重点实验室云南昆明650223 昆明学院生命科学与技术系云南昆明650118

以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpo A基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体p Brpo A-gfp,并进行了原核表达分析。结果表明,PCR所扩增的两条基因区... 详细信息

以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpo A基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体p Brpo A-gfp,并进行了原核表达分析。结果表明,PCR所扩增的两条基因区段大小为1.2与1.1 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aad A-Tpsb A表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子Tpsb A的调控下高效表达,表达量约占总可溶性蛋白的45.6%,包涵体占菌体蛋白的47.5%,该载体的构建为后期生菜质体转化体系的建立和其它功能基因导入生菜质体进行性状改良奠定了基础。

关键词：生菜质体表达载体 gfp基因高水平表达

农杆菌介导gfp基因转化苹果茎尖碎片获得转基因植株

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果树学报 2013年第6期30卷 909-913,I0001页

作者：李玉生吴永杰程和禾陈龙赵艳华吴雅琴河北省农林科学院昌黎果树研究所河北昌黎066600

【目的】为解决基因型依赖性比较强的苹果品种遗传转化困难等问题,研究不同伤害处理方式下苹果茎尖碎片的再生能力及其对苹果转化率的影响。【方法】以苹果‘姬神’试管苗为试材,运用农杆菌介导法对苹果茎尖和离体叶片进行遗传转化。【... 详细信息

【目的】为解决基因型依赖性比较强的苹果品种遗传转化困难等问题,研究不同伤害处理方式下苹果茎尖碎片的再生能力及其对苹果转化率的影响。【方法】以苹果‘姬神’试管苗为试材,运用农杆菌介导法对苹果茎尖和离体叶片进行遗传转化。【结果】将茎尖纵切为4部分时,可以高比率的形成愈伤组织(88.4%)和再生不定芽(59.8%)。在20 mg·L-1的卡那霉素筛选压下,300个茎尖外植体中有50.4%的茎尖碎片形成愈伤组织并获得了19株表达gfp的转基因植株。而在同样的筛选压下有22.6%农杆菌介导的离体叶片形成愈伤组织,但不能获得转基因植株。降低筛选压可以提高植株再生率,但其中包含大量嵌合体,转化效率并没有明显提高。【结论】苹果茎尖做为转化受体基因型依赖性较低,要优于苹果离体叶片。

关键词：苹果基因型转基因 gfp基因茎尖碎片