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Construction of a Normalized full-length cDNA library of Sesame Developing Seed by DSN and SMART^(TM)

Agricultural Sciences in China 2011年第7期10卷 1004-1009页

作者： KE Tao DONG Cai-hua MAO Han ZHAO Ying-zhong LIU Hong-yan LIU Sheng-yi Key Laboratory for Oil Crops Biology Ministry of Agriculture/Oil Crops Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences Wuhan 430062 P.R.China Department of Life Science and Technology Nanyang Normal University Nanyang 473061 P.R.China

Sesame （Sesamue indicum L.） is one of the most important oilseed crops with high oil yield. Here, we described a simple and efficient method for constructing a normalized cDNA library from a high oil content cultivar of sesame Zhongzhi 14, during its oil accumulation stages. It combined switching mechanism at 5？end of RNA transcript （SMART） technique and duplex-specific nuclease （DSN） normalization methods. Double-stranded cDNAs were synthesized from mRNAs, processed by normalization and Sfi I restriction endonuclease, and finally the cDNAs were ligated to pDNR-LIB vector. The ligation mixture was transformed into Escherichia coli DH10B by electroporation. The capacity of the library was 1.0？06 clones in this library. Gel electrophoresis results indicated the fragments ranged from 700 to 2 000 bp, with the average size of 1 800 bp. Random picking clones showed that the recombination rate was 100%. The results showed that the cDNA library constructed successfully was a full-length library with high quality, and could be used to screen the genes related to development of oil synthesis.

关键词： DSN full-length library normalization oil accumulation Sesamue indicum Zhongzhi 14 cDNA library switching mechanism SMARTTM

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