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Dosage Effects of fadrozole on Growth and Development of Sex-Reversed Genetic Female Chickens

Journal of Integrative Agriculture 2013年第6期12卷 1049-1053页

作者： YANG Xiu-rong JIANG He-sheng ZHENG Jiang-xia QU Lu-jiang CHEN Si-rui LI Jun-ying XU Gui- yun YANG Ning Department of Animal Genetics and Breeding Guangxi University Department of Animal Genetics and Breeding National Engineering Laboratory for Animal Breeding China Agricultural University

fadrozole, an aromatase inhibitor, can masculinize genetic female chickens and high-dose decreases the hatchability. Therefore, it is important to study the growth and development of sex-reversed females after hatch. Chick embryos from a population of CAU3 egg-type were treated with different concentrations of fadrozole prior to the sexual differentiation at E3.0 （st18）. At hatch, the phenotypic sex and genetic sex were identified by vent sexing and genetic diagnosis with CHD1, respectively. Body weight and shank length of sex reversal were tested at 8 and 20 wk, respectively. Testicular development, oviduct and ovarian degeneration were observed and serum concentration of estradiol and testosterone were tested with radioimmunoassay （RIA） at 30 wk. The results showed that body weight and shank length of sex- reversed females were not significantly different between low-dose groups （0.1, 0.3, and 0.5 mg for F1, F2, and F3, respectively） and high-dose groups （1.0 and 1.3 mg for F4 and F5, respectively）（P〉0.05）. Left and right testes or ovotestes in F2, F3, F4, and F5 groups were heavier than that of in F1 group （P〈0.05）. While the gonad weight of treatment groups were less than that in male control （P〈0.05）, oviduct weight in F2, F3, F4, and F5 groups were significant differences compared with female control and F1 group （P〈0.05）. Egg number from onset of laying egg to 30 wk in F4 and F5 groups were less than in female control, F1 and F2 groups （P〈0.05）. Serum testosterone level in F5 group was significant higher compared with female control, F1, F2, F3, and F4 groups （P〈0.05）, but significant lower compared with male control （P〈0.05）. While concentration of serum estradiol in F5 group was significant lower compared with female control, F1, F2, and F4 groups （P〈0.05）. In conclusion, the concentration of fadrozole do not affect postnatal growth of sex-reversed female chicken and the degree of sex-reversed females elevate with the increase of fadrozole concentration at

关键词： chicken fadrozole growth and development reproductive system sex reversals

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fadrozole对公鸡的生长发育和精清激素浓度的影响

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中国畜牧杂志 2009年第1期45卷 10-13页

作者：杨秀荣郑江霞那日苏李俊英杨宁中国农业大学动物科学技术学院北京100193

芳香化酶抑制剂fadrozole能诱导雌性鸡胚雄性化,而不影响出生时雄性鸡胚的性别,但fadrozole是否影响公鸡出雏后的生长发育和繁殖能力尚不清楚。在性别分化前(E3.0),向农大3号矮小商品代鸡胚注入PBS和不同剂量的fadrozole(0.、10.3、0.5... 详细信息

芳香化酶抑制剂fadrozole能诱导雌性鸡胚雄性化,而不影响出生时雄性鸡胚的性别,但fadrozole是否影响公鸡出雏后的生长发育和繁殖能力尚不清楚。在性别分化前(E3.0),向农大3号矮小商品代鸡胚注入PBS和不同剂量的fadrozole(0.、10.3、0.5、1.0mg和1.3mg分别为1F、F2、F3、F4和F5),以出雏后的公鸡作为试验材料,探索fadrozole对出雏后公鸡的生长发育、精清中的性激素和生长轴激素的影响。结果表明:高剂量组F4和F5分别为33.33%和13.33%,出雏率显著低于对照组P(0.05);各剂量fadrozole处理组和对照组的体重和胫长在8周龄和20周龄时无显著差异P(>0.05);性成熟后(30周龄),F5精清中的睾酮(T)和雌二醇(E2)显著高于对照组和其他各处理组(P0.05);本试验说明fadrozole不影响雄性胚胎的性腺分化,但高浓度的fadrozole不利于鸡胚的发育;fadrozole不影响出生后公鸡的生长发育、精清中的生长轴激素激分泌和精清中睾酮与雌二醇的比值。

关键词： fadrozole 性激素性长轴激素生长发育性反转鸡

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鸡胚注射fadrozole后性别相关基因的表达研究

鸡胚注射Fadrozole后性别相关基因的表达研究

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作者：牛伟贺四川农业大学

学位级别：硕士

禽类的性别决定以及性腺发育是在多个基因的共同作用下完成的,还受到体内激素水平的影响。目前而言,禽类性别决定机制还不明确。研究表明,fadrozole能够抑制鸡胚雌激素的合成,促使ZW型鸡胚发育为雄性个体。由于鸡胚的孵化周期短,成本低... 详细信息

禽类的性别决定以及性腺发育是在多个基因的共同作用下完成的,还受到体内激素水平的影响。目前而言,禽类性别决定机制还不明确。研究表明,fadrozole能够抑制鸡胚雌激素的合成,促使ZW型鸡胚发育为雄性个体。由于鸡胚的孵化周期短,成本低,因此,性反转鸡胚已成为研究禽类性别相关课题的重要模型。本研究通过对孵化至3.5d的胚蛋气室注射fadrozole以诱导鸡胚性反转,通过CHD1基因的微量全血PCR确定个体的遗传性别,通过显微镜下观察鸡胚性腺形态变化并对其进行HE染色,通过荧光定量PCR检测性别分化相关基因（DMRT1、SOX9、FSOL2、RSPO1）在 E8、E10、E14、E19、1wk（出雏 1 周龄）鸡（胚）性腺中的表达,通过Western-Blot检测SOX9和RSPO1蛋白在E19鸡胚性腺中的表达,以探索其表达变化。结果如下:鸡胚蛋经fadrozole处理后,ZZ型试验组和对照组个体左右性腺大小相似,均呈棒状,形态结构一致。部分ZW型试验组个体性腺明显雄性化,左侧性腺呈棒状,似睾丸,与ZW型对照组的扁平带有棱角的卵巢特征不同;另有一些ZW型对照组个体右侧性腺并没有萎缩退化,大小和左侧性腺接近。组织切片显示其髓质层出现了 ZZ型才有的曲细精管,而皮质层变薄且丢失了 ZW型应有的原始卵泡结构。在对照组中,DMRT1和SOX9基因在各时期的雄性（ZZ）性腺中有较高表达,而FOXL2和RSPO1在各时期的雌性（ZW）性腺中表达量较高,性别间差异显著（P＜0.05）;相比于上述性别的高表达,四个基因在心、肾、肝和腿肌中的表达量均较低,但SOX9和FOXL2在脑组织中的表达量仅次于优势表达的性腺。经fadrozole的处理后,四个目的基因在ZZ（雄性）对照组和处理组个体性腺中表达差异均不显著（P＞0.05）,而在ZW（雌性）性腺的对照组和处理组间表现出显著差异（P＜0.05）,表明fadrozole对雌性性腺的效应明显。在ZW处理组性腺中,DMRT1和SOX9两基因的表达量均显著高于ZW对照组（P＜0.05）,前者随时间逐渐下降,而后者则逐渐增加;在ZW处理组性腺中,FOXL2和RSPO1基因的表达量显著低于ZW对照组（P＜0.05）,并且随着鸡胚的发育逐渐增加。经Western-Blot检测发现,ZW型处理组个体性腺中SOX9蛋白的表达量明显高于ZW型对照组,而其RSPO1蛋白的表达则明显低于ZW对照组;两蛋白在ZZ型处理组和对照组之间的表达差异不明显。这些结果与上述荧光定量PCR的结果一致。综上所述,DMRT1和SOX9基因主要在雄性性腺中表达,而FOXL2和RSPO1基因主要在卵巢中表达。fadrozole处理3.5d鸡胚后,一些ZW型个体性腺出现了雄性特征,并导致其性腺中DMRT1和SOX9基因表达显著上调以及FOXL2和RSPO1基因表达显著下调,并检测到SOX9和RSPO1蛋白表达水平出现的一致性变化;而ZZ型个体没有明显变化。

关键词：鸡 fadrozole 性腺 RT-qPCR DMRT1 SOX9 FXL2 RSPO1

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性类固醇激素对南方鲶性分化的影响

性类固醇激素对南方鲶性分化的影响

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作者：焦保卫西南师范大学

学位级别：硕士

用芳香化酶(雌激素合成酶)抑制剂(aromatase inhibitor，AI)fadrozole、雌激素受体拮抗剂tamoxifen、MT(methyltestosterone，MT)在孵化后5天(dah，day after hatching)到48dah以不同剂量投喂处理了人工授精孵化的南方鲶全雌幼鱼。各种药物的剂量分别为：雌二醇1mg／kg、10mg／kg，fadrozole 10mg／kg、150mg／kg，tamoxifen 25mg／kg，MT 10mg／kg、50mg／kg。另外分别在5dah—15dah、5dah—25dah和5dah—75dah用MT(50mg／kg)进行了处理。在处理结束后，从肉眼、组织学、mRNA水平三个层次对处理结果进行了观察和研究。 fadrozole处理组：5月龄肉眼检测显示，低剂量的fadrozole(10mg／kg)处理得到了50％的雄鱼，组织学检测与此相符。48dah组织学结果显示，fadrozole处理引起南方鲶一部分性腺发育迟缓，处于未分化状态，而此时的雌鱼性腺已经分化出明显的卵巢腔和卵母细胞。在48dah，脑型芳香化酶和卵巢型芳香化酶在性腺的mRNA表达量与全雌对照组相比明显降低。在脑中，脑型芳香化酶表达未受到影响。意料之外的是，高剂量的fadrozole处理反而得到了全雌，肉眼、组织学、芳香化酶mRNA水平检测均如此。 tamoxifen处理组：5月龄肉眼检测显示该处理组得到了40％的雄鱼，组织学检测与此相符。48dah组织学结果显示，tamoxifen处理引起南方鲶一部分性腺发育迟缓，处于未分化状态。在48dah，脑型芳香化酶和卵巢型芳香化酶在性腺的mRNA表达量与全雌对照组相比明显降低，在脑中，脑型芳香化酶表达未受到影响。 MT处理组：5月龄肉眼解剖结果显示，无论低剂量(10mg／kg)还是高剂量(50mg／kg)MT对南方鲶幼鱼性腺性分化方向均无影响，对48dah的性腺组织结理学硕士论文：类固”激素对内力岭州;分化的影响构无影响。但用＊T处理引起南方鲶尾巴分叉等外部形态变化和性腺形态畸形。同时伴随有相互撕咬、不集群等行为变化。药物处川丝c束，这些现象也逐渐消失。芳香化酶是雌激素生物合成中的关键酶，它俗化从雄激素合成雌激素的反应。为了从分于水平证实雌激素在性分化中的仆川，我《IJ｝L4掀芳香化酶的保守区段设计简并引物，通过RTPCR结合RACE方法兜隆了脑型芳香化酶的CDNA，该 CDNA全长 2337个核苦酸，其中 5’非翻译区 192个核－苦酸，3’非翻译区 624个核昔酸，编码区1521个核昔酸，编码一个长507个氨站酸残J种南方蛤脑型芳香化酶蛋白前体。推导的氨基酸序列与斑点叉尾删脑型垮化酶的同源性最高（83 ％）。用半定量RT P＊R方法得出脑型芳化酶的州织分布规律为：脑＞性腺＞肌肉＞脾，在鳃、肝、心组织中没有表达。雌鱼肾脏中也有很高水平的表达（介于脑与性腺之间），而在雄鱼，肾脏中没有表达。同时，坯用半定量RTI℃R方法研究了脑型芳化酶和卵巢型芳香化酶在各处理组的表达悄况（n。RNA水平），结果己如上述。本研究结果说明：雌激素在南方鲶性分化个起重要仆川，入雄激素对南方鲶的性分化没有影响。

关键词：性类固醇激素雄激素雌激素南方鲶性别分化芳香化酚 fadrozole tamoxifen MT

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