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HIV-1 env蛋白的制备活性鉴定与快速检测方法的建立

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中国现代医学杂志 2009年第10期19卷 1474-1478页

作者：杜彤崔大祥刘彬杨浩鲍晨晨高峰上海交通大学微纳科学技术研究院微纳制造技术国家重点实验室薄膜与微细技术教育部重点实验室生物纳米工程研究室上海200240

目的制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1gp41抗体方法。方法以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS10... 详细信息

目的制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1gp41抗体方法。方法以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS100试剂盒合成env蛋白,用磁珠法纯化蛋白,用Western Blot方法鉴定蛋白活性。纯化后的HIV-1 env蛋白采用量子点标记,与样品液中的抗HIV-1gp41抗体进行免疫反应,根据量子点的荧光信号的变化,定量检测样品液中抗gp41抗体的浓度。结果体外快速翻译系统表达出相对分子量约为97KD的env蛋白;Western blotting证实纯化后的蛋白具有生物活性,量子点标记的env蛋白与山羊抗HIV-1gp41抗体发生了免疫凝集反应,使量子点发生荧光淬灭,荧光信号强度与抗体浓度呈负相关。结论HIV-1 env蛋白可采用RTS系统进行大量表达,分离纯化后的env蛋白具有生物学活性,建立的量子点标记的免疫凝集反应方法检测HIV gp41结果准确,方法简便。

关键词： HIV-1 env基因抗HIV-1 gp41抗体艾滋病毒量子点标记的荧光免疫分析快速翻译系统 Western Blot分析

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鸡白血病检测技术研究

中国家禽 2010年第7期32卷 34-35页

作者：秦爱建扬州大学兽医学院江苏扬州225009

1鸡J亚群白血病病毒env基因的克隆和表达鸡白血病病毒（ALV）env基因编码的囊膜蛋白，位于病毒表面，其与宿主细胞受体相互作用，是亚群表型的决定因素。为研究ALV-J env基因及其表达产物特点，为ALV-J的检测奠定基础，本实验室对ALV-J ... 详细信息

1鸡J亚群白血病病毒env基因的克隆和表达鸡白血病病毒（ALV）env基因编码的囊膜蛋白，位于病毒表面，其与宿主细胞受体相互作用，是亚群表型的决定因素。为研究ALV-J env基因及其表达产物特点，为ALV-J的检测奠定基础，本实验室对ALV-J env基因进行了克隆和真核表达。值得注意的是，

关键词：白血病病毒检测技术 env基因 ALV-J 克隆和表达鸡囊膜蛋白基因编码

基于慢病毒载体系统构建重组JSRV-NM假病毒

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天津医药 2014年第8期42卷 749-751页

作者：龚淑敏李光明吴志敏董莉真程彬张斌朱泽天津市第四医院 300222 天津医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代... 详细信息

目的采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代VSV-G病毒的包膜质粒pMD.G,转染293T细胞,复制、包装并产出重组的JSRV-NM假病毒。用real-time PCR检测WPRE表达来测定假病毒的滴度,用接种24孔板的293T细胞检测假病毒感染力。结果成功重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV-NM假病毒,可超速离心浓缩成高滴度(1×108TU/mL)的病毒,Lv-JSRV-NM包膜与Lv-VSV-G包膜按感染复数(MOI)=3的比例感染Hela细胞具有相同的感染能力。结论基于慢病毒质粒构建的JSRV-NM假病毒,能够在293T细胞中复制和扩增,产出的假病毒具有稳定性、感染力和安全性,符合二级生物实验室安全的要求。

关键词： JSRV-NM病毒假病毒慢病毒载体 env基因病毒包装

A亚群禽白血病病毒QC6281株的分离与gp85基因序列分析

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中国兽医杂志 2008年第12期44卷 9-12页

作者：乔彦华王永强庞平金铮陈福勇中国农业大学动物医学院北京海淀100193

本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中... 详细信息

本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中,扩增的env基因片段大小为1 239 bp,其中包括完整的gp 85基因,将gp 85基因亚克隆到pMD19-T-si mple载体中并测序,gp 85基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸。将env基因片段和推导的氨基酸序列与GenBank中9株ALV的env基因相应序列做同源性分析并制作进化树图谱。发现QC6281与已发表的A亚群禽白血病病毒株该区域核苷酸同源性在83.8%～98%,氨基酸同源性在86.9%～98.5%。其中与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)同源性最高,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98.5%;且与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病性研究打下基础。

关键词：禽白血病病毒 gp85基因 env基因序列比较

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马传贫病毒结构蛋白分子生物学研究进展

黑龙江畜牧兽医 2002年第11期 42-43页

作者：朱海虹黑龙江畜牧兽医杂志社黑龙江哈尔滨150008

马传贫病毒为正链RNA病毒,具有反转录病毒特有结构.病毒RNA基因组两端是完全相同的重复区(R区),在5'R下游是5'独特区(U5);3'端R区上游是3'独特区(U3).

关键词：马传贫病毒结构蛋白分子生物学 gag基因 pol基因 env基因编码蛋白

2017年克拉玛依市HIV感染新发病例亚型分析

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中国艾滋病性病 2018年第10期24卷 1051-1052页

作者：刘佳郭秀梅胡俊克拉玛依市疾病预防控制中心

艾滋病病毒I型(HIV-1)是目前全球HIV主要流行毒株,M组是其主要亚型组,包括A1、A2、A3、A4、B、C、D、F1、F2、G、H、J和K亚型[1]。随着对M组病毒研究的深入,又发现了不同亚型及同一亚型不同毒株之间的基因重组现象,称之为流行重组形式(C... 详细信息

艾滋病病毒I型(HIV-1)是目前全球HIV主要流行毒株,M组是其主要亚型组,包括A1、A2、A3、A4、B、C、D、F1、F2、G、H、J和K亚型[1]。随着对M组病毒研究的深入,又发现了不同亚型及同一亚型不同毒株之间的基因重组现象,称之为流行重组形式(Circulating recombinant forms,CRFs),主要流行于我国的HIV-1毒株有B、C、01_AE、07_BC、08_BC[2]。新疆作为我国艾滋病流行和传播较广泛的地区,07_BC为主要流行亚型[3]。为了揭示克拉玛依市HIV流行和变异规律,对2017年克拉玛依市HIV感染新发病例毒株流行分布和进化趋势进行分析。

关键词：艾滋病病毒1型 env基因亚型

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河南某斗鸡原种场禽白血病病毒感染状况监测

中国兽医杂志 2019年第9期55卷 75-79页

作者：姬向波李新锋谢娜娜高小韩李婉涛向瑞平河南牧业经济学院实验研究中心河南省畜禽遗传资源保护工程技术研究中心

为了解河南某斗鸡原种场禽白血病病毒(ALV)感染状况,分别于2017年1、4、9、12月和2018年7月随机或全群采集该场核心鸡群雏鸡胎粪棉拭子40份、泄殖腔棉拭子973份、血清150份以及留种用公鸡精液42份,采用ELISA方法分别检测雏鸡胎粪棉拭子... 详细信息

为了解河南某斗鸡原种场禽白血病病毒(ALV)感染状况,分别于2017年1、4、9、12月和2018年7月随机或全群采集该场核心鸡群雏鸡胎粪棉拭子40份、泄殖腔棉拭子973份、血清150份以及留种用公鸡精液42份,采用ELISA方法分别检测雏鸡胎粪棉拭子、泄殖腔棉拭子、精液的ALV-p27抗原和血清样品的ALV-A/B、ALV-J亚型抗体。采集33份泄殖腔棉拭子ALV-p27阳性鸡的血浆,接种DF-1细胞,分离外源性ALV,并对分离株env基因进行了序列测定和同源性分析。结果显示,初次检测的雏鸡胎粪棉拭子ALV-p27阳性率为0,之后3次检测的成年鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率分别为84.48%、88%和78.10%;血清ALV-A/B、ALV-J亚型抗体阳性率两次检测结果分别为17.14%、0%和79.31%、24.14%;留种用公鸡精液ALV-p27抗原阳性率9.52%。DF-1细胞培养共分离到6株ALV,其中2株env基因序列与ALV-A亚型SDAU09E2株、ALV-J亚型HPRS103株同源性分别为89.2%、56.4%和89.2%、56.0%。表明该核心鸡群ALV感染率较高,且以A亚型为主。

关键词：河南斗鸡禽白血病病毒感染 env基因同源性

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禽肿瘤病毒诱导肿瘤转移—肿瘤转移新机制

中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 576-576页

作者： ZHOU JING ZHOU DE-FANG DU XU-SHENG 不详

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)是一种致瘤性反转录病毒,于1991年在英国首次报道,在所有ALV亚群中致病性和传染性最强,引起鸡的临床病例最多,占禽类白血病(AL)病例的90%以上。ALV-J在临床上常造成被感染鸡出现持续性病毒血症,并伴随慢性炎症... 详细信息

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)是一种致瘤性反转录病毒,于1991年在英国首次报道,在所有ALV亚群中致病性和传染性最强,引起鸡的临床病例最多,占禽类白血病(AL)病例的90%以上。ALV-J在临床上常造成被感染鸡出现持续性病毒血症,并伴随慢性炎症、免疫抑制和肿瘤多样化,其完整的基因组包含gag、pol和env基因,分别编码病毒结构蛋白、反转录酶和囊膜蛋白。目前尚未研制出有效的疫苗对ALV-J进行防控,主要是通过净化控制病毒的传播,由于其独特的传播能力和致病性,给家禽业造成了严重的经济损失。ALV-J主要诱发髓细胞瘤,后期还会诱导肾母细胞瘤、神经胶质瘤、淋巴细胞瘤、血管瘤、成红细胞瘤以及平滑肌肉瘤等多种肿瘤。肿瘤的形成和转移是造成病鸡死亡的主要原因。之前的研究一直认为肿瘤的转移是肿瘤细胞本身诱导实现的。

关键词：反转录病毒病毒结构蛋白 env基因家禽业病毒血症感染鸡免疫抑制反转录酶

2017-2019年我国部分省份白羽肉鸡ALV-J的分离鉴定及env序列分析

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2017-2019年我国部分省份白羽肉鸡ALV-J的分离鉴定及env序列分析

作者：栾秀敏山东农业大学

学位级别：硕士

禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染引发的多种肿瘤病的统称,临床症状主要表现为多种脏器肿瘤、免疫抑制和严重的生长迟缓。该病在19世纪末出现以来,已在世界范围内广泛流行。该病于20世纪末在我国开始流行并在200... 详细信息

禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染引发的多种肿瘤病的统称,临床症状主要表现为多种脏器肿瘤、免疫抑制和严重的生长迟缓。该病在19世纪末出现以来,已在世界范围内广泛流行。该病于20世纪末在我国开始流行并在2008年达到高峰,严重影响了我国商品肉鸡和蛋鸡的养殖,造成了巨大的经济损失。为控制禽白血病的流行与传播,我国对禽白血病实施了严格的净化工作,力求从种源净化做起,在全国范围内逐步净化禽白血病。目前,禽白血病净化工作已经取得了巨大成功,尤其是J亚群禽白血病病毒(subgroup J ALV,ALV-J)在我国商品肉鸡和蛋鸡养殖业中得到一定控制,经济效益得到了明显提升。然而,2017年以来,我国多个省份肉种鸡场再次出现禽白血病,临床症状较之前出现变化,发病率和死亡率显著提高。为了解引发此次禽白血病发生的病原学特征,本研究从我国辽宁、吉林、天津、山东、河北和江苏六个省份21家发生禽白血病症状的养殖场进行了系统的流行病学分析。生产数据显示上述养殖场患病鸡临床症状主要出现于开产前后,发病平均周龄为17.5周,平均日死亡率为6.8/10000。主要症状表现为肝脏肿瘤、脾脏肿瘤、肾脏肿瘤以及最新出现的脊骨肿瘤,且脊骨肿瘤出现的养殖场死亡率显著高于其他养殖场。随后,病毒分离和间接免疫荧光实验显示上述21家养殖场均存在ALV-J的感染,阳性率在20%-100%之间,总体阳性率约为60%,且发生脊骨肿瘤的山东养殖场阳性率均为100%。随后,本研究对所分离到的21株代表毒株进行了env基因测序与分析。同源性比较显示:本研究分离的病毒株核酸序列同源性为97.0%-99.9%,氨基酸序列同源性为94.7%-99.8%,说明这些病毒株高度相似,可能有共同的祖先。同时,本研究证实,此次我国多个省份肉种鸡养殖场中出现的ALV-J毒株与分离自黄羽肉鸡的GD14J2毒株(Genbank登录号:KU500032)的同源性最高,在95.77%～97.16%之间,明显高于其他参考毒株,说明这些新毒株与GD14J2的亲缘关系更为密切,但是否这些毒株具有相同的起源目前仍无定论。另一方面,遗传进化分析显示本研究在相同省份分离到的毒株不具有明显的地域性,且不同来源的毒株在env基因区段拥有一致的基因插入或缺失突变,这表明可能引发此次禽白血病爆发的ALV-J毒株可能存在多个传染源,并非直接来自同一毒株。同时,本研究也探讨分析了疫苗污染可能在此次ALV-J再次爆发中发挥的作用,但结果显示发生禽白血病的养殖场并未使用含有ALV-J外源病毒污染的疫苗,表明病毒可能来自其他途径。上述研究证实了引发此次禽白血病爆发的毒株属于ALV-J,探明了其分子特征和基因组变异情况,为临床防治该病提供了坚实的理论依据。

关键词：禽白血病禽白血病病毒 J亚群肉种鸡 env基因