检索结果-南通市图书馆

1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2023年第5期50卷 1785-1795页

作者：陈玫婷郑从森梁泽贤林巧儿常传哲周俊冯军李林林覃丽梅佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528231 广东省农业科学院动物卫生研究所广州510640

【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行... 详细信息

【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%~94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个的B细胞线性表位。该env蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大,为38.29%。【结论】env基因是导致ALV遗传变异的关键基因,其编码的囊膜蛋白env具有不稳定性,存在多个蛋白修饰位点和抗原表位。

关键词：禽白血病病毒(ALV) J亚群 env基因生物信息学

贵州地区威宁鸡禽白血病病毒分离鉴定及env基因遗传进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第8期 76-80,137页

作者：李婷徐景峨余波杨莉韩雪吴仙赵滨蒲龄潘永王璇贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵阳550005

为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELIS... 详细信息

为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELISA检测和病毒PCR鉴定,进一步对分离株的env基因进行克隆、测序,与GenBank收录的其他ALV参考株进行序列比对分析,并构建遗传进化树。结果表明:剖检可见病死鸡腹腔中及肝脏上有肿瘤结节;取病死鸡的肝脏、心脏接种于含5%新生牛血清的TSA培养基和麦康凯琼脂培养基培养24 h,未见有细菌生长;取病死鸡肝脏组织,处理后接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞,用ALV ELISA抗原检测试剂盒检测发现ALV p27抗原呈阳性;用ALV-J亚群env基因引物进行PCR检测,结果呈阳性,PCR产物大小约为924 bp;将分离毒株命名为ALV-GZ株,该毒株与国内外分离的ALV-J亚群的核苷酸相似性为97.0%~99.4%,与国内外分离的其他亚群的核苷酸相似性为50.8%~53.0%,与AHFX/16916株(GenBank登录号为MF614031.1)处于同一遗传进化分支,亲缘关系最近。说明贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡感染了ALV-J亚群,且ALV-J亚群毒株在缓慢的变异演化中向地方品系鸡蔓延传播。

关键词：贵州地区威宁鸡禽白血病病毒 J亚型 env基因遗传进化分析

中国艾滋病病毒1型AE循环重组型毒株env基因的变异和进化分析

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中华流行病学杂志 2003年第11期24卷 966-970页

作者：梁浩邢辉魏民陈钊关琪黄海龙全宇陈健平洪坤学施侣元邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京100050 华中科技大学同济医学院公共卫生学院

目的　研究中国艾滋病病毒 1型 (HIV 1)AE循环重组型 (CRF0 1 AE)毒株env不同基因区序列变异的特点及其与进化压力的关系。方法　应用巢式聚合酶链反应 (nested PCR)对从全国部分省收集来的HIV 1感染者血液样本中的HIV 1外膜蛋白 (env)... 详细信息

目的　研究中国艾滋病病毒 1型 (HIV 1)AE循环重组型 (CRF0 1 AE)毒株env不同基因区序列变异的特点及其与进化压力的关系。方法　应用巢式聚合酶链反应 (nested PCR)对从全国部分省收集来的HIV 1感染者血液样本中的HIV 1外膜蛋白 (env)基因进行扩增和亚型鉴定后 ,选择 3 4份CRF0 1 AE重组型HIV 1毒株env基因V3～V4区及其邻近区域的序列进行系统进化树和氨基酸变异分析 ,并计算和分析氨基酸同义替换 (Ks)值和非同义替换 (Ka)值及Ks Ka比值。结果基因系统树显示中国的 3 4份样本CRF0 1 AE重组型毒株与我国代表株AE .97CNGX2F和泰国代表株AE .CM 2 40、AE .93TH2 53聚集在一起。氨基酸替换主要发生在C3和V4区 ,而V3区和V3上游区氨基酸序列相对保守 ,糖基化位点也比较保守。V 3环顶端四肽以GPGQ为主 (87.50 % )。大部分毒株的第 3 0 6和 3 2 0位点上没有出现带正电荷的氨基酸。整个V 3～V4区的Ks值显著高于Ka值(P <0 .0 0 1) ,且Ks Ka比值显著高于 1(P <0 .0 0 1) ,只有V4区Ks Ka比值显著低于 1(P <0 .0 1)。结论　目前多数流行于中国的CRF0 1 AE重组型HIV 1毒株具有较高的同源性 ,在进化上关系密切。氨基酸替换主要发生在C3和V4区 ,而不是V3区。由于大部分毒株的第 3 0 6和 3 2 0位点上没有出现带正电荷的?

关键词：中国艾滋病病毒1型 AE循环重组型 env基因基因变异巢式聚合酶链反应

env基因对J亚群禽白血病病毒体外感染和复制能力的影响

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中国畜牧兽医 2013年第9期40卷 143-146页

作者：吴晓婵李娇曹伟胜廖明华南农业大学兽医学院广东广州510642 广州畜牧科学研究所广东广州510545

为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功... 详细信息

为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功构建了重组质粒pNX-HNenv。重组毒株能在DF-1细胞上稳定增殖,并能被JE9特异性单抗识别,证明获得了具有感染性的重组病毒NX-HNenv株。结果显示,同一亚群内env基因的替换对病毒的体外感染和复制能力无明显影响。

关键词： J亚群禽白血病病毒 env基因反向遗传技术复制能力

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河北省HIV-1流行株的env基因序列测定和亚型分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 533-535页

作者：赵翠英邢辉赵宏儒黄海龙刘艳芳马鹏飞李保军张玉琪王玉邵一鸣河北省疾病预防控制中心性病艾滋病预防监测中心中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势. 方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚... 详细信息

目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势. 方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析. 结果对22份HIV-1感染者的样品,扩增得到了18份HIV-1 env C2-V3基因片段,经序列测定和基因分析鉴定出3种HIV-1 M亚群基因亚型,即:B′、CRF-BC和C亚型.B′亚型的组内基因离散率为7.84%±3.14%(n＝14),基因序列与云南瑞丽株rl42(泰国B亚型)相近;2株CRF-BC亚型与广西毒株的基因离散率为4.60%.与血液途径感染有关的人员均为B′(泰国B)亚型. 结论目前,在河北省发现了3种HIV-1亚型.输供血途径中B′亚型仍是主要的流行亚型,可能来源于云南吸毒人群.HIV-1 B′亚型在河北省的流行时间大约为7～9年.

关键词： HIV-1 基因亚型序列分析 HIV-1亚型基因序列测定 env基因亚型分析河北省流行株

人T细胞白血病病霉Ⅰ型env基因的克隆与表达

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病毒学报 1995年第3期11卷 228-233页

作者：段震峰滕智平曾毅中国预防医学科学院病毒学研究所

本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从整合有人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）的ＭＴ－２细胞株中，扩增出ＨＴＬＶ－Ｉ外膜蛋白（ｅｎｖ）的全基因（１．４５ｋｂ），并成功地克隆入ｐＵＣ１９载体，构建成ｅｎｖ基因克隆ｅｎ... 详细信息

本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从整合有人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）的ＭＴ－２细胞株中，扩增出ＨＴＬＶ－Ｉ外膜蛋白（ｅｎｖ）的全基因（１．４５ｋｂ），并成功地克隆入ｐＵＣ１９载体，构建成ｅｎｖ基因克隆ｅｎｖ／ｐＵＣ１９．利用原核高效表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，在大肠杆菌中有效地表达了与谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合的ｅｎｖ羧基末端抗原的重组蛋白，融合基因的转录由ｔａｃ启动子调控。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，有一约５２ｋＤ的目的蛋白带，表达量占菌体总蛋白的１０％；ＷｅｓｔｅｒＮｂｌｏｔｔ及ＥＬＩＳＡ结果显示，表达产物能与ＨＴＬＶ－Ｉ多抗血清结合。本研究为研制ＨＴＬＶ－Ｉ的诊断试剂及进一步了解ｅｎｖ的免疫学和生物学性质打下了基础。

关键词：白血病人T细胞白血病病毒 env基因基因克隆

湖南省禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

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中国兽医学报 2020年第10期40卷 1936-1941,1975页

作者：吕孙良张慧慧胡文琴黎洁玉宋雅婷肖朝庭湖南大学生物学院病原生物学与免疫学研究所湖南长沙410082

为了解禽白血病病毒(ALV)在湖南省各禽类养殖场的感染情况,于2018年1月至2019年1月采集湖南省不同地区21个养殖场的156份组织与血清样品。分别设计针对ALV 5′非翻译区(5′UTR)的检测引物和env基因近全长扩增引物,通过RT-PCR首先用检测... 详细信息

为了解禽白血病病毒(ALV)在湖南省各禽类养殖场的感染情况,于2018年1月至2019年1月采集湖南省不同地区21个养殖场的156份组织与血清样品。分别设计针对ALV 5′非翻译区(5′UTR)的检测引物和env基因近全长扩增引物,通过RT-PCR首先用检测引物对样品进行检测,然后扩增阳性样品ALV env基因全长并测序分析。结果显示,19个养殖场检测出E亚群ALV(ALV-E),其env基因与GenBank中ALV-E的核苷酸序列同源性为99.38%~99.90%;1个养殖场检测出ALV-J,其env基因推导的氨基酸序列与GenBank中ALV-J的氨基酸序列同源性最高为92.63%,并且在该场同一样品中同时检出ALV-E和ALV-J;1个野鸡养殖场检测出ALV-F,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的ALV-F的氨基酸同源性为88.69%;同时检测出2株新型的ALV,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的A、B、C、D、E、F、J和K亚群的氨基酸同源性为44.68%~58.42%。结果表明,ALV-E在湖南省禽养殖场普遍存在,并首次在我国养殖野鸡中检测出ALV-F,而且在野鸡中发现了很可能是ALV新亚群的2株病毒。本试验为ALV在湖南禽类养殖场的流行情况研究提供了依据。

关键词：禽白血病病毒 env基因序列分析

表达禽网状内皮组织增生病病毒env基因的重组马立克病毒的生物学特性

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畜牧兽医学报 2018年第7期49卷 1482-1491页

作者：周忠文林桂芳王好好苏帅崔治中孙淑红山东农业大学动物医学院泰安271018 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室泰安271018 山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心泰安271018

旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)env基因的重组马立克病毒(Marek′s disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究。以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3... 详细信息

旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)env基因的重组马立克病毒(Marek′s disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究。以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+);以其为模板,PCR扩增整个REVenv基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体;以其为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REVenv真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用Red E/T同源重组技术插入SC9-1的meq位点,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-env BAC。提取SC9-env BAC质粒转染CEF细胞,拯救重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性病毒,命名为SC9-env。分析比较SC9-env在CEF细胞上的复制水平,利用动物试验初步评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果。结果表明,利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env能够稳定表达REV env蛋白,且复制水平与亲本病毒SC9-1相似;该重组毒接种SPF鸡没有明显的致病性,且对rMd5的强毒攻击提供92%的免疫保护,与SC9-1差异不显著;SC9-env显著降低REV感染SPF鸡所引起的体重减轻以及灭活苗抗体下降。构建的表达REVenv的重组MDV对感染MDV、REV的SPF鸡具有良好的免疫保护效果。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 env基因同源重组马立克病毒生物学特性

不同区段HIV-1 env基因在Bac-to-Bac昆虫细胞杆状病毒表达系统中的表达及检测

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病毒学报 2002年第1期18卷 15-20页

作者：谢小燕郭庆程通李少伟张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

利用昆虫细胞杆状病毒表达系统 ,将从一株HIV - 1阳性克隆质粒中获得的几个HIV包膜蛋白基因片段 ,克隆入转移载体中得到重组病毒。用此重组病毒感染昆虫细胞后表达出 3种HIV包膜蛋白 ,即GP12 0 - 41P、GP41T、GP41P ,分别含有HIV - 1包... 详细信息

利用昆虫细胞杆状病毒表达系统 ,将从一株HIV - 1阳性克隆质粒中获得的几个HIV包膜蛋白基因片段 ,克隆入转移载体中得到重组病毒。用此重组病毒感染昆虫细胞后表达出 3种HIV包膜蛋白 ,即GP12 0 - 41P、GP41T、GP41P ,分别含有HIV - 1包膜糖蛋白GP12 0及部分GP41,删除了N端 12个疏水氨基酸的GP41和仅有主要表位约 2 40个氨基酸的GP41。收获后分别以Western -blotting和EIA检测 ,有较好的免疫学活性 ,其中GP41T的活性最强。该实验为HIV包膜蛋白的结构研究提供了依据 ,加以改进后可能有免疫检测的价值。

关键词： Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统人免疫缺陷病毒包膜蛋白抗原表达 HIV-1 env基因检测