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Chemotherapy suppresses SHH gene expression via a specific enhancer

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Journal of Genetics and Genomics 2023年第1期50卷 27-37页

作者： Yafei Zhang Jianqiong Lin Kaibin Yang Zhicao Yue Department of Cell Biology and Medical Genetics International Cancer Centerand Guangdong Key Laboratory for Genome Stability and Disease PreventionShenzhen University Medical SchoolShenzhenGuangdong 518060China

Sonic hedgehog(SHH)signaling is a key regulator of embryonic development and tissue homeostasis that is involved in gastrointestinal(GI)cancer progression.Regulation of SHH gene expression is a paradigm of long-range enhancer function.Using the classical chemotherapy drug 5-fluorouracil(5FU)as an example,here we show that SHH gene expression is suppressed by chemotherapy.SHH is downstream of immediate early genes(IEGs),including Early growth response 1(egr1).A specific 139 kb upstream enhancer is responsible for its down-regulation.Knocking down egr1 expression or blocking its binding to this enhancer renders SHH unresponsive to chemotherapy.We further demonstrate that down-regulation of SHH expression does not depend on 5FU’s impact on nucleotide metabolism or DNA damage;rather,a sustained oxidative stress response mediates this rapid suppression.This enhancer is present in a wide range of tumors and normal tissues,thus providing a target for cancer chemotherapy and its adverse effects on normal tissues.We propose that SHH is a stress-responsive gene downstream of IEGs,and that traditional chemotherapy targets a specific enhancer to suppress its expression.

关键词： Sonic hedgehog Chemotherapy Immediate early genes egr1 5-Fluorouracil

Expression of mapk1 and egr1 genes in Onchidium reevesii under tidal stimulation

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Aquaculture and Fisheries 2023年第1期8卷 42-49页

作者： Rongyu Wu Rongcheng Rao Xiaoming Zhang Heding Shen Key Laboratory of Aquatic Germplasm Resources Exploration and Utilization of Ministry of Education Shanghai Ocean UniversityShanghai201306China National Experimental Teaching Demonstration Center of Aquaculture Science Shanghai Ocean UniversityShanghai201306China Classification and Evolution of Marine Animal System Shanghai Ocean University Key Laboratory of Shanghai UniversitiesShanghai201306China

Previous studies have speculated that tidal rhythm of Onchidium reevesii was linked to its memory ability, which has not been well explained. Mapk1 and egr1 genes are closely related to memory formation in the MAPK signaling pathway that have been extensively studied in vertebrates. These two genes are involved in Long-term potentiation (LTP), which is generally regarded as one of the main molecular mechanisms underlying learning and memory. To investigate the relationship between tidal rhythm of O. reevesii and its memory ability, we studied the molecular mechanism of mapk1 and egr1 genes cooperating with tidal rhythm. The full-length cDNA sequence of mapk1 gene was cloned by RACE method and analyzed by bioinformatics, then qRT-PCR was used to analyze its expression levels in each tissue. A homology analysis and phylogenetic tree reconstruction revealed that O. reevesii is most closely related to the Biomphalaria glabrata. The qRT-PCR showed that mapk1 was expressed in all the tissues, but the highest expression was in the ganglion. We speculated that mapk1 is related to memory formation of O. reevesii. Then we used qRT-PCR to detect the expression of mapk1 and egr1 in ganglion of O. reevesi under tidal stimulation. The expression of mapk1 and egr1 at the rising tide points were significantly higher (P 15-21, except the rising tide point on May 20 and May 21 of mapk1. The expression of mapk1 and egr1 genes in the ganglion sampled for 7-day were basically the same as that of the tide change of the same day. The expression of the two genes were upregulated at raising tide and downregulated at the lowest tide, it is presumed that the O. reevesii was affected by the tide for a long time and formed the tide memory.

关键词： Onchidium reevesii Tide rhythm mapk1 egr1

红景天苷衍生物对苯甲酰红景天苷对MCAO大鼠的神经保护作用

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中国药理学通报 2022年第1期38卷 67-72页

作者：聂婧雯孙春晓黄私迎罗锐赖文芳王颖峥洪桂祝福建中医药大学药学院福建福州350122

目的研究红景天苷衍生物对苯甲酰红景天苷(p-benzoyl salidroside, pOBz)对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠的神经保护作用。方法 (1)30只健康成年♂SD大鼠,随机分为Sham组、MCAO组、MCAO+pOBz低中高剂量组(25、50、100 mg·kg^(-1)),线... 详细信息

目的研究红景天苷衍生物对苯甲酰红景天苷(p-benzoyl salidroside, pOBz)对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠的神经保护作用。方法 (1)30只健康成年♂SD大鼠,随机分为Sham组、MCAO组、MCAO+pOBz低中高剂量组(25、50、100 mg·kg^(-1)),线栓法造模,进行神经功能损伤评分,连续给药2 d。采用核磁共振成像检测MCAO大鼠脑梗死体积。(2)24只健康成年♂SD大鼠,随机分为Sham组、MCAO组、MCAO+pOBz组(50 mg·kg^(-1))和MCAO+Sal组(50 mg·kg^(-1)),线栓法造模,给药1 d。Western blot检测NeuN、egr1、Bcl-2和Bax蛋白表达。(3)18只健康成年♂SD大鼠,随机分成Sham组、MCAO组和MCAO+pOBz组(50 mg·kg^(-1)),连续给药2 d。免疫荧光染色观察NeuN的表达。结果 pOBz给药2 d可以降低MCAO大鼠的脑梗死体积,改善神经功能损伤,且升高NeuN和egr1表达程度优于Sal, pOBz对MCAO大鼠脑组织Bcl-2/Bax比值的改善程度与Sal相当。结论 pOBz可改善MCAO大鼠脑梗死体积,具有优于红景天苷的神经保护作用。

关键词：对苯甲酰红景天苷缺血性脑卒中 MCAO 神经保护 NeuN egr1

全真一气汤通过egr1和SOX9调节COPD大鼠气道免疫应答和炎症反应

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时珍国医国药 2023年第10期34卷 2346-2349页

作者：蔡佳静王春娥蔡颖利吴伟斌沈一丹赵佳佳陈可强福建中医药大学第二临床医学院福建福州350003 福建中医药大学附属第二人民医院福建建福州350003

目的探析全真一气汤调节慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道免疫应答与炎症反应的机制。方法利用烟熏法对18只SD大鼠进行COPD模型建立,建模后随机分为模型组和加药组,模型组每日予生理盐水处理,加药组每日予全真一气汤浓缩液干预。RT... 详细信息

目的探析全真一气汤调节慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道免疫应答与炎症反应的机制。方法利用烟熏法对18只SD大鼠进行COPD模型建立,建模后随机分为模型组和加药组,模型组每日予生理盐水处理,加药组每日予全真一气汤浓缩液干预。RT-PCR、Western blot检测大鼠肺组织中egr1mRNA和SOX9mRNA及其蛋白的表达水平。结果加药组egr1mRNA和SOX9mRNA表达丰度分别是模型组的2.889倍和4.940倍,加药组egr1和SOX9的蛋白表达均高于模型组。结论全真一气汤能上调egr1和SOX9基因及蛋白的表达与活化,这可能是其抑制COPD大鼠气道炎症,并降低COPD引起肺癌的发生率的机制之一。

关键词：全真一气汤 COPD 肺癌 egr1 SOX9

egr1在小鼠成肌细胞增殖过程中的作用机制

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Egr1在小鼠成肌细胞增殖过程中的作用机制

作者：代立志东北农业大学

学位级别：硕士

骨骼肌是人体的重要组成部分,是进行运动、代谢等生命活动所必需的器官。临床上,肌肉损伤和肌肉退行性病变的预防和治疗过程中,还存在很多难以克服的问题,解决这些问题的钥匙是研究骨骼肌生长发育的分子机制。egr1广泛表达于多种类型的... 详细信息

骨骼肌是人体的重要组成部分,是进行运动、代谢等生命活动所必需的器官。临床上,肌肉损伤和肌肉退行性病变的预防和治疗过程中,还存在很多难以克服的问题,解决这些问题的钥匙是研究骨骼肌生长发育的分子机制。egr1广泛表达于多种类型的细胞中,参与细胞增殖、分化、侵袭和凋亡等重要生理过程。实验室前期研究工作证明egr1能够促进C2C12细胞的分化,进一步研究表明,egr1在小鼠成肌细胞的增殖过程中也发挥作用。因此选择通过C2C12细胞和小鼠肌肉损伤修复模型来研究egr1对小鼠成肌细胞增殖的影响及作用机制,以期为肌肉损伤及肌肉相关疾病的治疗提供理论依据。主要研究内容包括:(1)采用Western blotting技术检测egr1在C2C12细胞增殖过程中的蛋白表达规律。(2)构建egr1的过表达及干扰载体,Western blotting、Ed U、流式细胞术检测egr1对C2C12细胞增殖的影响。(3)利用染色质免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因技术验证egr1与Pax7启动子区的结合。(4)在C2C12细胞增殖过程中过表达和干扰egr1,Western blotting检测egr1对Pax7调控情况。(5)Western blotting、免疫组织化学染色检测egr1和Pax7在小鼠肌肉损伤修复过程中的表达定位及egr1对Pax7的调控情况。结果表明:(1)在C2C12细胞增殖过程中,egr1蛋白表达量逐渐升高,增殖培养24 h时达到最高值,与增殖相关标志蛋白CCNB1、PCNA表达规律一致,证明egr1可能参与C2C12细胞增殖过程的调节。(2)过表达egr1后,CCNB1、PCNA的蛋白水平显著上升,Ed U检测结果显示细胞增殖率升高,流式细胞术检测结果显示处于S期的细胞比例显著升高;抑制egr1后,CCNB1、PCNA的蛋白水平显著下降,Ed U检测结果显示细胞增殖率降低,流式细胞术检测结果显示处于S期的细胞比例显著下降。表明egr1可以调节C2C12细胞的增殖。(3)染色质免疫共沉淀结果证明:egr1在Pax7启动子区上预测的两个结合位点是正确的;双荧光素酶报告基因检测显示在Pax7启动子区上的两处egr1结合位点同时或单独突变后,荧光素酶活性都显著降低,证明egr1可以结合到Pax7启动子区的两个结合位点。(4)过表达和干扰egr1后,Pax7的蛋白表达量随之升高和降低,证明egr1能够调控Pax7的表达。(5)Western blotting检测结果显示在肌肉损伤修复过程中,egr1与Pax7蛋白表达规律一致,从损伤第0天到第3天逐渐升高,于第3天达到峰值,通过损伤位点注射IGF1上调egr1表达水平后,Pax7蛋白表达量显著升高。免疫组织化学染色结果显示在肌肉损伤第3天,损伤部位的egr1和Pax7在肌肉卫星细胞中的阳性信号最强。证明在小鼠肌肉损伤修复过程中,egr1可通过调控Pax7的表达来调节肌肉卫星细胞的增殖。体内、体外研究证明egr1可以通过结合到Pax7基因启动子区调控其表达,促进小鼠骨骼肌卫星细胞的增殖,加快骨骼肌的损伤修复过程。

关键词： egr1 Pax7 C2C12 细胞增殖

egr1调控MGMT在辐射诱导脑胶质瘤细胞损伤中的作用研究

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EGR1调控MGMT在辐射诱导脑胶质瘤细胞损伤中的作用研究

作者：李高凯吉林大学

学位级别：硕士

研究背景:人们每天都暴露在辐射中,包括自然环境的辐射和人为环境的辐射,产生众多生物学效应,例如细胞的氧化应激,DNA损伤等。O-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)属于DNA损伤修复酶,作为一种DNA甲... 详细信息

研究背景:人们每天都暴露在辐射中,包括自然环境的辐射和人为环境的辐射,产生众多生物学效应,例如细胞的氧化应激,DNA损伤等。O-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)属于DNA损伤修复酶,作为一种DNA甲基转移酶,能将O-甲基鸟嘌呤上的烷基转移到自身氨基酸残基上,使DNA链上的鸟嘌呤得以复原。MGMT的表达受多种表观调控因子的影响,包括micro RNA、DNA甲基化、组蛋白甲基化等。现在已经确定MGMT启动子甲基化状态是脑胶质母细胞瘤治疗预后的生物标志物之一。DNA启动子甲基化通过影响转录因子与启动子的结合,从而影响基因的表达。现如今大多数研究集中在MGMT启动子甲基化状态与脑胶质瘤患者预后的关系研究,而转录因子对MGMT的表达调控研究少见报道。早期生长反应因子1(Early growth response factor 1,egr1)是一种重要的转录因子,主要参与组织损伤、免疫应答和纤维化的过程。近年来的研究表明,egr1与肿瘤的发生发展密切相关,可能参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和肿瘤血管生成等。例如,egr1可以与SNAIL协同作用于MMP9和ZEB1的启动子区域,从而增强它们的转录并启动肿瘤细胞的侵袭和转移。同时,有研究发现,在egr1高表达的患者中MGMT基因启动子区域DNA甲基化的频率高于egr1低表达的患者。目前,egr1与MGMT基因之间的相互作用尚不明确。研究目的:观察MGMT基因在不同细胞系中的表达情况及MGMT启动子区域甲基化水平与辐射后细胞增殖与存活的关系,并探讨egr1对MGMT的调控机制,为脑胶质瘤临床治疗新靶点的寻找提供实验依据,为脑胶质瘤辐射后效应的研究提供理论依据。研究方法:1.通过Gepia生物信息学网站分析脑胶质瘤患者MGMT表达量与生存期的关系,及多种肿瘤与癌旁组织中egr1的表达情况;2.通过TF-target网站分析MGMT基因启动子区域的转录因子结合位点;3.通过BSP克隆测序分析MGMT基因启动子甲基化水平;4.克隆形成实验检测辐射对细胞克隆形成能力的影响;5.q-PCR法和Weston Blot法检测MGMT、egr1、EZH2、TGF-β1、Smad、p-Smad等蛋白的表达情况;6.利用瞬时转染的方法将egr1过表达质粒和si RNA转染至U87和U251细胞中,构建egr1过表达和敲低的细胞模型;采用q-PCR和Western Blot方法验证模型建立成功与否;7.荧光素酶报告基因检测实验检测egr1是否结合到MGMT的启动子区域;8.通过TGF-β1/Smad通路抑制剂处理细胞,观察TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达变化及其对egr1表达的影响。研究结果:1.Gepia数据库分析MGMT基因与患者生存的关系通过Gepia数据库分析了MGMT基因表达与患者预后的相关性以及MGMT基因启动子区域甲基化程度与患者预后的相关性。分析结果显示,MGMT基因相对表达量较低和启动子甲基化率≥10%的患者较MGMT基因相对表达量较高和启动子甲基化率小于10%的患者,生存时间更长,生存率更高,经统计学检验分析P1细胞中的表达及启动子甲基化情况利用q-PCR和Western Blot法检测A549、Hela、U87和U251四种细胞系中MGMT基因的m RNA和蛋白表达情况。结果显示,U251细胞MGMT基因m RNA表达量最高,U87细胞MGMT基因m RNA表达量最低;A549细胞中蛋白表达最高,U87细胞中最低。随后,我们利用Meth Primer网站预测了MGMT基因启动子区域的Cp G岛,并利用BSP克隆测序法检测A549、Hela、U87和U251四种细胞系中MGMT基因启动子区域的甲基化程度。结果显示,U87细胞MGMT基因启动子甲基化程度最高,U251细胞MGMT基因启动子甲基化程度最低。这说明MGMT基因启动子区域甲基化程度影响MGMT基因的表达,甲基化程度越高,MGMT基因的相对表达量越低,甲基化程度越低,MGMT基因的相对表达量越高。3.辐射对A549、Hela、U87和U251细胞增殖和存活的影响利用克隆形成实验检测0、2、4、6和8Gy X射线辐射后,观察A549、Hela、U87和U251四种细胞克隆形成能力的变化,并使用单击多靶模型分析细胞存活曲线拟合的情况,结果显示,Hela细胞D值最大,U87细胞D值最小,说明Hela细胞放射敏感性最小,U87细胞放射敏感性最大;U251细胞D值最大,U87细胞D值最小,说明U251细胞损伤修复能力最强,U87细胞修复能力最弱。这说明MGMT相对表达量较高的细胞系,辐射对其细胞克隆形成能力的影响较弱,MGMT相对表达量较低的细胞系,辐射对其克隆形成能力的影响较

关键词：脑胶质瘤细胞辐射 MGMT egr1 TGF-β1/Smad通路

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egr1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

现代肿瘤医学 2022年第10期30卷 1767-1771页

作者：郭瑞霞陈玲燕张岩南京医科大学附属无锡妇幼保健院江苏无锡214023

目的:探究早期生长反应基因1(early growth response 1,egr1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法:下载并提取TCGA数据库中egr1的表达数据;购买乳腺癌组织芯片(HBreD090CS01),并采用免疫组织化学法检测egr1在乳腺癌中的表达;利用Kapla... 详细信息

目的:探究早期生长反应基因1(early growth response 1,egr1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法:下载并提取TCGA数据库中egr1的表达数据;购买乳腺癌组织芯片(HBreD090CS01),并采用免疫组织化学法检测egr1在乳腺癌中的表达;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析egr1在乳腺癌中的预后价值;利用TIMER数据库分析乳腺癌中egr1表达与免疫细胞浸润的关系。结果:相较于癌旁组织,egr1 mRNA在乳腺癌中的表达显著下调(P1);egr1蛋白在45例乳腺癌组织中有18例呈低表达,27例呈高表达,在45例癌旁组织中有9例呈低表达,36例呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.038);egr1表达与乳腺癌分化程度相关(P=0.003),与患者年龄、肿瘤大小、N分期、临床分期等无关(P>0.05);egr1低表达的乳腺癌患者,其无复发生存率显著低于egr1高表达的患者(P1),但egr1表达与乳腺癌患者的总生存率无明显相关性(P>0.05);乳腺癌组织中egr1表达与B细胞浸润水平呈负相关(P1),与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞浸润水平呈正相关(P1)。结论:egr1在乳腺癌组织中的表达较癌旁组织低,且与肿瘤分化程度、预后及免疫浸润有关,有望成为乳腺癌预后评估的分子标志物及治疗的潜在靶点。

关键词： egr1 乳腺癌预后免疫浸润

egr1通过调控有氧糖酵解对肝细胞癌侵袭转移的影响

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Egr1通过调控有氧糖酵解对肝细胞癌侵袭转移的影响

作者：孙兴璐甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:阐明egr1是否可以调控肝细胞癌有氧糖酵解,并探究egr1是否通过调控有氧糖酵解进一步影响肝细胞癌的侵袭转移,为肝细胞癌的临床诊断、靶向治疗和改善预后提供了更为前沿的理论依据。方法:HepG2和MHCC97H细胞以常规方式培养。利用脂... 详细信息

目的:阐明egr1是否可以调控肝细胞癌有氧糖酵解,并探究egr1是否通过调控有氧糖酵解进一步影响肝细胞癌的侵袭转移,为肝细胞癌的临床诊断、靶向治疗和改善预后提供了更为前沿的理论依据。方法:HepG2和MHCC97H细胞以常规方式培养。利用脂质体转染试剂,将pEX-3-egr1、pEX-3、si-egr1和si-NC转染进入HepG2和MHCC97 H细胞。用邻甲苯胺比色法和乳酸脱氢酶比色法检测HepG2和MHCC97H细胞的葡萄糖和乳酸含量。经过转染的各组HepG2和MHCC97H细胞用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测egr1、有氧糖酵解关键基因HK2、PKM2、LDHA和GLUT1 mRNA及侵袭转移关键基因Snail和MMP2 mRNA表达量的变化;蛋白质印迹法(Western blotting,WB)检测转染后各组HepG2和MHCC97H细胞有氧糖酵解关键蛋白HK2、PKM2、LDHA和GLUT1表达量的变化;划痕愈合实验检测转染后各组HepG2和MHCC97H细胞0h、24h、48h的横向迁移率,Transwell实验检测转染后各组HepG2和MHCC97H细胞48h后纵向迁移量的变化和侵袭量的变化。结果:实时荧光定量PCR实验结果显示,pEX-3-egr1组HepG2和MHCC97 H细胞在egr1 mRNA表达量上显著高于pEX-3组。si-egr1组HepG2和MHCC97 H细胞在egr1mRNA表达量上显著低于si-NC组,表明细胞被成功转染。葡萄糖和乳酸含量测定结果显示,增加egr1在肝细胞癌HepG2和MHCC97 H细胞中的表达可显著抑制葡萄糖消耗和乳酸产生(P1)。相反,egr1表达的降低显著增加了葡萄糖消耗和乳酸产生(P1)。在实时荧光定量PCR和蛋白质印迹实验的结果中,pEX-3-egr1组HepG2和MHCC97H细胞有氧糖酵解关键基因HK2、PKM2、LDHA和GLUT1 mRNA和蛋白表达水平均低于pEX-3组(P1,P1,P1),pEX-3-egr1组HepG2和MHCC97H细胞侵袭转移关键基因Snail和MMP2 mRNA表达水平低于pEX-3组(P1,P1);si-egr1组HepG2和MHCC97H细胞HK2、PKM2、LDHA和GLUT1 mRNA和蛋白表达水平均显著高于si-NC组(P1,P1,P1),si-egr1组HepG2和MHCC97H细胞侵袭转移关键基因Snail和MMP2 mRNA表达水平高于si-NC组(P1,P1)。结论:egr1通过对有氧糖酵解的调控抑制肝细胞癌HepG2和MHCC97H细胞的侵袭转移

关键词： egr1 肝细胞癌有氧糖酵解侵袭转移

egr1-miR146b-ABCG2信号轴抑制卵巢癌细胞的迁移、侵袭和化疗敏感性

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EGR1-miR146b-ABCG2信号轴抑制卵巢癌细胞的迁移、侵袭和化疗敏感...

作者：邹雪琴江苏大学

学位级别：硕士

目的:在实验室前期研究发现miR-146b能够抑制卵巢癌细胞迁移侵袭和增强卵巢癌细胞化疗敏感性的基础上,本课题一方面进一步探究了卵巢癌中miR-146b表达水平降低的上游调控机制,另一方面试图从药物转运体相关靶基因角度解析miR-146b调控... 详细信息

目的:在实验室前期研究发现miR-146b能够抑制卵巢癌细胞迁移侵袭和增强卵巢癌细胞化疗敏感性的基础上,本课题一方面进一步探究了卵巢癌中miR-146b表达水平降低的上游调控机制,另一方面试图从药物转运体相关靶基因角度解析miR-146b调控卵巢癌细胞化疗敏感性的具体机制。本研究分为两大部分第一部分egr1启动miR-146b转录,抑制卵巢癌细胞的侵袭、迁移和耐药等生物学行为方法:1.利用生信软件miRTrans、miRGen和TransmiR预测miR-146b上游转录因子,取软件预测交集基因早期生长反应因子(early growth response 1,egr1)作为候选转录因子。通过荧光素酶报告基因实验及截短实验验证egr1直接作用miR-146b启动子区域,再结合JASPAR数据库预测结果和染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)深入探究具体的egr1结合区域。2.实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测卵巢癌组织样本中egr1和miR-146b的m RNA表达水平并分析两者的表达相关性,同时检测了不同卵巢癌细胞系中egr1的m RNA表达水平。3.构建稳定过表达egr1的卵巢癌细胞系,通过Transwell实验、划痕实验、CCK8药敏实验和流式细胞术等实验方法观察egr1对卵巢癌细胞迁移侵袭和药物敏感性等的影响。4.在稳定过表达egr1的卵巢癌细胞系中稳定转染p CDH-miR-146b sponge质粒,采用上述细胞实验研究miR-146b逆转后卵巢癌细胞迁移侵袭能力和耐药性是否恢复。结果:1.荧光素酶报告基因实验和Ch IP实验均表明egr1直接调控miR-146b。2.qRT-PCR结果证实egr1在卵巢癌临床组织样本中表达水平是下调的,且与miR-146b表达水平成正相关。除此之外,egr1在除SKOV3的卵巢癌细胞系中也是低表达的。3.egr1有效地降低了卵巢癌细胞的迁移性和侵袭性,同时减弱了卵巢癌细胞对常规化疗药物顺铂和紫杉醇的抵抗性。4.miR-146b逆转后卵巢癌细胞的迁移侵袭能力恢复,化疗药物敏感性降低,进一步验证了egr1是通过调控miR-146b来影响卵巢癌细胞的生物学行为。第二部分miR-146b调控卵巢癌细胞生物学行为的机制研究方法:1.在卵巢癌细胞系中稳定转染miR-146b过表达质粒,采用Transwell实验、划痕实验、CCK8药敏实验和流式细胞术等实验方法观察miR-146b对卵巢癌细胞的迁移侵袭能力和药物敏感性的影响。2.通过生信软件miRanda、miRwalk和DIANA Tools预测出miR-146b下游ABC转运体家族相关靶基因,结合文献调研筛选出候选靶基因ABCG2,并通过荧光素酶报告基因实验验证ABCG2-3’UTR是否存在miR-146b直接调控区域。3.分别利用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法,检测ABCG2在不同卵巢癌细胞系中m RNA和蛋白的基础水平,并通过Western Blot检测ABCG2在miR-146b过表达的卵巢癌细胞系中蛋白表达水平的改变。4.构建稳定敲低ABCG2的卵巢癌细胞系,通过上述细胞实验观察ABCG2对卵巢癌细胞的迁移侵袭能力和药物敏感性的影响。结果:1.再次验证了miR-146b通过调控卵巢癌细胞迁移侵袭能力来抑制卵巢癌的进展,并减弱了卵巢癌细胞对常规化疗药物顺铂和紫杉醇的抵抗性。2.荧光素酶报告基因实验显示miR-146b直接靶向ABCG2。3.qRT-PCR和Western Blot结果证实miR-146b负向调控ABCG2。4.成功构建PLKO.1-ABCG2-shRNA2质粒,稳定敲低ABCG2的卵巢癌细胞的迁移侵袭能力下降,化疗敏感性明显增强。结论:卵巢癌中,低水平的egr1下调了miR-146b的表达,导致miR-146b抑制靶基因ABCG2的能力减弱,卵巢癌细胞的迁移侵袭能力增强和化疗敏感性降低。egr1-miR-146b-ABCG2轴的发现可能为卵巢癌的发病机制研究提供新的方向。

关键词： miR-146b egr1 卵巢癌 ABCG2 迁移侵袭化疗敏感性