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β—半乳糖苷酶EA、ed融合蛋白的表达及初步功能研究

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β—半乳糖苷酶EA、ED融合蛋白的表达及初步功能研究

作者：张钧浙江大学

学位级别：硕士

酶免疫分析技术自1971年创立以来，已广泛用于生物标记物的检测。酶免疫分析技术的质量依赖于抗原的纯度、抗体的特异性、合适标记酶的选用，其灵敏度取决于标记酶的高度纯化和高转化率。利用基因工程生产诊断用酶，使酶的纯度大大提高... 详细信息

酶免疫分析技术自1971年创立以来，已广泛用于生物标记物的检测。酶免疫分析技术的质量依赖于抗原的纯度、抗体的特异性、合适标记酶的选用，其灵敏度取决于标记酶的高度纯化和高转化率。利用基因工程生产诊断用酶，使酶的纯度大大提高，产量及质量均较自然来源酶好，简化了制备程序，大大促进了酶免疫分析技术的发展。大肠杆菌的β-半乳糖苷酶，因人血浆中缺乏此酶，并具有大量易得的底物，被用于均相及非均相免疫分析，是目前最常用的标记酶之一。Henderson等人在1986年利用基因工程技术生产大肠杆菌β-半乳糖苷酶酶受体(EA)和酶供体(ed)，并利用其α-互补功能创立了克隆酶供体免疫分析(CedIA)技术。β-半乳糖苷酶的EA、ed这种α-互补性还被用于分子生物学、蛋白质相互作用的监控、表达免疫分析等方面的研究。实验目的利用pGEX-4T-2融合蛋白表达系统制备重组β-半乳糖苷酶EA／ed蛋白，并对其活性进行研究，为进一步研究CedIA开发新的试剂盒和利用β-半乳糖苷酶的α-互补特性进行表达免疫分析等打下基础。实验方法通过人工合成编码D－半乳糖昔酶ed蛋白的DNA并插入原核表达载体pGEX－4T－2;从陀V－p－galactosldase control vector 质粒中用 Sal及 Earl进行双酶切得到编码卜半乳糖昔酶 a一受体（EA）的大部分 DNA，N端再加上约 60hP人工合成洲A，连接后转入 pGEX叶T亿载体中。把重组质粒分别转化大肠杆菌 DHS a，并经 I阿G诱导表达，经 Glutathione sepharose 4B亲和层析 GST—EA、GST—ed蛋白，再以凝血酶酶切得到纯的M、ed蛋白，并以ONPG为底物，检测EA、ed蛋白的a一互补活性。以兔抗p－半乳糖昔酶抗体做western－blot以证实与GST融合表达的EA工D蛋白是p－半乳糖昔酶的成分。实验结果 1．限制性内切酶和DNA测序结果表明，编码EA及ed蛋白的 DNA准确插入pGEX－4T－2多克隆位点，成功构建了GST—EA及GST一ed 的表达质粒;2．经诱导表达超声破碎后，GST—ed融合蛋白约占表达菌可溶性蛋白的25％，GST－EA融合蛋白约占表达菌可溶性蛋白的18％;GST—EA蛋白、GST—ed蛋白均主要存在于上清液中，经亲和层析回收融合蛋白，每升诱导菌分别可得GST—EA蛋白1．6mg，GST—ed 蛋白***。 3·W6St6rn－blot证实 EA、ed蛋白均为p－半乳糖昔酶的片段。 ***、ed蛋白的a一互补功能试验证实制备的EA、ed蛋白能二成功互补，形成具有高活性的卜半乳糖昔酶。实验结论 1．构建的质粒能高效表达具有较高a一互补活性的GS… 蛋白、GSTHD蛋白。 2．我们制备的EA蛋白、ed蛋白能用于研究6－半乳糖昔酶的 a一互补，为制备克隆酶供体免疫分析试剂打下了基础。

关键词：融合蛋白免疫技术 EA ed 酶免疫分析技术标记酶酶受体 β-半乳糖苷酶抗体反应 DNA

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LUTS/BPH与ed的相关性调查分析

LUTS/BPH与ED的相关性调查分析

作者：吴敬彰中南大学

学位级别：硕士

目的：研究具有LUTS症状的BPH与勃起功能障碍(ed)的相关性。方法：自2007年1月至2009年6月在本院行TURP手术治疗前列腺增生症患者357例,经过筛选,符合条件并获得随访病例96例。根据年龄把患者分为3组,分别为≤65岁组20例,65-75岁组51例,... 详细信息

目的：研究具有LUTS症状的BPH与勃起功能障碍(ed)的相关性。方法：自2007年1月至2009年6月在本院行TURP手术治疗前列腺增生症患者357例,经过筛选,符合条件并获得随访病例96例。根据年龄把患者分为3组,分别为≤65岁组20例,65-75岁组51例,≥75岁组25例。对所有病例进行病史采集,包括年龄、术前3月国际前列腺症状评分(IPSS)、术前3月国际勃起功能评分(IIEF-5),对96例患者的完整资料进行统计学分析。结果：1.96例患者中,有65人患有不同程度的ed,患病率为67.71%。2.各年龄组的ed患病率分别为：≤65岁组ed患者人数10例,患病率为50.00%;65-75岁组ed患者34例,患病率为66.67%;≥75岁组ed患者为21例,患病率为84.00%,三个年龄组中ed的患病率随着年龄的增加而升高。3.各LUTS程度组的ed患病率分别为：轻度LUTS组ed患者为9例,患病率为45.00%;中度LUTS组ed患者为33例,患病率为67.53%;重度LUTS组ed患者为23例,患病率为85.19%.;ed患病率随着LUTS程度的加重而逐渐升高。4.年龄和IPSS评分之间相关性良好(r=-0.668,Ped的影响因素.***与ed有相关性,是引起ed的独立危险因素,这就为BPH合并ed患者的治疗提供了一个治疗基础。

关键词： LUTS BPH ed 相关性分析

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ed产品之窗

电子产品世界 1995年第6期 77-86页

Human Designed Systems公司的VlewStation Xcelerator系列X终端的性能已超过250,000Xstones.在该系列中的所有机型均采用Intel i960 RSIC处理器.该平台还包括摄像机、录像机或电视调谐器的集成端口,因而可用于电视会议、窗口中视频或... 详细信息

Human Designed Systems公司的VlewStation Xcelerator系列X终端的性能已超过250,000Xstones.在该系列中的所有机型均采用Intel i960 RSIC处理器.该平台还包括摄像机、录像机或电视调谐器的集成端口,因而可用于电视会议、窗口中视频或基于计算机的培训.该终端系列共有20个机型.低档LX系列的性能为100,000Xstone,起始价为749美元;高档Ultra系列可用于复杂图形的CAD/CAM应用,价格为1,799～3,599美元.(E.D.1995年5月15日)

关键词：直流-直流变换器售价批量芯片组美元本位币丫二软件 ed

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ed Hardy现身服博会个性风格博众彩

流行色 2011年第5期 144-145页

2011年3月28日,一年一度的CH IC(中国国际服装服饰博览会)又如期而至,在这万商云集、名品荟萃的时尚盛会上,"创新"、"亮点"历来是展商不遗余力的追逐目标,也是倍受观众、媒体关注的焦点。扫描今年CHIC上的亮点,我们不得不将目光转向W2... 详细信息

2011年3月28日,一年一度的CH IC(中国国际服装服饰博览会)又如期而至,在这万商云集、名品荟萃的时尚盛会上,"创新"、"亮点"历来是展商不遗余力的追逐目标,也是倍受观众、媒体关注的焦点。扫描今年CHIC上的亮点,我们不得不将目光转向W2时尚饰品馆里的ed Hardy(埃德.哈迪)。

关键词：哈迪服博会个性风格 ed Hardy 万商云集埃德展位设计星光璀璨汽车用品阅兵典礼

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ed产品之窗

电子产品世界 1995年第8期 95-104页

Aeon Systems公司的VMEAlpha 64/XP单板计算机的最高执行速度为 550MIPS,适合于Unix和实时应用,如医疗和工业成像、电信、军事和航天。该板采用 275MHz 21064Alpha AXP RISC处理器,备有VMEbus和PCI本地总线接口。它包含的一个模块,内... 详细信息

Aeon Systems公司的VMEAlpha 64/XP单板计算机的最高执行速度为 550MIPS,适合于Unix和实时应用,如医疗和工业成像、电信、军事和航天。该板采用 275MHz 21064Alpha AXP RISC处理器,备有VMEbus和PCI本地总线接口。它包含的一个模块,内有选用的 i960 RISC I/O协处理器、D64 交易支持,可配置的高速缓存和SCSI-2 接口。该板与该公司的过去基于 150MHz CPU的产品向下兼容。因此, 用户可以充分利用他在OSF/1、Foriran、Ada、C++和其他用于Alpha系统的软件方面的投资。其他的特性包括 6个独立的32位计数器-计时器、诊断用1MB ROM、4个串行口和 1个Ethernet控制器。VMEAlpha 64/XP的起始价为11.995美元。(E.D.1995年7月

关键词：实时操作系统 MHz 处理器锂离子电池 VME 功耗锂离子二次电池锂电池蜂窝电话计算机存储器存贮器单板计算机美元本位币控制器调节器 MIPS 芯片组方向识别器 PSpice ed

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ed患者的营养与饮食

中国全科医学 2002年第1期5卷 20-21页

作者：刘景芳邵春海复旦大学附属华山医院营养科上海市200040

随着科学的进步和人们思想观念的解放,人们对ed有了正确的认识,并有许多学科对ed进行了研究,已有多种方法运用于ed的防治.下面从营养学的角度来谈谈ed患者的营养和饮食.

关键词： ed 勃起功能障碍营养饮食疗法阴茎疾病

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ed的判断与治疗

中国药店 2015年第19期 10-11页

作者：赵振基

今年上半年,以"四级硬度,畅享性福14年"为主题的全球"硬度之父"、勃起硬度级数(EHS)分级标准制定者John Mulhall博士三地(北京、上海、广东)巡讲之旅成功举办。在此次活动中,John Mulhall博士以及国内著名男科(泌尿科、性医学科)专家,... 详细信息

今年上半年,以"四级硬度,畅享性福14年"为主题的全球"硬度之父"、勃起硬度级数(EHS)分级标准制定者John Mulhall博士三地(北京、上海、广东)巡讲之旅成功举办。在此次活动中,John Mulhall博士以及国内著名男科(泌尿科、性医学科)专家,如北京大学第三医院生殖中心男科姜辉教授、北京大学第一医院泌尿外科贺占举教授、北京大学第一医院男科中心张志超教授、中山大学附属第一医院男科主任邓春华教授、中山大学附属第三医院不育与性医学科主任张滨教授等,针对ed(勃起功能障碍)的病因病理以及用药过程中的原则、注意事项等话题,进行了精彩的问答,厘清或纠正了许多认识、治疗方面的误区。特整理成文,希望能帮助零售药店员工更好地为相关患者提供更为专业的服务。

关键词：治疗 ed 标准制定硬度

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ed产品之窗

电子产品世界 1995年第7期 111-120页

National Instruments公司的AT-485和AT-232板为同步串行接口,可分别将Windows PC连接到RS-485和RS-232装置。该板可形成附加的串行口,其波特率为115.2kbps。它具有2端口和4端口两种配置。内置的WindowsCOM驱动器可为多个COM端口提供全... 详细信息

National Instruments公司的AT-485和AT-232板为同步串行接口,可分别将Windows PC连接到RS-485和RS-232装置。该板可形成附加的串行口,其波特率为115.2kbps。它具有2端口和4端口两种配置。内置的WindowsCOM驱动器可为多个COM端口提供全中断驱动缓冲I/O能力。该串行驱动器将Windows下可配置的喘口数从4个增加到9个。现有的应用软件不需专有的函数库即可使用板上的端口。兼容的开发环境包括Visual Basic、Visual C++和Excel以及该公司的LabVIEW、LabWindows和Labwindows/CVI应用软件。两块板都利用ISA即插即用标准,因此,系统配置完全不用跨接线。在Windows 3.1下,一个与即插即用标准不兼容的配置实用程序来完成此任务。

关键词：协处理器美元本位币 HotJava 无线鼠标数据采集系统数据处理系统存取时间芯片组 ed

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ed与药物治疗研究现状

首都医药 2001年第10期8卷 63-64页

作者：杨泉海

男性勃起功能障碍(Etictile Dysfunetion简称ed)是指阴茎不能获得和维持使性生活满意的勃起.近年来,对勃起功能障碍的诊治有了全新的概念.2001年7月30日报道,由中国消费者协会举办了"男性性功能产品市场调查情况通报会",北京8家医院联... 详细信息

男性勃起功能障碍(Etictile Dysfunetion简称ed)是指阴茎不能获得和维持使性生活满意的勃起.近年来,对勃起功能障碍的诊治有了全新的概念.2001年7月30日报道,由中国消费者协会举办了"男性性功能产品市场调查情况通报会",北京8家医院联合开展了对心血管病人性勃起功能障碍发生率的调查.结果表明,心血管疾病患者勃起功能障碍的发生率高达30%～40%,和高血压、冠心病一样,勃起功能障碍也是由血管内壁功能障碍引起的,积极治疗有助于提高心血管病患者的生活质量,还有可能为今后心血管疾病的治疗提供一些新的办法.

关键词：勃起功能障碍 ed 药物治疗一氧化氮前列腺素血管活性肽

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