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echinoside a from Pearsonothuria graeffei Exert the Cytotoxicity to MDA-MB-231 Cells via Mitochondrial Membrane and Modulation of PI3K/Akt/mTOR Pathway

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Journal of Ocean University of China 2023年第1期22卷 205-212页

作者： LI Hongyan CUI Huanhuan CONG Peixu XU Jie XIE Wancui WANG Yuming XUE Changhu College of Marine Science and Biological Engineering Qingdao University of Science and TechnologyQingdao 266042China College of Food Science and Engineering Ocean University of ChinaQingdao 266003China

A kind of triterpene glycosides echinoside a(EA)was extracted from sea cucumber Pearsonothuria graeffei,and its yield was about 0.78%.The purity of EA was 99.0%,and its molecular weight was 1206 *** was a linear tetrasaccharide attached to a pentacyclic triterpene *** inhibited the growth of MDA-MB-231 cells in *** antitumor effect was related to elevate ROS level,decrease mitochondrial membrane potential,enhance caspase-3 expression,induce cells apoptosis and arrest cell cycle at G2/M *** also dose-dependently suppressed the expressions of phophorylation proteins p-PI3K,p-Akt,and p-mTOR as analyzed by western *** results suggested that EA caused MDA-MB-231 cells apoptosis via intrinsic mitochondrial and PI3K/Akt/mTOR *** can be a potential anti-breast cancer agent to enhance the clinical efficacy.

关键词： Pearsonothuria graeffei echinoside a cytotoxicity PI3K/Akt/mTOR pathway

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echinoside a诱导结肠癌细胞凋亡并通过下调VEGFA/VEGFR2/ERK通路抑制其迁移和侵袭

Echinoside A诱导结肠癌细胞凋亡并通过下调VEGFA/VEGFR2/ERK通路...

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作者：张小艺青岛大学

学位级别：硕士

背景结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,以易恶化转移和致死率高为特征。目前针对结肠癌的治疗是以手术为主,放化疗等为辅的综合治疗方法,目前的治疗方案在一定程度上改善了结肠癌的治疗现状,但是仍存在易复发,毒性大等问题。因此研究... 详细信息

背景结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,以易恶化转移和致死率高为特征。目前针对结肠癌的治疗是以手术为主,放化疗等为辅的综合治疗方法,目前的治疗方案在一定程度上改善了结肠癌的治疗现状,但是仍存在易复发,毒性大等问题。因此研究开发高效低毒且较少产生肿瘤耐药性的新型抗癌药物是国际抗癌药物研发机构的重中之重。近年来,海洋天然产物由于其在癌症治疗上优良的效果和独特的活性作用得到了人们的广泛关注。海参皂苷echinoside a是海参的一种次生代谢产物,已被证实有很多的生理活性作用:抗肝癌、调节生殖发育、抗菌等。但是echinoside a在结肠癌上的效果尚未进行评估。研究中,我们通过生物信息学分析与体内外实验结合的方式对echinoside a抗结肠癌发生和发展的具体机制进行探索。方法首先利用CCK-8法测定echinoside a对结肠癌HCT116和SW480细胞增殖能力的影响;接着利用Tunel法和流式细胞术测定了echinoside a诱导结肠癌细胞凋亡的能力;然后利用划痕愈合实验和transwell小室实验结合蛋白免疫印迹法测定了echinoside a对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响;利用蛋白免疫印迹法检测在不同浓度echinoside a的处理下结肠癌细胞中上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的变化情况进而判定echinoside a是否能够影响结肠癌细胞的EMT进程。为了进一步对其中所涉及的分子机制进行探索,我们对0、10、20μM浓度echinoside a处理后的结肠癌细胞系进行了全转录组测序,按照P＜0.05和Fold change（FC）＞2的筛选条件得到了两组差异基因,对两组差异基因做Venn图取交集得到共表达差异基因,再利用R语言以及STRING等生物信息学方法对共表达差异基因进行功能注释和互作网络构建并进一步评分筛选得到关键基因。随后利用公共数据库对关键基因进行了初步验证评估,为了进一步验证生物信息学得出的结论,我们利用q RT-PCR和western blot对关键基因VEGFA在转录和翻译水平上的表达情况进行验证,并构建实验分组验证echinoside a是否通过VEGFA的级联反应抑制结肠癌的侵袭和迁移过程:对照组,过表达空载体组（Vector组）,过表达VEGFA组,过表达VEGFA+echinoside a组。然后利用划痕愈合实验和transwell实验测定了各组处理条件下结肠癌细胞迁移和侵袭的状况,利用蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中侵袭相关蛋白,EMT相关蛋白以及VEGFR2和ERK1/2蛋白的表达情况。随后为了验证echinoside a在体内的抗结肠癌效果,我们构建了balb/c荷瘤小鼠模型,利用不同浓度的echinoside a进行灌胃处理,观察小鼠体重和瘤体积的变化情况,一个月后处死,取各器官及肿瘤组织进行免疫组化和hematoxylin-eosin（HE）染色。结果CCK-8法结果显示随着echinoside a浓度的升高,两种结肠癌细胞系的活性都明显被抑制,并呈现出一定的剂量依赖性。但是正常的结肠上皮细胞对echinoside a并不敏感;Tunel和流式细胞术结果表明,随着浓度升高,echinoside a可以促进结肠癌细胞系的凋亡,随后,我们利用western blot证明了echinoside a能够诱导结肠癌细胞发生内源性凋亡,结果显示mitochondiral cyto c和bcl-2蛋白的表达降低而cytosol cyto c和bax蛋白的表达升高。划痕愈合实验和transwell实验结果显示echinoside a可以剂量依赖性地抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭能力;另外western blot结果发现随着echinoside a浓度的升高,EMT相关标志蛋白E-cadherin表达明显升高,N-cadherin和Vimentin蛋白的表达降低,提示echinoside a抑制结肠癌细胞的上皮间充质转化进程。全转录测序结果显示与对照组相比,高低浓度ecinoside A处理组分别有700个和2692个差异基因,Venn图显示筛选出共表达差异基因437个,功能注释结果表明,这些共表达差异基因主要富集在凋亡、转移、铁死亡、VEGFA通路等肿瘤相关的过程。利用PPI互作网络最终分析得到六个关键基因:VEGFA（下调）,HSPA5（上调）,YARS（上调）,CCL5（上调）,FASN（下调）,ASNS（上调）。VEGFA的作用程度最为显著,作为后续重点研究对象。结合已有的文献研究,我们的研究结果提示echinoside a可能通过抑制VEGFA调控的级联反应抑制结肠癌的发展过程。随后的实验验证结果显示,与正常对照组相比,VEG

关键词： echinoside a 结肠癌凋亡侵袭转移

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海参（Pearsonothuria graeffer）皂苷echinoside a（EA）和holothurin A（HA）在大鼠体内的药物代谢研究

海参（Pearsonothuria graeffer）皂苷echinoside A（EA）和holot...

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2015年中国水产学会学术年会

作者：宋姗姗王玉明中国海洋大学食品科学与工程学院

本文通过对大鼠进行尾静脉注射和口服灌胃实验,对硫酸化三萜皂苷echinoside a（EA）和holothurin A（HA）的药物动力学进行了研究,预处理后的生物样本用HPLC-MS方法进行分析。灌胃后,血清中EA和HA在3 h达到第一个吸收峰,浓度分别为0.83... 详细信息

本文通过对大鼠进行尾静脉注射和口服灌胃实验,对硫酸化三萜皂苷echinoside a（EA）和holothurin A（HA）的药物动力学进行了研究,预处理后的生物样本用HPLC-MS方法进行分析。灌胃后,血清中EA和HA在3 h达到第一个吸收峰,浓度分别为0.83μg/m L和0.34μg/m L,两种皂苷的另一个吸收峰分别在灌胃后的7 h和9 h出现。肝脏中,EA在2 h和9h时均出现了吸收峰,浓度分别为118.6 ng/g和121.2 ng/g。然而,HA在肝脏中仅有一个吸收峰,出现在灌胃后的9 h,其浓度为70.9 ng/g。大鼠尾静脉注射后,血清中的EA在15min内迅速减少,但HA的清除速率较为缓慢,血清中HA的浓度在15min降低到最低水平,为0.21μg/m L,随后保持该水平直至2h。本文建立了生物样本中海参皂苷EA和HA的液相色谱-质谱联用检测方法,发现海参皂苷EA、HA均可经消化道吸收,并描绘出了灌胃后大鼠血清和肝脏中EA和HA的消化吸收曲线,阐明了两种皂苷单体在大鼠血清中的消减规律,为海参皂苷在保健食品及药品中的应用提供了理论基础。

关键词：海参皂苷 echinoside a holothurin A 药物代谢 HPLC-MS

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Effects of alcohol on digestion,absorption and metabolism of sea cucumber saponins in healthy mice

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Food Science and Human Wellness 2024年第1期13卷 137-145页

作者： Wenxian Dang Rong Li Jinyue Yang Changhu Xue Qingrong Huang Yuming Wang Tiantian Zhang College of Food Science and Engineering Ocean University of ChinaQingdao 266003China Laboratory for Marine Drugs and Bioproducts Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology(Qingdao)Qingdao 266237China Department of Food Science Rutgers State University New BrunswickNJ 08901USA

Sea cucumber saponins have attracted more attention in recent years due to biological *** is a popular practice to soak sea cucumber in Baijiu at home and being applied to industrial manufacturing in ***,knowledge of the effect of alcohol on the absorption and metabolism of sea cucumber saponins is *** effects of alcohol on digestion,absorption and metabolism of sea cucumber saponins in BALB/c mice were investigated after gavage and tail intravenous *** results showed that the content of saponins in serum and liver was significantly higher under the influence of alcohol than that in the control group after oral *** promoted the absorption of sea cucumber saponins prototype as well as inhibited the process of saponins being transformed into deglycositic metabolites in the small ***,sea cucumber saponins remained in circulation for a long time and alcohol slowed down the clearance of sea cucumber saponins under the influence of alcohol after intravenous *** confirmed the feasibility of marinating sea cucumber in Baijiu to improve the efficacy of saponins and provides an important theoretical basis for the utilization of sea cucumber and the development of sea cucumber liquor.

关键词： Holothurin A echinoside a Alcohol Absorption Metabolism

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