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eif4a1在胃癌组织中的表达及其沉默对胃癌细胞的增殖迁移的影响研究

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石河子大学学报（自然科学版） 2022年第3期40卷 370-375页

作者：王晓露张伟张蕾潘泽民李冬梅李冬妹石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院石河子832002

目的观察真核翻译起始因子4A1(eukaryotic translation initiation factor 4A1,eif4a1)在胃癌组织中的表达以及沉默eif4a1对人胃癌细胞株MGC-803增殖、迁移能力的影响。方法免疫组织化学法检测eif4a1在胃癌和癌旁组织中的表达,real ti... 详细信息

目的观察真核翻译起始因子4A1(eukaryotic translation initiation factor 4A1,eif4a1)在胃癌组织中的表达以及沉默eif4a1对人胃癌细胞株MGC-803增殖、迁移能力的影响。方法免疫组织化学法检测eif4a1在胃癌和癌旁组织中的表达,real time-PCR、Western Blot检测eif4a1在胃癌细胞(MGC-803)和正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达。在胃癌细胞MGC-803中干扰eif4a1的表达,采用real time-PCR检测eif4a1 mRNA表达水平,Western Blot检测eif4a1蛋白表达水平,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western Blot检测E-cadherin, N-cadherin,基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)蛋白表达水平。结果胃癌组织中eif4a1的表达量(74.51%)高于癌旁组织(29.03%),胃癌细胞中eif4a1的表达高于正常胃黏膜细胞,差异均具有统计学意义(Peif4a1后,实验组(si-eif4a1)OD值低于对照组(si-NC),实验组平板克隆形成数为33.33±3.51,对照组为56.33±3.51,实验组穿膜细胞数为283.22±43.18,对照组354±88.43,以上结果差异均具有统计学意义(Peif4a1在胃癌中高表达并与胃癌细胞增殖密切相关,其可能通过EMT相关蛋白和MMP2介导肿瘤细胞迁移。

关键词：胃癌 eif4a1 细胞增殖细胞迁移

LncRNA PVT1与翻译起始因子eif4a1互作促进胃癌转移的作用和机制研究

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LncRNA PVT1与翻译起始因子EIF4A1互作促进胃癌转移的作用和机制...

作者：王晓露石河子大学

学位级别：硕士

目的探索人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)与真核翻译起始因子4A1(eukaryotic translation initiation factor 4A1,eif4a1)在胃癌发生发展中所发挥的作用,为胃癌转移治疗靶点的确定提供理论依据,为延长患者生存期奠定基础。方法采用RNA pull down联合蛋白质谱检测与PVT1相结合的蛋白,采用RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA Immunoprecipitation,RIP)联合real-time PCR验证eif4a1与PVT1的结合。采用免疫组织化学法检测eif4a1在51例胃癌和31例正常胃黏膜组织中的表达。采用real-time PCR、Western Blot检测eif4a1在胃癌细胞(MGC-803)和正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达。在胃癌细胞MGC-803中分别单独和共同干扰PVT1、eif4a1的表达,采用real-time PCR检测各组PVT1和eif4a1 m RNA表达水平,Western Blot检测eif4a1蛋白表达水平,以验证干扰效果。进一步采用MTT法和克隆形成实验检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,Western Blot检测EMT(epithelial-to-mesenchymal transition)相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)蛋白表达水平。结果RNA pull down实验联合质谱检测的结果提示eif4a1可与PVT1结合互作,RIP实验结果进一步证实eif4a1蛋白与PVT1的结合(Peif4a1主要存在于胞质中,胃癌组织中eif4a1的阳性表达率(74.51%)高于正常胃黏膜组织(29.03%),且在胃癌细胞中eif4a1的表达也高于正常胃黏膜细胞,差异均具有统计学意义(P1、eif4a1,real-time PCR和Western Blot鉴定干扰效率后,采用MTT实验检测不同组细胞的增殖情况,结果显示si-PVT1组细胞增殖能力与si-NC组无明显差异,si-eif4a1组与si-NC组相比细胞增殖能力下降(Peif4a1组平板克隆数(33.33±3.51)低于si-NC组(56.33±3.51)(Peif4a1组一致低于si-NC组。我们进一步检测不同组细胞的迁移侵袭能力,发现分别干扰PVT1和eif4a1表达后细胞划痕愈合率均低于对照组(P1和eif4a1后,细胞划痕愈合率低于两个单独干扰组(P1组穿膜细胞数(177±27.22)低于si-NC组(273.25±49.60),si-eif4a1组穿膜细胞数(283.22±43.18)低于si-NC组(354±88.43)(P41)低于si-PVT1组(352.0±21.78)和si-eif4a1组(354.6±39.31)(P1和eif4a1表达较对照组E-cadherin表达上调,N-cadherin、MMP2表达下调,共同干扰组较单独干扰组E-cadherin表达上调更明显,N-cadherin、MMP2表达下调更明显,以上结果差异均具有统计学意义(P1与eif4a1可在胃癌细胞中结合互作,两者发挥协同作用促进细胞迁移,其机制可能与EMT水平提高和MMP2表达增加有关。

关键词：胃癌 lncRNA PVT1 eif4a1 细胞迁移

达塞布韦靶向eif4a1抑制胃癌生长的机制研究

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达塞布韦靶向eIF4A1抑制胃癌生长的机制研究

作者：周浩郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的胃癌(Gastric cancer,GC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一。据2020年全球癌症统计结果显示,胃癌的发病率在全球范围内排名第五,死亡率排第四。在中国范围内,胃癌发病率排名第二,死亡率排第三。胃癌作为一种发病率高、死亡... 详细信息

背景和目的胃癌(Gastric cancer,GC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一。据2020年全球癌症统计结果显示,胃癌的发病率在全球范围内排名第五,死亡率排第四。在中国范围内,胃癌发病率排名第二,死亡率排第三。胃癌作为一种发病率高、死亡率高的肿瘤,其常规治疗方式主要包括手术和放化疗等。胃癌具有很高的侵袭性和复发性,其治疗效果欠佳,患者的5年生存率较低。鉴于胃癌的发病机制复杂、耐药率高导致其治疗失败,寻找新的胃癌防治靶点,以及针对新靶点开发新的防治药物可能为提高疗效及改善患者预后提供新的策略。真核起始因子4A-I(Eukaryotic initiation factor 4A-I,eif4a1)是一种RNA解旋酶,是eif4A的主要功能结构。eif4a1作为eif4F复合物的主要构成亚基参与帽结构的识别,水解mRNA 5’-UTR中阻止翻译起始的二级结构(茎环结构)从而允许翻译起始。许多研究表明翻译失调直接控制致癌mRNA的选择性翻译和蛋白质合成,也是肿瘤发生和进展的重要调控因素。近年来,已证实eif4a1是促进胆囊癌、乳腺癌和胰腺癌等发生发展的关键因子。由于eif4a1在翻译起始和致癌过程中的重要作用,该蛋白有望成为肿瘤治疗的新靶点。目前,eif4a1在胃癌发生发展中的作用机制尚不清楚,靶向eif4a1的抑制剂也尚未应用于肿瘤的预防与治疗。针对靶点开发新的癌症防治药物往往需要很长的研发周期,而筛选已批准上市的药物,研究其抗肿瘤特性并用于肿瘤的防治,则会大大缩短这一过程。达塞布韦是已获批上市并用于治疗丙型肝炎的抗病毒药物,是一种NS5B聚合酶(非核苷)的抑制剂。它通过与酶活性位点外NS5B结合,诱导酶的构象变化,从而阻止新生病毒基因组的进一步延伸。目前,并无达塞布韦抗肿瘤的相关报道。本研究表明,eif4a1在胃癌组织中高表达,并与患者预后不良正相关;eif4a1通过促进线粒体电子传递链相关功能蛋白的翻译促进胃癌的发生发展;达塞布韦可以作为一种新型的eif4a1抑制剂,能够在体内和体外抑制胃癌生长,这为开发新的胃癌防治手段奠定了基础。方法***4A1在胃癌组织中的表达情况及与患者预后相关性分析的研究方法利用免疫组织化学染色检测eif4a1在胃癌组织芯片中的表达情况,并分析其表达和患者预后的相关性;通过生物信息学及数据库分析eif4a1在胃癌及癌旁组织中的mRNA表达水平与胃癌分级和患者预后的关系。***4A1对胃癌细胞体内外增殖影响的研究方法利用Western blot检测eif4a1蛋白在不同胃癌细胞系中表达的水平,对eif4a1高表达的HGC27和AGS细胞系使用CRISPR-Cas9系统构建eif4a1敲除的稳转细胞系;通过细胞增殖实验评价敲除eif4a1后,对HGC27和AGS细胞增殖能力的影响;通过平板克隆实验和软琼脂克隆形成实验评价敲除eif4a1后对HGC27和AGS细胞锚定和非锚定依赖性生长的影响;通过构建eif4a1敲除后的人源胃癌细胞系异种移植(Cell-derived xenograft,CDX)模型,以评价eif4a1在体内对胃癌生长的影响。3.筛选并验证eif4a1抑制剂的研究方法通过计算机分子模拟对临床用药进行筛选,并预测药物与eif4a1的结合方式及可能的结合位点;分别通过纯蛋白和细胞全蛋白下拉实验,验证药物能否与eif4a1的离体蛋白结合;通过细胞热位移实验(Cellular Thermal Shift Assay,CETSA)验证药物能否在完整细胞内与eif4a1蛋白结合;通过蛋白质合成检测实验,评价药物处理后对细胞翻译水平的影响。4.检测达塞布韦对胃癌细胞生长影响的研究方法通过细胞增殖实验,评价达塞布韦对HGC27和AGS细胞增殖能力的影响;通过平板克隆实验和软琼脂克隆形成实验探讨达塞布韦对胃癌细胞HGC27和AGS细胞锚定和非锚定依赖性生长的作用。5.达塞布韦靶向eif4a1抑制胃癌机制的研究方法通过分析Proteome Xchange数据库中达塞布韦处理肿瘤细胞后的蛋白质组学数据,富集到达塞布韦处理后肿瘤细胞发生改变的信号通路。利用胃癌细胞系加药处理结合eif4a1敲除进行双向验证,通过Western blot分别验证达塞布韦处理和eif4a1敲除后氧化磷酸化通路相关分子蛋白质水平的改变;通过qPCR验证相关分子的mRNA水平改变;检测达塞布韦处理和eif4a1敲除后线粒体膜电位的改变;检测达塞布韦加药和eif4a1敲除后活性氧的变化情况;通过蛋白质合成检测实验来评价eif4a1敲除后对细胞翻译水平的影响。6.评价达塞布韦在体内抑制胃癌生长的研究方法通过建立胃癌的人源性组织异种移植(Patient-derived xenograft,PDX)模型评价达塞布韦在体内对胃癌的作用(

关键词：胃癌 eif4a1 增殖达塞布韦氧化磷酸化

eif4a1与TrkA相互作用后抑制TrkA的泛素化（英文）

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生物化学与生物物理进展 2019年第8期46卷 812-822页

作者：张俊文崔迎彬陈虹黄秉仁刘福生北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心首都医科大学北京100070 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

神经生长因子(NGF)结合细胞表面受体p75NTR (p75神经营养素受体)和TrkA (酪氨酸蛋白激酶A)后介导了细胞分化、细胞生存、凋亡、增殖和侵袭等多个重要的生理病理过程. TrKA能与细胞内多个蛋白质相互作用,但是由于NGF信号通路的复杂性,现... 详细信息

神经生长因子(NGF)结合细胞表面受体p75NTR (p75神经营养素受体)和TrkA (酪氨酸蛋白激酶A)后介导了细胞分化、细胞生存、凋亡、增殖和侵袭等多个重要的生理病理过程. TrKA能与细胞内多个蛋白质相互作用,但是由于NGF信号通路的复杂性,现在仍有必要发现与之相互作用的蛋白质以更准确地了解NGF信号通路.本研究中我们通过酵母双杂交的方法筛选到了一个新的与TrKA相互作用的蛋白质——真核生物翻译起始因子4A1 (eif4a1),然后通过谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白沉降实验(GST-pull-down)和免疫共沉淀实验(Co-IP)证明了TrkA和eif4a1的相互作用.此外NGF能够增强TrkA和eif4a1的相互作用.在鉴定相互作用位点实验中,我们发现eif4a1的氨基端结构域和TrkA的TK结构域参与了相互作用. TrkA和e IF4A1共定位在细胞膜上. NGF能够引起TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接,而eif4a1与TrkA相互作用后能够抑制TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接.综上,得出结论 e IF4A1通过与TrkA相互作用抑制其泛素化调控NGF信号通路.

关键词： TrkA eif4a1 相互作用泛素化

LncRNA PVT1对eif4a1的表达调控作用及机制研究

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农垦医学 2023年第2期45卷 106-111页

作者：金迅郭婷婷孙建伟卢雨林王丹君肖冰琪杜诗尧李冬妹石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室/医学院生化教研室新疆石河子832002

目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(Plasmacytoma Variant Translocation 1,PVT1)对真核翻译起始因子4A1(Eukaryotic Translation Initiation Factor 4A1,eif4a1)可能的表达调控作用及机制。方法:通过对MGC-803细胞PVT1基因的表达进行干扰,对其干扰效果进行了鉴定,然后利用real time-PCR和Western Blot技术对eif4a1基因mRNA、蛋白水平进行了测定;利用LncBase Predicted v.2预测PVT1作为分子海绵在分子上吸附的miRNA;然后用TargetScan和miRTarBase对调控eif4a1表达的miRNA进行预测,结合两者结果得出中介miRNA;进一步通过LncBase Predicted v.2寻找PVT1与候选miRNA结合位点,并通过GEO数据库说明候选miRNA在胃癌中的表达情况;最后从干扰PVT1表达的细胞中通过real time-PCR技术测定候选miRNA的水平。结果:在胃癌细胞MGC-803中成功抑制了PVT1表达。在PVT1表达下调的胃癌细胞中eif4a1的mRNA和蛋白质的表达水平均下调(P1可能结合吸附的miRNA;TargetScan和miRTarBase数据库预测出12个可能调控eif4a1的miRNA;两者结果取交集,发现miR-493-3p可能为PVT1吸附降低的miRNA,且miR-493-3p可能下调eif4a1的水平;通过LncBase Predicted v.2预测出PVT1与miR-493-3p的结合位点位于染色体的8:128048475-128048492;通过GEO数据库发现miR-493-3p在胃癌组织中处于表达下调状态。Real-time PCR结果显示PVT1水平降低后miR-493-3p水平有所增加(P1可通过吸附降低miR-493-3p水平而正向调控eif4a1的表达,miR-493-3p是PVT1调节eif4a1表达的关键中间分子,为PVT1在胃癌中的作用机制提供线索。

关键词：胃癌 PVT1 eif4a1 miR-493-3p

七叶皂苷钠作用eif4a1抑制肝癌细胞增殖的研究

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中国药理学通报 2019年第8期35卷 1120-1125页

作者：王石周大臣崔笑张彬侯辉耿小平安徽医科大学第二附属医院肝胆外科

目的研究eif4a1的表达与肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关性,以及七叶皂苷钠抑制肝癌细胞系增殖的潜在机制。方法应用免疫组化检测80例HCC患者的肿瘤标本中eif4a1的表达水平,并结合临床指标和随访信息分析其相关性;A... 详细信息

目的研究eif4a1的表达与肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关性,以及七叶皂苷钠抑制肝癌细胞系增殖的潜在机制。方法应用免疫组化检测80例HCC患者的肿瘤标本中eif4a1的表达水平,并结合临床指标和随访信息分析其相关性;Annexin V-FITC/PI双染标记法检测七叶皂苷钠对肝癌细胞HepG2及人肝细胞L02两种细胞系凋亡的影响;Transwell迁移实验检测七叶皂苷钠对两种细胞系迁移能力的影响;Western blot、qPCR、细胞免疫荧光检测七叶皂苷钠处理两种细胞系后eif4a1的表达变化。结果肝癌组织中eif4a1表达量明显增高,且eif4a1的表达与患者的肿瘤分化程度、肿瘤直径及生存期存在相关性。七叶皂苷钠(40 μmol·L^-1)可明显促进肝癌细胞系凋亡,并抑制其迁移能力,但对于正常肝细胞系无影响。七叶皂苷钠抑制肝癌细胞系生长增殖的同时,下调肝癌细胞系eif4a1的表达。结论 eif4a1的表达与HCC的发展呈相关性,七叶皂苷钠可能通过影响eif4a1的表达,抑制肝癌细胞系的生长增殖。

关键词：七叶皂苷钠 eif4a1 肝细胞性肝癌免疫组化生存分析 HepG2

shRNA干扰eif4a1基因对胶质瘤细胞体内外生物学特征的影响

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中国科学：生命科学 2019年第8期49卷 987-995页

作者：张俊文范文华方胜陈虹黄秉仁刘福生北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心首都医科大学附属北京天坛医院北京100050 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质... 详细信息

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库(Chinese glioma genome altas,CGGA)分析了真核生物翻译起始因子中eif4a1与脑胶质瘤的关系.生物信息学分析显示,eif4A与胶质瘤病理分级相关并且在胶质瘤细胞中高表达.eif4a1的抑制剂Silvestrol明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力.利用慢病毒感染胶质瘤细胞建立shRNA干扰eif4a1基因的胶质瘤细胞株,进行了一系列体内外生物学特征的实验,研究结果发现,shRNA干扰eif4a1基因后能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、细胞侵袭和迁移.因此,本实验研究证实eif4a1是胶质瘤治疗的有效靶点,为胶质瘤的临床治疗提供可靠的理论基础.

关键词：胶质瘤 eif4a1 增殖克隆形成侵袭迁移

PDCD4/eif4a1信号的异常表达预测早期口腔鳞状细胞癌的术后复发

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PDCD4/eIF4A1信号的异常表达预测早期口腔鳞状细胞癌的术后复发

NHX1和eif4a1双价的转基因甘薯显示出对干旱胁迫增强的耐受性

2020年全国口腔颌面-头颈肿瘤学术大会暨中华口腔医学...

作者：赵梦祥王志勇南京大学附属南京市口腔医院

研究目的:程序性细胞死亡4(PDCD4)是一种抑癌基因,可抑制癌细胞的生长和转移,真核转录起始因子(eif4a1)也参与这个过程。虽然早期口腔鳞状细胞癌(OSCC)的预后一般较好,但许多患者术后会发生复发。因此,确立有效的生物标志物或许能够为... 详细信息

研究目的:程序性细胞死亡4(PDCD4)是一种抑癌基因,可抑制癌细胞的生长和转移,真核转录起始因子(eif4a1)也参与这个过程。虽然早期口腔鳞状细胞癌(OSCC)的预后一般较好,但许多患者术后会发生复发。因此,确立有效的生物标志物或许能够为预测早期口腔鳞癌的预后提供帮助,了解PDCD4/eif4a1信号的临床表达模式将为早期OSCC患者提供诊断性生物标志物和靶标治疗前提。

关键词： PDCD4 eif4a1 早期口腔鳞癌预后诊断

来源： cnki会议评论

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NHX1和eIF4A1双价的转基因甘薯显示出对干旱胁迫增强的耐受性