检索结果-南通市图书馆

作者：张一博大连医科大学

学位级别：硕士

目的:重症急性胰腺炎(Severe Acute pancreatitis,SAP)是临床常见的急腹症,可导致急性肺损伤(ALI)甚至急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。大量研究证实组织或细胞破坏后流出的冷诱导RNA结合蛋白(e CIRP)可破坏肺气血屏障导致肺部损伤加重,进而... 详细信息

目的:重症急性胰腺炎(Severe Acute pancreatitis,SAP)是临床常见的急腹症,可导致急性肺损伤(ALI)甚至急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。大量研究证实组织或细胞破坏后流出的冷诱导RNA结合蛋白(e CIRP)可破坏肺气血屏障导致肺部损伤加重,进而导致流入肺内的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)增多。本研究以“e CIRP-STAT3/C/EBPβ”信号通路为切入点,探究该信号通路在SAP-ALI中的作用机制,明确e CIRP在肺部炎性反应中的调控机理,为SAP-ALI的临床治疗探寻新的靶点;进一步阐释清胰汤影响SAP-ALI变化的干预机制,为SAP-ALI的中西医结合防治提供新的策略和思路方法。方法:首先制备疾病模型,40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照组(Sham,SO)、SAP组、清胰汤治疗组(Qingyi Decoction,QYD)、C23治疗(CIRP抑制剂)组。SAP、QYD、C23组大鼠均采用经胆胰管逆行注射法,予以5%牛磺胆酸钠(50mg/kg)诱导SAP-ALI。C23组:造模后2小时尾静脉注射C23(8mg/Kg)。QYD组:分别于术前半小时、术后12小时给与清胰汤(10.53g/kg)灌胃。对照组以相同操作方式向大鼠体内注射等量0.9%氯化钠注射液,在相同的时间予以QYD等体积的纯水灌胃。完成造模24小时后,麻醉大鼠,维持麻醉状态开腹,腹主动脉采血、收集胰腺及肺标本,部分应用于组织学检查,苏木素—伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色反映病理损伤情况、淀粉酶检测试剂盒检测血清淀粉酶(Amylase,AMY)活性、采取真空干燥法获取肺湿/干重比值(W/D)结果评估胰腺和肺损伤情况。采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检验血清CIRP含量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)体现炎症反应情况及程度。应用Western-Blot法检测肺组织中CIRP、STAT3、P-STAT3、C/EBPβ及反映肺气血屏障破坏情况的黏附分子-1(ICAM-1)蛋白的表达情况。采用q RT-PCR法检测肺组织中CIRP、ICAM-1、STAT3、C/EBPβmRNA的表达。伊文思蓝(Evans Blue,EB)染色实验检测肺血管通透性的变化。扫描电镜下观察NETs形成情况及数量。结果:与健康大鼠相比,SAP组大鼠胰腺及肺病理评分明显升高(P<0.001),显示胰腺及肺部病理损伤严重;血清淀粉酶水平及肺湿干质量比水平均显著升高(P<0.001);SAP组血清CIRP水平、TNF-α及IL-6水平明显升高(P<0.001),显示炎症程度加重;肺组织中CIRP、P-STAT3、C/EBPβ、ICAM-1蛋白水平升高(P<0.001);SAP组肺内上述目标因子的基因表达水平同样有所升高(P<0.001);EB实验结果可以明显观察到SAP组大鼠肺组织表面伊文思蓝渗漏量明显增多,渗漏情况量化比值升高(P<0.001);扫描电镜下观察到SAP肺组织中大量NETs形成。表明在SAP-ALI模型中,e CIRP水平明显上升,STAT3/C/EBPβ信号通路的表达也明显增多。与SAP组相比,QYD治疗组及C23抑制剂组病理损伤减轻,血清淀粉酶及肺湿干质量比水平均降低,血清中CIRP、TNF-α及IL-6水平显著下降,炎症明显好转,肺组织中CIRP、P-STAT3、C/EBPβ、ICAM-1蛋白及基因表达水平均明显降低,伊文思蓝渗出量显著减少,NETs释放明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。表明清胰汤及CIRP抑制剂均能够抑制CIRP的分泌,进而影响STAT3/C/EBPβ信号通路的激活,从而逆转胰腺及肺部的损伤情况,改善下游炎症因子的释放情况。结论:(1)5%牛磺胆酸钠溶液经胆胰管逆行注射24h后,模型组大鼠胰腺、肺发生明显病理损伤,血清淀粉酶含量显著升高,肺湿/干重比值明显升高,以上结果证明,SAP组大鼠胰腺及肺均出现明显损伤,表明SAP-ALI模型制备成功。(2)在SAP-ALI大鼠肺组织中,CIRP在蛋白、基因层面的表达均显著增加,同时伴有血清CIRP水平的升高。QYD及C23干预治疗后,肺组织中CIRP蛋白及基因表达量降低,血清CIRP水平下降,ALI症状明显缓解,表明CIRP与SAPALI产生及发展紧密相关。(3)在大鼠体内CIRP水平升高的同时,P-STAT3、C/EBPβ蛋白及基因表达量照比对照组显著上升,应用C23则能抑制P-STAT3、C/EBPβ的表达,说明CIRP可能通过调控STAT3/C/EBPβ信号通路来影响肺部的损伤情况,CIRP的抑制剂可抑制e CIRP-STAT

关键词：重症急性胰腺炎肺损伤 ecirp STAT3/C/EBPβ信号通路清胰汤

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Extracellular CIRP dysregulates macrophage bacterial phagocytosis in sepsis

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Cellular & Molecular Immunology 2023年第1期20卷 80-93页

作者： Mian Zhou Monowar Aziz Hao-Ting Yen Gaifeng Ma Atsushi Murao Ping Wang Center for Immunology and Inflammation The Feinstein Institutes for Medical ResearchManhassetNYUSA Departments of Surgery and Molecular Medicine Zucker School of Medicine at Hofstra/NorthwellManhassetNYUSA

In sepsis, macrophage bacterial phagocytosis is impaired, but the mechanism is not well elucidated. Extracellular cold-inducible RNA-binding protein (ecirp) is a damage-associated molecular pattern that causes inflammation. However, whether ecirp regulates macrophage bacterial phagocytosis is unknown. Here, we reported that the bacterial loads in the blood and peritoneal fluid were decreased in CIRP^(−/−) mice and anti-ecirp Ab-treated mice after sepsis. Increased ecirp levels were correlated with decreased bacterial clearance in septic mice. CIRP−/− mice showed a marked increase in survival after sepsis. Recombinant murine CIRP (rmCIRP) significantly decreased the phagocytosis of bacteria by macrophages in vivo and in vitro. rmCIRP decreased the protein expression of actin-binding proteins, ARP2, and p-cofilin in macrophages. rmCIRP significantly downregulated the protein expression of βPIX, a Rac1 activator. We further demonstrated that STAT3 and βPIX formed a complex following rmCIRP treatment, preventing βPIX from activating Rac1. We also found that ecirp-induced STAT3 phosphorylation was required for ecirp’s action in actin remodeling. Inhibition of STAT3 phosphorylation prevented the formation of the STAT3-βPIX complex, restoring ARP2 and p-cofilin expression and membrane protrusion in rmCIRP-treated macrophages. The STAT3 inhibitor stattic rescued the macrophage phagocytic dysfunction induced by rmCIRP. Thus, we identified a novel mechanism of macrophage phagocytic dysfunction caused by ecirp, which provides a new therapeutic target to ameliorate sepsis.

关键词： βPIX ecirp Macrophage Phagocytosis Rac1 STAT3

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