检索结果-南通市图书馆

作者：杨霞霞遵义医学院

学位级别：硕士

目的分析我国卡氏肺孢子虫遵义分离株的二氢叶酸还原酶(DHFR)和二氢叶酸合成酶(dhps)基因的序列特性,应用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析dhps基因的变异。方法(1)用地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射的方法,用SD大鼠建立... 详细信息

目的分析我国卡氏肺孢子虫遵义分离株的二氢叶酸还原酶(DHFR)和二氢叶酸合成酶(dhps)基因的序列特性,应用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析dhps基因的变异。方法(1)用地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射的方法,用SD大鼠建立肺孢子虫肺炎动物模型。(2)实验分组:正常对照组(正常大鼠),阴性对照组(给磺胺药的正常大鼠),阳性对照组(建立Pc模型未给磺胺药的大鼠)和实验组(建立Pc模型并用磺胺药治疗的大鼠)。(3)肺组织印片六亚甲基四胺银染色观察卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii,Pc)包囊,肺组织切片苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察其病理变化。(4)收集大鼠的肺组织,提取DNA,用PCR方法扩增卡氏肺孢子虫的DHFR和dhps基因,纯化扩增产物后测序。检索基因文库(Gene bank,gb),进行同源性分析。(5)用AccⅠ和HaeⅢ两种酶对dhps基因的PCR扩增产物进行酶切,并应用PCR-RFLP技术对其进行分析。结果(1)实验组和阳性对照组大鼠全部感染Pc,正常对照组和阴性对照组未发现Pc。(2)实验组和阳性对照组的Pc DHFR和dhps基因PCR扩增均呈阳性,阴性对照组和正常对照组无扩增。实验组和阳性对照组Pc DHFR有832个碱基,与gb[M26495](***)序列比较,同源性均为99%,与gb[AF322061](Pc ***)序列比较,同源性均为100%。实验组大鼠dhps基因有816个碱基,与gb[U66283](Pc ***)序列比较同源性为94%,与gb[U66282](Pc ***)相似性为83%。阳性对照组SD大鼠的卡氏肺孢子虫dhps基因序列有839个碱基,与gb[U66283]序列比较同源性为95%,与gb[U66282]相似性为84%。(3)通过限制性内切酶AccⅠ和HaeⅢ酶切电泳,应用PCR-RFLP技术分析实验组和阳性对照组大鼠Pc dhps基因并未发现Ala55/Ser57位点的突变。结论(1)地塞米松磷酸钠皮下注射法是一种建立SD大鼠肺孢子虫肺炎动物模型的良好方法。(2)实验组和阳性对照组Pc DHFR和dhps基因的PCR扩增均呈阳性,两个基因与Gene bank内相应大鼠源肺孢子的基因序列同源性较高。(3)PCR具有灵敏性好、分辨率高、重复性好、操作简便、快速等优点,适用于肺孢子虫肺炎的分子生物学诊断。(4)进行PCR-RFLP分析后发现我国卡氏肺孢子虫遵义分离株的dhps基因为野生型。

关键词：卡氏肺孢子虫 DHFR dhps 基因 PCR-RFLP

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Mutations in Plasmodium knowlesi Kelch protein 13 and the dihydropteroate synthase gene in clinical samples

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Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2023年第2期16卷 72-79,I0004,I0005,I0006,I0007页

作者： Ahmed Saif Department of Clinical Laboratory Sciences Faculty of Applied Medical SciencesNajran UniversityP.O.Box 1988Najran 61441Saudi Arabia

Objective:To determine the genetic diversity,natural selection and mutations in Plasmodium(P.)knowlesi drug resistant molecular markers Kelch 13 and dhps gene in clinical samples of ***:*** full-length gene sequences Kelch 13 gene(PkK13)from 40 samples and dhps gene from 30 samples originating from Malaysian Borneo were retrieved from public *** diversity,natural selection,and phylogenetic analysis of gene sequences were analysed using DNAsp v5.10 and MEGA ***:Seventy-two single nucleotide polymorphic sites(SNPs)across the full-length PkK13 gene(63 synonymous substitutions and 9 non-synonymous substitutions)with nucleotide diversity ofπ~0.005 was *** of the full-length Pkdhps gene revealed 73 SNPs andπ~0.006(44 synonymous substitutions and 29 non-synonymous substitutions).A high number of haplotypes(PkK13;H=37 and Pkdhps;H=29)with haplotype diversity of Hd~0.99 were found in both genes,indicating population *** mutant alleles were identified in PkK13 amino acid alignment of which,7(Asp3Glu,Lys50Gln,Lys53Glu,Ser123Thr,Ser127Pro,Ser149Thr and Ala169Thr)were within the Plasmodium specific domain,2(Val372Ile and Lys424Asn)were in the BTB/POZ domain and no mutation was observed within the kelch propeller *** 29 non-synonymous mutations in the Pkdhps gene were novel and only presented in exon 1 and ***:Monitoring the mutations from clinical samples collected from all states of Malaysia along with clinical efficacy studies will be necessary to determine the drug resistance in ***.

关键词： Plasmodium knowlesi Kelch 13 dhps Dihydropteroate synthase Drug resistance Mutation

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河南省湖北省鸡球虫的分离鉴定及其对磺胺氯吡嗪钠的抗药性分析

河南省湖北省鸡球虫的分离鉴定及其对磺胺氯吡嗪钠的抗药性分析

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论...

作者：耿天天雷振宇叶成申邦方瑞胡敏赵俊龙贺兰周艳琴华中农业大学预防兽医系农业微生物国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

鸡球虫病是一种肠道寄生虫病,对全球家禽业造成巨大的经济损失。目前,主要的控制策略是在饲料中施用抗球虫药,如磺胺氯吡嗪钠(SC)、地克珠利等。然而,过度使用抗球虫药导致耐药性增加。为了获得田间分离株中球虫病的流行和磺胺氯吡嗪钠... 详细信息

鸡球虫病是一种肠道寄生虫病,对全球家禽业造成巨大的经济损失。目前,主要的控制策略是在饲料中施用抗球虫药,如磺胺氯吡嗪钠(SC)、地克珠利等。然而,过度使用抗球虫药导致耐药性增加。为了获得田间分离株中球虫病的流行和磺胺氯吡嗪钠耐药性的信息,从而为中部地区使用抗球虫药提供合理的指导,我们从河南省和湖北省137个养鸡场中收集了318份新鲜粪便样本。利用核糖体DNA的内部转录间隔区1 (ITS1)序列来鉴定球虫分离虫株种类。然后从不同的鸡场中随机选择了102个样本,通过鸡体笼养试验来评估耐药性,并且筛选到含有柔嫩艾美尔球虫的抗药虫株,进行dhps抗药基因的扩增及测序分析,建立了磺胺耐药柔嫩艾美尔球虫ARMS-PCR和LAMP检测方法,对含有柔嫩艾美尔球虫的临床样品进行了检测。特异性PCR结果所示,鸡艾美球虫的阳性率为97.25%(309/318),最常见的物种为和缓艾美球虫(66.67%),柔嫩艾美球虫(46.86%)和毒害艾美球虫(41.51%)。鸡体笼养试验表明,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(24.51%),其中河南有16株,湖北有9株;24株有部分抗性(23.53%),河南有16株,湖北有8株。而且本研究所建立的ARMS-PCR和LAMP的方法特异性敏感性良好,能成功运用于临床样品的检测,总体而言,这些数据表明鸡球虫病在河南省湖北省无处不在,磺胺氯吡嗪钠的耐药性也很普遍,快速检测磺胺耐药柔嫩艾美尔球虫的分子方法大大提高了球虫抗药性检测的效率。

关键词：鸡球虫病 PCR 球虫耐药性 ACI dhps ARMS-PCR LAMP

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