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特异性杀虫基因Bt cry3a在桑粒肩天牛幼虫两种肠道常驻内生菌中的转化和表达

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微生物学报 2008年第9期48卷 1168-1174页

作者：王中康何伟彭国雄夏玉先李强殷幼平重庆大学生物工程学院重庆市杀虫真菌生物农药lT程技术中心重庆市功能基因及调控技术重点实验室重庆400030

【目的】将特异性杀虫毒蛋白基因Btcry3a转入桑粒肩天牛(Apriona germari Hope,Ag)幼虫肠道常驻内生菌中,构建能在天牛幼虫肠道中定殖并表达特异性杀虫基因Bt cry3a的工程菌。【方法】以传统方法和16S rDNA分子生物学分析等方法分离、鉴... 详细信息

【目的】将特异性杀虫毒蛋白基因Btcry3a转入桑粒肩天牛(Apriona germari Hope,Ag)幼虫肠道常驻内生菌中,构建能在天牛幼虫肠道中定殖并表达特异性杀虫基因Bt cry3a的工程菌。【方法】以传统方法和16S rDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定Ag幼虫肠道优势的常驻内生菌,从中筛选出适合转化的候选菌株。利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力Bt cry3a基因的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305a和pHT7911分别转入Ag幼虫肠道常驻内生菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis Ag12,Ag12)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Ag13,Ag13)中。【结果】从Ag幼虫肠道共分离获得18个不同种的可培养细菌菌株,并从中选取菌株Ag12和Ag13作为出发菌株转入Bt cry3a基因。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试、伴胞晶体电镜检测、毒蛋白SDS-PAGE分析、工程菌定殖性分析以及生物毒力测试,结果显示cry3a基因已经成功转入Ag幼虫的常驻内生菌短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中,并且工程菌Ag12-305a、Ag13-305a、Ag12-7911和Ag13-7911都能在天牛幼虫肠道内稳定生长、繁殖并表达分子量约65kDa的伴孢晶体杀虫蛋白cry3a。【结论】Bt cry3a基因已成功转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势常驻内生菌中,获得了四株能在桑粒肩天牛幼虫肠道内定殖,并能表达目的杀虫基因Bt cry3a的转基因工程菌。

关键词：桑粒肩天牛肠道常驻内生菌 Bt cry3a 工程菌表达

耐盐柳树抗虫基因cry3a重组表达载体的构建

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江苏农业科学 2016年第10期44卷 108-109页

作者：李敏马祥建李玉娟王莹谈峰张健江苏沿江地区农业科学研究所江苏如皋226541

将苏云金芽孢杆菌cry3a类抗虫基因经Bam HⅠ、SalⅠ双酶切后与植物表达载体p CAMBIA1304-C6连接,构建p CAMBIA1304-C6-cry3a重组表达载体,将其转化到农杆菌LBA4404中,同时进行双酶切、测序及PCR鉴定。结果表明:双酶切及测序产物与预期... 详细信息

将苏云金芽孢杆菌cry3a类抗虫基因经Bam HⅠ、SalⅠ双酶切后与植物表达载体p CAMBIA1304-C6连接,构建p CAMBIA1304-C6-cry3a重组表达载体,将其转化到农杆菌LBA4404中,同时进行双酶切、测序及PCR鉴定。结果表明:双酶切及测序产物与预期扩增片段相符,重组表达载体p CAMBIA1304-C6-cry3a构建成功;农杆菌LBA4404中含有重组质粒,成功构建了cry3a农杆菌基因工程菌株。

关键词：柳树抗虫基因 cry3a 表达载体构建

转抗鞘翅目害虫基因银腺杨的获得及其抗虫性的初步研究

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北京林业大学学报 2006年第2期28卷 102-105页

作者：张冰玉苏晓华李义良张永安曲良建王玉珠田颖川中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室中国林业科学研究院森林生态与环境保护研究所中国科学院微生物研究所

培育抗鞘翅目害虫的杨树新品种是防治光肩星天牛等高危害蛀干害虫的有效方法之一.该研究通过根癌农杆菌介导法将抗鞘翅目害虫基因(cry3a)导入银腺杨基因组中,获得了再生植株.PCR及Southern点杂交的分析结果表明,外源基因已整合到杨树基... 详细信息

培育抗鞘翅目害虫的杨树新品种是防治光肩星天牛等高危害蛀干害虫的有效方法之一.该研究通过根癌农杆菌介导法将抗鞘翅目害虫基因(cry3a)导入银腺杨基因组中,获得了再生植株.PCR及Southern点杂交的分析结果表明,外源基因已整合到杨树基因组中.室内抗虫生物学鉴定表明,与对照相比,转基因株系BGA--5对光肩星天牛具有一定的毒杀和显著的生长抑制作用,其杀虫率达30%,对幼虫的生长抑制率达78.46%;其他转基因株系对光肩星天牛幼虫无明显的毒杀和生长抑制作用.

关键词：杨树遗传转化 cry3a 鞘翅目害虫抗虫性

Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究

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氨基酸和生物资源 2008年第3期30卷 5-10页

作者：何伟王中康陈金华李强曹月青殷幼平重庆大学生物工程学院重庆市功能基因及调控技术重点实验室重庆市杀虫真菌农药工程技术中心重庆400030

桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,*** olytic-us)Ag06... 详细信息

桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,*** olytic-us)Ag06菌株和人葡萄球菌(Staphylococcus hom is)Ag08菌株。从中筛选菌株*** olyticusAg06进行质粒消除后作为出发菌株,利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力B t杀虫基因cry3a的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305 a和pHT7911分别转入其中。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试等分析,结果显示cry3a基因已经成功转入Ag幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。

关键词：桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌 Bt杀虫基因 cry3a 转化