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中国兽医学报 2011年第8期31卷 1211-1214页

作者：徐靖博柳思源任久生于汪洋邓琼马腾壑姜昊高妍赵锐峰赵志辉张嘉保吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林大学实验动物中心吉林长春130062 吉林省长春优质肉种牛繁育中心吉林长春130000

用长春优质肉种公牛繁育中心的33头种公牛,通过PCR-SSCP技术,检测细胞色素氧化酶(Cytochrome c ox-idase,cox)中存在的突变点,并对多态片段进行了测序,以确定突变的碱基类型和突变点的位置。根据PCR-SS-CP检测及测序结果得知:在细胞色... 详细信息

用长春优质肉种公牛繁育中心的33头种公牛,通过PCR-SSCP技术,检测细胞色素氧化酶(Cytochrome c ox-idase,cox)中存在的突变点,并对多态片段进行了测序,以确定突变的碱基类型和突变点的位置。根据PCR-SS-CP检测及测序结果得知:在细胞色素氧化酶基因的外显子中,第2外显子的92bp位处存在T→C的突变,该碱基位于密码子第2位,氨基酸由异亮氨酸突变为苏氨酸。同时结合精液品质测定记录,对长春优质肉种公牛繁育中心的33头种公牛的精液品质进行了相关分析,结果显示:细胞色素氧化酶基因的第二外显子CC型的活精子比率与CD型相比存在极显著差异(P<0.01),冻精活力存在显著差异(P<0.05)。

关键词： cox基因 SNP 精液品质公牛

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线粒体DNA cox基因单核苷酸多态性与胃癌发生发展的关联性研究

线粒体DNA COX基因单核苷酸多态性与胃癌发生发展的关联性研究

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作者：王洪才河北医科大学

学位级别：硕士

目的:胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率较高,晚期预后差,严重危害了人类的生命健康。近年来,关于线粒体DNA突变及其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与肿瘤生成的研究备受关注。线粒体DNA(mitochondri... 详细信息

目的:胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率较高,晚期预后差,严重危害了人类的生命健康。近年来,关于线粒体DNA突变及其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与肿瘤生成的研究备受关注。线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)是细胞核外唯一的遗传物质,编码参与氧化磷酸化和ATP生成所需要的多肽,由于本身缺乏组蛋白的保护、缺少有效的基因修复系统等原因,相比于核基因组,mtDNA更易于受到氧化损伤而致突变。mt DNA由编码区和非编码区两部分组成,其编码区包含13种多肽编码基因、2种rRNA基因和22种t RNA基因,而D-Loop区是mtDNA的唯一非编码区。cox基因作为mt DNA编码区的基因之一,其编码产物(coxⅠ-Ⅲ亚基)是细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,cox)的重要组成部分。细胞色素氧化酶是线粒体呼吸链传递中的关键酶,其编码基因的突变和多态性可能与肿瘤发生相关。本研究通过对胃癌患者及正常人群的cox基因进行PCR扩增、测序,发现与胃癌发病相关的SNPs位点,然后将这些位点SNPs与患者临床特征进行对比分析,以探究cox基因SNPs与胃癌发生发展的关系,为胃癌的早期诊断和治疗提供新思路。方法:1研究对象及标本采集:病例组为100例胃癌患者,均为2007年5月-2008年8月于河北医科大学附属第四医院外三科行根治术的病人,所有患者手术前均行胃镜检查、咬取组织送病理化验诊断为胃癌。对照组为2013年9月-2014年6月期间在河北医科大学附属第四医院体检的100例健康人。分别留取胃癌患者及正常人的外周静脉血标本3ml,观察并记录胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小等临床特征,同时全面记录对照组人群的体检资料。2线粒体DNA提取:使用DNA提取试剂盒分别提取胃癌患者及正常对照组人群外周静脉血的线粒体DNA,经DNA定量检测合格后,置于零下20℃冰箱中长期保存备用。3线粒体dnacox基因的扩增及测序:通过查阅文献得知cox基因包括coxⅠ、coxⅡ和coxⅢ三段基因,我们把整个cox基因按约600bps大小分成9个小基因片段(见table2),然后给每段基因片段设计上下游引物,之后再采用pcr技术对每段基因片段进行dna扩增。pcr扩增产物首先经琼脂糖凝胶电泳纯化,然后采用凝胶成像系统检验dna条带扩增情况,若dna条带扩增良好,将该样品送至生物科技有限公司(北京)进行测序。4统计分析:对于计数资料,采用χ2检验进行比较;对于计量资料,当n0.05),说明两组资料均衡可比。2在胃癌组及对照组中随机选出28例标本dna进行整段cox基因的扩增和测序,结果共发现6392t/c、6455c/t、6962g/a、7196c/a、7853g/a、9540t/c、9548g/a、9824t/c、9950t/c9个高频率多态性位点(出现频率>5%)。将以上9个多态性位点的分布频率进行统计学处理后,可以看出胃癌组9540t/c位点的snps分布频率相比于对照组有临界性差异(χ2=3.541,p=0.06),同时9548g/a位点在病例组与对照组间的分布频率(χ2=1.409,p=0.235)也可能具有统计学意义,这两个位点的snps分布频率可能与胃癌发病风险相关。3将9540t/c及9548g/a所属基因片段的病例数增加至100例,发现9540t/c位点的snps与对照组相比具有统计学意义(χ2=4.504,p=0.034),另外发现9548g/a位点snps在病例组和正常对照组间的分布频率同样具有统计学差异(χ2=4.188,p=0.041)。4分别将9540t/c、9548g/a两个位点snps分布频率和胃癌患者的临床特征进行比较分析,结果显示,这两个位点snps与胃癌患者临床特征,包括年龄、性别、肿瘤长径、肿瘤分化程度、肿瘤分期、脉管瘤栓及神经受侵等均无关(p>0.05)。1 mt DNA编码区cox基因上的9540T/C、9548G/A两个位点SNPs与胃癌发病风险相关,9540C基因型可能降低了胃癌的发病风险,而9548A基因型可能增加了胃癌的发病风险。2 cox基因的9540T/C、9548G/A两位点的SNPs与胃癌患者临床特征没有相关性。结论:

关键词：胃癌 mtDNA 编码区 cox基因 SNPs 发病风险

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Tet-on系统诱导cox1基因在小鼠前脂肪细胞3T3-L1中的表达

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山东大学学报（医学版） 2013年第5期51卷 24-28页

作者：张玉颖张晾潘杰山东省动物抗性生物学重点实验室山东师范大学生命科学学院济南250014

目的利用Tet-On诱导表达系统,调控目的基因环氧化酶(cox)的表达,探讨cox对脂肪细胞分化的作用,为进一步深入研究肥胖的致病机制奠定理论基础。方法脂质体介导调控质粒pTet-On转染3T3-L1细胞,G418筛选单细胞克隆,RT-PCR法检测四环素反应... 详细信息

目的利用Tet-On诱导表达系统,调控目的基因环氧化酶(cox)的表达,探讨cox对脂肪细胞分化的作用,为进一步深入研究肥胖的致病机制奠定理论基础。方法脂质体介导调控质粒pTet-On转染3T3-L1细胞,G418筛选单细胞克隆,RT-PCR法检测四环素反应转录活化因子(rtTA)基因的整合;pTRE-Tight-Luc质粒瞬时转染含rtTA基因的细胞克隆,强力霉素(DOX)诱导表达后检测荧光素酶活性,筛选出高效表达的抗性克隆,命名为3T3-L1-Tet-On-26#;构建重组质粒pTRE-Tight-cox1,双酶切鉴定后测序,将测序正确的重组质粒瞬时转染3T3-L1-Tet-On-26#细胞克隆,免疫荧光检测cox1的表达。结果建立了3T3-L1-Tet-On细胞模型;成功构建了pTRE-Tight-cox1重组质粒,瞬时转染3T3-L1-Tet-On-26#,DOX诱导后cox1表达显著升高。结论诱导表达细胞株3T3-L1-Tet-On的建立为cox1功能基因的研究提供了平台。

关键词： 3T3-L1细胞 Tet-On诱导基因表达系统 cox基因强力霉素

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嗜酸性氧化亚铁硫杆菌cox、cup和iro基因在亚铁氧化中的作用比较分析

嗜酸性氧化亚铁硫杆菌cox、cup和iro基因在亚铁氧化中的作用比较...

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作者：崔爽山东大学

学位级别：硕士

嗜酸性氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）是一种专性自养的极端嗜酸的硫杆菌,它广泛分布于硫化矿床、酸性矿水及土壤中,在细菌冶金、煤的脱硫和含硫废水的处理等方面发挥着重要作用,是目前研究最深入,应用最广泛的浸矿... 详细信息

嗜酸性氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）是一种专性自养的极端嗜酸的硫杆菌,它广泛分布于硫化矿床、酸性矿水及土壤中,在细菌冶金、煤的脱硫和含硫废水的处理等方面发挥着重要作用,是目前研究最深入,应用最广泛的浸矿细菌之一。它能在酸性条件下将Fe2+氧化为Fe3+,或者将元素硫或还原性硫化物氧化为硫酸,并依靠这些无机物的氧化过程获得能量。浸矿过程中产生的Fe3+是促使矿石中其他金属浸出的氧化剂,因此该菌的亚铁氧化能力与矿石浸出紧密相连。在实际应用过程中,这类细菌生长缓慢,代时长,细胞得率低,限制了它在生产中的应用效率,也给研究工作带来诸多不便。因此,对其进行遗传改造,提高该菌的亚铁氧化能力势在必行。本论文对嗜酸性氧化亚铁硫杆菌铁氧化系统电子传递链基因进行了克隆鉴定,并与具有广泛宿主的质粒连接,置于强启动子tac下,重新导入该菌中获得表达,研究并比较了所构建菌株的铁氧化活性,生长状况和浸矿能力的变化,为改造这类菌中提供理论和方法依据。首先将***19859中的细胞色素氧化酶基因cox,含铜蛋白基因cup,以及亚铁氧化酶基因iro分别克隆至pUC18质粒上,然后亚克隆至pJRD215或pMSD2上,构建重组质粒pTcox、pTCUP和pTIRO。通过接合转移将这些质粒转入***19859中。然后通过菌落PCR等方法验证,表明成功构建了基因工程菌***（pTcox）、***（pTCUP）和***（pTIRO）。测定了所构建菌株的质粒稳定性,亚铁消耗速率,氧化还原电位,生长曲线和浸矿效率,并进行了比较。结果表明重组质粒能够稳定地遗传,***（pTcox）的铁氧化活性得到较大幅度的提高。然后以***野生型为对照,以alaS基因为内参,运用荧光定量对***（pTcox）的rus操纵子内基因的表达情况进行了分析。为嗜酸性氧化亚铁硫杆菌进一步的基因改良工作提供了理论指导。

关键词：生物冶金嗜酸性氧化亚铁硫杆菌 Fe2+氧化活性 cox基因 cup基因 iro基因接合转移

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我国东南沿海坛紫菜遗传多样性研究

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海洋学研究 2020年第4期38卷 58-64页

作者：吴晓雯王铁杆刘颖张鹏浙江省海洋水产养殖研究所温州市海洋生物遗传育种重点实验室浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室浙江温州325005

利用线粒体cox和叶绿体rbcL基因片段对我国东南沿海坛紫菜(Pyropia haitanensis Chang et Zheng)9个野生群体和2个养殖群体(共125个个体)进行遗传多样性分析。比对分析后得到408 bp的cox基因片断和488 bp的rbcL基因片断。联合分析的基... 详细信息

利用线粒体cox和叶绿体rbcL基因片段对我国东南沿海坛紫菜(Pyropia haitanensis Chang et Zheng)9个野生群体和2个养殖群体(共125个个体)进行遗传多样性分析。比对分析后得到408 bp的cox基因片断和488 bp的rbcL基因片断。联合分析的基因片断长度为896 bp,其中T、C、A、G的含量分别为34.9%、14.6%、34.2%和16.3%。检测到变异位点128个,其中单碱基变异位点19个,简约信息位点109个。群体的平均核苷酸多样性为0.0359±0.0284,单倍型多样性为0.8170±0.0240。125个个体共定义了31个单倍型,其中Hap1、Hap10和Hap16是核心单倍型,分别占全部样本的32.8%、12.8%和24.8%。群体遗传距离和地理距离相关性检测显示二者呈线性相关(R^(2)=0.0022,p=0.7354),即遗传距离随地理距离的增大而增大,但未形成地理隔离。根据单倍型构建的ML树显示,坛紫菜群体之间没有明显的地理谱系结构,表明各个群体之间存在基因交流。

关键词：坛紫菜 cox基因 rbcL基因遗传多样性

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