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用脂质体法转染 cos-7 细胞条件的优化

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军事医学科学院院刊 1997年第2期21卷 125-127页

作者：胡志远邢桂春贺福初军事医学科学院放射医学研究所

现有的多种真核细胞基因转染方法存在繁琐和效率低的问题，我们利用脂质体包裹的方法，以瞬时表达系统中最常用的ＣＯＳ－７细胞为靶，观察了影响转染效率的多种因素，优化了转染条件。

关键词：瞬时表达 cos-7细胞转染效率脂质体

人CD8l真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的表达

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第四军医大学学报 2004年第13期25卷 1248-1248页

作者：刘秋平贾战生杜德伟李光玉潘蕾魏欣罗新栋王全楚

目的：构建含人cD81基因的真核表达载体，探讨CD81在cos-7细胞的表达，为研究丙型肝炎病毒(1-ICV)与cD81相互作用奠定基础．方法：从我们构建的含人CD81全编码基因载体pMD18-T-CD81，应用双酶切回收基因片段，定向克隆入真核表达载体pV... 详细信息

目的：构建含人cD81基因的真核表达载体，探讨CD81在cos-7细胞的表达，为研究丙型肝炎病毒(1-ICV)与cD81相互作用奠定基础．方法：从我们构建的含人CD81全编码基因载体pMD18-T-CD81，应用双酶切回收基因片段，定向克隆入真核表达载体pVAX1；通过脂质体介导的基因转染技术将pVAX1-CD81和空载体转入cos-7细胞；应用抗CD81单克隆抗体通过间接免疫荧光法检测cos-7细胞的表达产物．结果：重组的含CD81基因的真核表达载体pVAX1-CD81经酶切和PCR鉴定分析正确，并证明在cos-7细胞表面有效地表达CD81蛋白．结论：成功构建含CD81全编码基因的真核表达载体pVAX1-CD81，并在cos-7细胞表面有效表达CD81分子，该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供模型．

关键词： CD8l 真核表达载体 cos-7细胞基因表达丙型肝炎病毒 HCV

鼠内皮细胞抑制素的克隆及在cos-7细胞中的分泌表达

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上海第二医科大学学报 2000年第5期20卷 392-394页

作者：汤宇澄孙文长居中华钱关祥陈诗书上海第二医科大学人类基因治疗研究中心上海200025

目的从小鼠肝脏中克隆出endostatin并在cos - 7细胞中分泌表达 ,为其在肿瘤抗血管基因治疗中的应用打下基础。　方法用RT -PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA并克隆入测序载体PUC -T测序证实后 ,装入分泌表达载体 pSEC -hygromycin ,... 详细信息

目的从小鼠肝脏中克隆出endostatin并在cos - 7细胞中分泌表达 ,为其在肿瘤抗血管基因治疗中的应用打下基础。　方法用RT -PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA并克隆入测序载体PUC -T测序证实后 ,装入分泌表达载体 pSEC -hygromycin ,用DEAE -葡聚糖转染cos - 7细胞 ,从mRNA水平及蛋白水平检测内皮细胞抑制素的表达。　结果测序结果显示所克隆的小鼠endostatincDNA与文献报道的完全一致 ,RT -PCR显示转染后的cos - 7细胞有endostatin的mRNA表达 ,Western -blot显示转染后的cos - 7细胞上清及包浆内均有目的蛋白的表达。　结论成功克隆并分泌表达了小鼠endostatin。

关键词：内皮细胞抑制素克隆 cos-7细胞分泌表达

转化生长因子β_1在cos一7细胞中的短暂表达

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白求恩医科大学学报 1995年第3期21卷 235-237页

作者：宋丽华刘莉田生礼冯彪范洪学刘及空军总医院

本文将人转化生长因子β１（ｈＴＣＦβ１）全长ｃＤＮＡ克隆至真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ的ＮｈｅⅠ位点，利用ＤＥＡＥ一Ｄｅｘｔｒａｎ法将ｈＴＧＦβ１载体导入ｃｏｓ一７细胞中。实验结果表明：所构建的表达载体在ｃｏｓ一７细胞... 详细信息

本文将人转化生长因子β１（ｈＴＣＦβ１）全长ｃＤＮＡ克隆至真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ的ＮｈｅⅠ位点，利用ＤＥＡＥ一Ｄｅｘｔｒａｎ法将ｈＴＧＦβ１载体导入ｃｏｓ一７细胞中。实验结果表明：所构建的表达载体在ｃｏｓ一７细胞内有转录水平的表达，这为我们进一步研究ｈＴＧＦβ１在其它细胞内的表达与调控之间的关系奠定了基础。

关键词：转化生长因子表达克隆 cos-7细胞

C端带cmyc和多聚组氨酸双标记的重组人β防御素-2真核表达载体的构建及其在cos-7细胞的转染表达

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四川生理科学杂志 2000年第4期22卷 45-45页

作者：蔡绍晖杜军陈新年黄宁王莉长濑文彦长谷川高明王伯瑶华西医科大学感染与免疫研究室成都610041 日本名古屋大学医学部保健学科

目的：人类β-防御素(β-defensins hBDs)是一类具广谱抗微生物活性的小分子阳离子多肽，在人体多种器官尤其是粘膜上皮细胞中广泛存在，起着重要的屏障防御作用。由于hBD-2在粘膜上皮组织受炎症刺激呈诱导性表达，提示其在机体粘膜防... 详细信息

目的：人类β-防御素(β-defensins hBDs)是一类具广谱抗微生物活性的小分子阳离子多肽，在人体多种器官尤其是粘膜上皮细胞中广泛存在，起着重要的屏障防御作用。由于hBD-2在粘膜上皮组织受炎症刺激呈诱导性表达，提示其在机体粘膜防御中的作用更为突出。本研究旨在探索建立不仅能有效表达和分泌人类β-防御素-2而且其表达产物易于被检测和分离纯化的哺乳类动物型工程细胞的可能性及技术路线。

关键词：真核表达载体防御素转染 cos-7细胞组氨酸粘膜上皮细胞 hBD-2 哺乳类动物工程细胞人类

重组人beta防御素基因在cos-7细胞的转染表达

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四川生理科学杂志 2000年第2期22卷 35-35页

作者：蔡绍晖杜军陈新年黄宁王伯瑶华西医科大学感染免疫研究室成都610041 日本名古屋大学医学部免疫学研究室

为探索建立持续稳定表达hBD-2的哺乳类动物型工程细胞的可能性，本研究构建真核重组表达载体***2B／hBD-2以进行cos-7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒***2B构建出hBD-2的重组表达裁... 详细信息

为探索建立持续稳定表达hBD-2的哺乳类动物型工程细胞的可能性，本研究构建真核重组表达载体***2B／hBD-2以进行cos-7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒***2B构建出hBD-2的重组表达裁体***2B／hBD-2，并经DNA顺序证明hBD-2eDNA片段的插入方向和其全长cDNA的硷基组成顺序均准确无误。

关键词： hBD-2 转染 cos-7细胞防御素稳定表达基因重组表达哺乳类动物全长cDNA 工程细胞

重组人血小板生成素基因在cos-7细胞及在小鼠体内的转移与表达

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中国实验血液学杂志 2001年第1期9卷 14-17页

作者：臧维苹魏旭东伏爽王申五汤健王德炳北京大学人民医院血液病研究所北京100044 北京大学医学部心血管病基础研究所北京100083

为了观察重组血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)基因在cos 7细胞及在小鼠体内的表达 ,应用DNA重组技术构建了含TPO基因的真核表达质粒 pcd2 TPO ,用脂质体法将其转染cos 7细胞 ,用裸质粒DNA直接注射加电脉冲的方法将 pcd2 TPO质粒... 详细信息

为了观察重组血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)基因在cos 7细胞及在小鼠体内的表达 ,应用DNA重组技术构建了含TPO基因的真核表达质粒 pcd2 TPO ,用脂质体法将其转染cos 7细胞 ,用裸质粒DNA直接注射加电脉冲的方法将 pcd2 TPO质粒转移到小鼠骨骼肌中。用RT PCR及ELISA法检测到TPO基因在cos 7细胞的瞬时表达 ,MTT法显示其有刺激TPO依赖细胞系增殖的活性。RT PCR及免疫组织化学染色可检测到TPO基因在转基因小鼠骨骼肌的表达 ,ELISA法定量检测转基因组小鼠血清TPO浓度为 (1185± 2 64)ng L ,明显高于正常小鼠的TPO浓度 (2 5 0± 76)ng L。本实验实现了TPO基因在小鼠体内和cos 7细胞的转移。

关键词：血小板生成素 cos-7细胞基因转移基因表达

人乳头瘤病毒16型E6蛋白在cos-7细胞中表达

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中国热带医学 2009年第12期9卷 2243-2243,2269页

作者：孙丽娜魏建春张恩民张慧娟俞东征海荣中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的研究人乳头瘤病毒16型E6蛋白在cos-7细胞中的定位及表达。方法构建pEGFP-C1介导的HPV-16E6的真核表达载体pGFP-16E6,体外转染cos-7细胞,采用荧光显微镜观察HPV-16E6蛋白在cos-7细胞中的定位及表达。结果细胞在转染pGFP-16E6质粒后,... 详细信息

目的研究人乳头瘤病毒16型E6蛋白在cos-7细胞中的定位及表达。方法构建pEGFP-C1介导的HPV-16E6的真核表达载体pGFP-16E6,体外转染cos-7细胞,采用荧光显微镜观察HPV-16E6蛋白在cos-7细胞中的定位及表达。结果细胞在转染pGFP-16E6质粒后,细胞核发出明亮的绿色荧光,GFP-16E6于转染后6h开始表达,至21h表达到高峰,随后表达逐渐降低。结论HPV-16E6蛋白主要表达于cos-7细胞核内,并且表达随时间成动态变化。

关键词：人乳头瘤病毒E6蛋白绿色荧光蛋白 cos-7细胞

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蚓激酶基因在真核细胞cos-7中的表达

军事医学科学院院刊 2004年第3期28卷 218-220页

作者：曹承华董国清苑晓玲善亚军赵振虎陈家佩从玉文军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的 :为了实现蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞cos 7中的表达 ,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白。方法 :将F 3,F 5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接 ,构建重组表达质粒pcDNA 3和pcDNA 5 ,利用cos 7细胞进行基因F 3和F 5的瞬时表达 ... 详细信息

目的 :为了实现蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞cos 7中的表达 ,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白。方法 :将F 3,F 5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接 ,构建重组表达质粒pcDNA 3和pcDNA 5 ,利用cos 7细胞进行基因F 3和F 5的瞬时表达 ;纤维蛋白平板法对培养液上清进行活性检测。结果 :蚓激酶基因片段F 3,F 5在真核细胞cos 7中实现了表达 ;SDS PAGE显示蛋白质条带 ,纤维蛋白平板法检测培养液上清有明显的纤溶活性。结论 :蚓激酶基因片段F 3,F 5可在真核细胞cos 7中分泌表达 ,表达产物具有一定的纤溶活性。

关键词：蚓激酶基因表达真核细胞 cos-7细胞