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cos-7细胞上转染的人类三型酸敏感离子通道的生理学和药理学特性

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第4期35卷 421-425页

作者：郑云洁唐明刘长金宋元龙骆红艳胡新武 Jurgen Hescheler 华中科技大学同济医学院基础医学院生理学系武汉430030

目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在cos-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的h... 详细信息

目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在cos-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的hASIC3通道恢复到50%备用状态时所需的时间为(618±21)ms。胞外pH值在(6.40±0.05)时可使50%的hASIC3通道激活。pH值低于8时hASIC3通道的利用率降低,在生理状态pH值条件下,通道利用率降低了大约50%。阿米洛利能特异性阻断快速激活快速失活hASIC3通道且半数抑制浓度为(12.5±3.0)μmol/L。hASIC3通道的电流电压(I-V)关系曲线在很宽广的电压范围内呈线性关系(-80^+80 mV),翻转电位为(+43±5)mV。结论hASIC3通道作为一种酸感受器,可能对感受人体pH值的变化起很重要的作用。

关键词：酸敏感离子通道 cos-7细胞 pH值阿米洛利

人TRAIL基因在cos-7细胞中的表达及在治疗肝细胞癌中的作用

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中华外科杂志 2003年第9期41卷 673-675页

作者：肖震宇李莉陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科武汉430030 华中科技大学同济医学院免疫学教研室

目的　探讨TRAIL以及联合应用亚毒性剂量的化疗药对肝细胞癌的治疗作用。方法　用人TRAIL重组表达质粒pcDNA 3 0 hTRAIL瞬时转染cos 7细胞 ,利用其表达的活性蛋白 ,并联合应用亚毒性剂量的化疗药 ,观察其对于肝癌细胞株 (HepG2、SMMC 7... 详细信息

目的　探讨TRAIL以及联合应用亚毒性剂量的化疗药对肝细胞癌的治疗作用。方法　用人TRAIL重组表达质粒pcDNA 3 0 hTRAIL瞬时转染cos 7细胞 ,利用其表达的活性蛋白 ,并联合应用亚毒性剂量的化疗药 ,观察其对于肝癌细胞株 (HepG2、SMMC 772 1)的胞毒作用。　结果瞬时转染cos 7细胞能够表达有活性的人TRAIL蛋白 ,对两种肝癌细胞株均有弱的杀伤作用 ,杀伤率为 9 2 %、9 5 % ;联合应用亚毒性剂量的化疗药丝裂霉素 (M)、5氟尿嘧啶 (5 FU)、放线菌素D(AcD)能够大幅度提高TRAIL的细胞毒活性 ,杀伤率分别为TRAIL +M(6 0 1%、32 6 % ) ,TRAIL +5 FU(6 8 1%、2 9 2 % ) ,TRAIL +AcD(72 9%、5 8 6 % )联合用药前后有显著差异性 (P 细胞株的作用 ,对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。

关键词： TRAIL基因 cos-7细胞表达治疗肝细胞癌

pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在cos-7细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 390-393页

作者：詹升华张徽刘纯重庆医科大学病理学教研室重庆400016 重庆医科大学第一医院内分泌科重庆400016

目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在cos 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 详细信息

目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在cos 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染cos 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染cos 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。

关键词：人促甲状腺激素受体 pcDNA3.1 cos-7细胞转染动物模型

重组人白细胞介素12基因在cos－7细胞的高效表达

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中国医学科学院学报 1996年第3期18卷 166-171页

作者：刘锰郑珊珊中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所世界卫生组织免疫学合作研究中心

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的高效真核细胞表达载体，通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ改良方法，共转染至ＣＯＳ－７细胞中。结果高效表达了ｒｈＩＬ－１２蛋白，表达量为６００Ｕ／ｍｌ；并研究其... 详细信息

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的高效真核细胞表达载体，通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ改良方法，共转染至ＣＯＳ－７细胞中。结果高效表达了ｒｈＩＬ－１２蛋白，表达量为６００Ｕ／ｍｌ；并研究其对人ＰＢＭＣ的促增殖作用和增加ＮＫ细胞毒活性的作用，为进一步研究ＩＬ－１２的生物学功能奠定了基础。

关键词：真核基因表达 cos-7细胞白细胞介素12

重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的构建及其在仓鼠体内及cos-7细胞中的表达(英文)

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中南大学学报（医学版） 2006年第1期31卷 1-5页

作者：吕毅白纪刚王浩华西安交通大学第一医院普通外科西安710061

目的:构建猪源性CCK基因重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK(CCKpDNA),研究其在哺乳动物细胞和仓鼠体内的表达。方法:以限制性内切酶法从中介载体pMD18-T/CCK中切取目的片段CCK,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染cos-7... 详细信息

目的:构建猪源性CCK基因重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK(CCKpDNA),研究其在哺乳动物细胞和仓鼠体内的表达。方法:以限制性内切酶法从中介载体pMD18-T/CCK中切取目的片段CCK,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染cos-7细胞,同时采用直接肌肉注射法免疫仓鼠,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果:用CCKpDNA转染cos-7细胞后24,48,72 h均可检测到绿色荧光蛋白的表达,其中72 h组荧光强度达到最强。用CCKpDNA免疫仓鼠后,第4天注射部位可检测到绿色荧光蛋白的表达,第14天荧光强度明显增强,第42天荧光强度进一步增强,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达。结论:成功构建了猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并成功地在哺乳动物细胞和仓鼠体内进行了表达,为仓鼠胰腺癌的交叉免疫治疗奠定了基础。

关键词：胆囊收缩素骨骼肌细胞转染绿色荧光蛋白 cos-7细胞

EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体的构建及其转染cos-7细胞条件的优化

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中国生物制品学杂志 2008年第11期21卷 933-937,944页

作者：任培君易小萍张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的构建EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体,并优化PEI介导基因转染cos-7细胞的条件。方法PCR扩增EGFP和PDGFRβ基因,依次连接至pcDNA3.1(+)质粒中,构建融合基因表达载体H-E-P-pcDNA3.1(+),经PEI介导转染cos-7细胞,并对转染条件进行优化。... 详细信息

目的构建EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体,并优化PEI介导基因转染cos-7细胞的条件。方法PCR扩增EGFP和PDGFRβ基因,依次连接至pcDNA3.1(+)质粒中,构建融合基因表达载体H-E-P-pcDNA3.1(+),经PEI介导转染cos-7细胞,并对转染条件进行优化。结果融合基因表达载体经酶切及测序证明构建正确。经PEI介导转染cos-7细胞的最佳条件为:DNA浓度2μg/ml,N/P比值15.5,在无血清条件下转染。此条件适用于滚瓶培养细胞的转染。结论已成功构建了EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体,并优化了经PEI介导转染cos-7细胞的条件。

关键词： EGFP基因 PDGFRB基因融合表达 cos-7细胞转染

C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在cos-7细胞的转染表达

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生物医学工程学杂志 2003年第2期20卷 255-259,280页

作者：蔡绍晖杜军陈新年黄宁长濑文彦长谷川高明王伯瑶四川大学华西医学中心感染与免疫研究室日本名古屋大学医学部保健学科

本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真... 详细信息

本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真核表达质粒 pc DNA3.1/Myc- His(+) ,构建出 C端带 Myc和 6× His的 rpc DNA3.1/Myc-His(+) /h BD- 2。用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入 cos- 7细胞 ,分别从 m RNA和蛋白质水平分析 h BD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。采用 RT- PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约 2 4 0 bp的片段 ,其大小与预测相符。采用 Western blot法 ,用抗 His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约 10 Kd处有强反应条带显示 ,其大小与该重组质粒结构中由 p CMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量 (10 .1)相符。双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示 :分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较 ,转染重组质粒的 cos- 7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环。这些结果提示 :所建立的 h BD- 2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性 h BD- 2。

关键词： cos-7细胞基因重组基因转染 RT-PCR法双层肉汤琼脂平板扩散法 β-防御素-2 细胞培养

Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的初步表达

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西安交通大学学报（医学版） 2003年第6期24卷 542-544,548页

作者：杨章民孔令洪来宝长王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础... 详细信息

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti CD3scFv B7.1,并经脂质体法转染cos 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在cos 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗CD3scFv B7.

关键词： Anti-CD3 scFv-B7.1 cos-7细胞抗CD3单链抗体基因表达肿瘤生物治疗真核表达载体

狂犬病病毒糖蛋白真核表达载体的构建及其在cos-7细胞中的表达

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中国生物制品学杂志 2007年第9期20卷 656-657,663页

作者：姚为民舒适周华隋红刘原舒王志武长春生物制品研究所长春130062 中国生物技术集团公司北京100029

目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在cos-7细胞中表达。方法培养狂犬病病毒,提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染cos-7细胞,用ELISA及... 详细信息

目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在cos-7细胞中表达。方法培养狂犬病病毒,提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染cos-7细胞,用ELISA及间接免疫荧光法检测狂犬病病毒糖蛋白在cos-7细胞中的瞬时表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(A)/G,转染cos-7细胞后,在其培养上清中未检测到狂犬病病毒糖蛋白的表达。间接免疫荧光试验表明,pcDNA3.1(A)/G能有效地表达狂犬病病毒糖蛋白于转染的cos-7细胞膜上。结论真核细胞表达载体pcDNA3.1(A)/G能够在cos-7细胞中表达狂犬病病毒糖蛋白,为开发狂犬病病毒糖蛋白基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白 cos-7细胞真核表达