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corilagin inhibits SARS-CoV-2 replication by targeting viral RNA-dependent RNA polymerase

Acta Pharmaceutica Sinica B 2021年第6期11卷 1555-1567页

作者： Quanjie Li Dongrong Yi Xiaobo Lei Jianyuan Zhao Yongxin Zhang Xiangling Cui Xia Xiao Tao Jiao Xiaojing Dong Xuesen Zhao Hui Zeng Chen Liang Lili Ren Fei Guo Xiaoyu Li Jianwei Wang Shan Cen Institute of Medicinal Biotechnology Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical SchoolBeijing 100050China Institute of Pathogen Biology Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical SchoolBeijing 100730China Institute of Infectious Disease Beijing Ditan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100015China Lady Davis Institute Jewish General HospitalMc Gill UniversityMontrealQuebec H3T 1E2Canada CAMS Key Laboratory of Antiviral Drug Research Peking Union Medical CollegeChinese Academy of Medical SciencesBeijing 100730China

Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2(SARS-CoV-2) has become one major threat to human population *** RNA-dependent RNA polymerase(RdRp) presents an ideal target of antivirals,whereas nucleoside analogs inhibitor is hindered by the proofreading activity of ***,we report that corilagin(RAI-S-37) as a non-nucleoside inhibitor of SARS-CoV-2 RdRp,binds directly to RdRp,effectively inhibits the polymerase activity in both cell-free and cell-based assays,fully resists the proofreading activity and potently inhibits SARS-CoV-2 infection with a low 50% effective concentration(EC50) value of 0.13 μmol/*** modeling predicts that RAI-S-37 lands at the palm domain of RdRp and prevents conformational changes required for nucleotide incorporation by *** addition,combination of RAI-S-37 with remdesivir exhibits additive activity against antiSARS-CoV-2 *** with the current data available on the safety and pharmacokinetics of corilagin as a medicinal herbal agent,these results demonstrate the potential of being developed into one of the much-needed SARS-CoV-2 therapeutics.

关键词： SARS-CoV-2 RdRp Structure-based virtual screening Viral replication Non-nucleoside inhibitor Drug combinations corilagin

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corilagin alleviates podocyte injury in diabetic nephropathy by regulating autophagy via the SIRT1-AMPK pathway

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World Journal of Diabetes 2024年第9期15卷 1916-1931页

作者： Yu Lou Yu-Ting Luan Wen-Qing Rong Yun Gai Department of Preventive Treatment of Disease Seventh People's Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese MedicineShanghai 200137China Department of Infectious Diseases Seventh People's Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese MedicineShanghai 200137China Department of General Practice(Including Medical Oncology) Seventh People's Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese MedicineShanghai 200137China

BACKGROUND Diabetic nephropathy(DN)is the most frequent chronic microvascular consequence of diabetes,and podocyte injury and malfunction are closely related to the development of *** have shown that corilagin(Cor)has hepatoprotective,anti-inflammatory,antibacterial,antioxidant,anti-hypertensive,antidiabetic,and anti-tumor *** To explore the protective effect of Cor against podocyte injury in DN mice and the underlying *** Streptozotocin and a high-fat diet were combined to generate DN mice models,which were then divided into either a Cor group or a DN group(n=8 in each group).Mice in the Cor group were intraperitoneally injected with Cor(30 mg/kg/d)for 12 wk,and mice in the DN group were treated with *** analysis was used to measure the blood lipid *** and eosin staining was used to detect pathological changes in kidney *** and Western blotting were used to assess the protein expression of nephrin and *** podocyte cells(MPC5)were cultured and treated with glucose(5 mmol/L),Cor(50μM),high glucose(HG)(30 mmol/L),and HG(30 mmol/L)plus Cor(50μM).Real-time quantitative PCR and Western blotting RESULTS Compared with the control group,the DN mice models had increased fasting blood glucose,glycosylated hemoglobin,triglycerides,and total cholesterol,decreased nephrin and podocin expression,increased apoptosis rate,elevated inflammatory cytokines,and enhanced oxidative *** of the conditions mentioned above were alleviated after intervention with *** addition,Cor therapy improved SIRT1 and AMPK expression(P<0.001),inhibited reactive oxygen species and oxidative stress,and elevated autophagy in HG-induced podocytes(P<0.01).CONCLUSION Cor alleviates podocyte injury by regulating autophagy via the SIRT1-AMPK pathway,thereby exerting its protective impact on renal function in DN mice.

关键词： corilagin Podocyte injury Diabetic nephropathy Autophagy High glucose SIRT1-AMPK pathway

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corilagin对血管内皮细胞的保护作用及LOX-1蛋白表达的影响

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中成药 2012年第1期34卷 151-154页

作者：郭英陈鹏谢建平何波沈志强昆明医学院基础医学院药理教研室云南昆明650500 昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500 云南省药物研究所云南昆明650111

目的观察corilagin对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制。方法 MTT法检测corilagin对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用,免疫荧光测定LOX-1的蛋白表达。结果 corilagin对HUVEC无明显的毒性作用,Co-rilagin减弱ox-LDL对HUVEC的损... 详细信息

目的观察corilagin对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制。方法 MTT法检测corilagin对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用,免疫荧光测定LOX-1的蛋白表达。结果 corilagin对HUVEC无明显的毒性作用,Co-rilagin减弱ox-LDL对HUVEC的损伤作用,corilagin下调ox-LDL诱导的HUVEC LOX-1蛋白表达。结论 corilagin对ox-LDL损伤HUVEC具有一定的保护作用。

关键词：动脉粥样硬化 corilagin 人脐静脉血管内皮细胞氧化低密度脂蛋白氧化低密度脂蛋白受体-1

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corilagin对小鼠小胶质细胞株照射后炎性反应因子表达的抑制作用

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中华放射医学与防护杂志 2010年第6期30卷 682-686页

作者：罗鸣伍钢范丽张瑞光任精华董继华董晓荣华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室

目的研究抗炎药物corilagin抑制放射引起小胶质细胞（BV-2）炎性反应的作用及其防护的分子机制.方法细胞抑制实验（MTT）检测corilagin对BV-2细胞的抑制率;corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real... 详细信息

目的研究抗炎药物corilagin抑制放射引起小胶质细胞（BV-2）炎性反应的作用及其防护的分子机制.方法细胞抑制实验（MTT）检测corilagin对BV-2细胞的抑制率;corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real-time PCR检测小胶质细胞照射后不同时间点炎性反应因子IL-1β、TNF-α表达水平;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量;Western blot检测各组细胞核转录因子NF-κB p65蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察各组细胞标志物Iba-1的表达、NF-κB p65核转位及Nemo的表达.结果 1～10μg/ml浓度范围内corilagin对BV-2细胞增殖几乎无影响;照射后小胶质细胞表面标志物Iba-1表达明显,提示小胶质细胞激活,且炎性反应因子NO、TNF-α、IL-1β表达上调,而corilagin（5μg/ml）可以显著抑制上述炎性反应因子的表达（tIL-1β=6.341,tTNF-α=3.411,tNO=3.134,P＜0.05）;corilagin可抑制NF-κB活化蛋白Nemo,并显著抑制NF-κB p65的转位.结论 corilagin可能通过NF-κB信号转导途径抑制照射后小胶质细胞的活化,从而下调炎性反应因子表达,保护神经元.

关键词： corilagin 小胶质细胞 NF-κB 放射性脑损伤

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corilagin对HUVEC的保护作用及LOX-1 mRNA表达的影响

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时珍国医国药 2011年第10期22卷 2419-2421页

目的研究corilagin对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及LOX-1 mRNA表达的影响。方法 MTT法测定细胞吸光度值,检测corilagin对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤HUVEC的保护作用,RT-PCR测定氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的mRNA表达。结果... 详细信息

目的研究corilagin对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及LOX-1 mRNA表达的影响。方法 MTT法测定细胞吸光度值,检测corilagin对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤HUVEC的保护作用,RT-PCR测定氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的mRNA表达。结果 corilagin减弱ox-LDL对HUVEC损伤作用,下调ox-LDL诱导的HUVECLOX-1 mRNA的表达。结论 corilagin对ox-LDL损伤HUVEC具有保护作用,下调HUVEC LOX-1 mRNA的表达可能是其作用机制之一。

关键词：动脉粥样硬化 corilagin 人脐静脉血管内皮细胞氧化低密度脂蛋白氧化低密度脂蛋白受体-1

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Searching for more effective HCV NS3 protease inhibitors via modification of corilagin

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Progress in Natural Science:Materials International 2005年第10期 34-39页

作者： WANG Yue, YANG Xiaosheng, LI Zhengquan, ZHANG Wei, CHEN Lirong and XU Xiaojie (College of Chemistry and Molecular Engineering, Peking University, Beijing 100871, China The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province, Chinese Academy of Sciences, Guiyang 550002, China)

corilagin was seperated from extract of Phyllanthus urinaria L . and used as the precursor of inhibitors of hepatitis C virus (HCV) NS3 serine protease. Six derivatives were obtained through the chemical modification of corilagin and their structures were elucidated by the spectra analysis. Bioassay of these compounds showed that two of them had improved inhibitory efficiency than the precursor, with IC50 values of 2.28μmol/L and 1.52μmol/L, respectively. The binding mode of two active compounds with substrate bind ing site of HCV NS3 protease was also investigated by molecular docking method.

关键词： corilagin synthesis HCV NS3 serine protease molecular docking.

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corilagin的提取制备及其抗肿瘤作用机制研究

Corilagin的提取制备及其抗肿瘤作用机制研究

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作者：童宇星华侨大学

学位级别：硕士

珠子草（Phyllanthus niruri L.）是一种大戟科叶下珠属植物，在福建省闽南地区作为传统草药常用于乙肝病毒、恶性肿瘤、糖尿病、高血压等多种疾病的治疗。随着对珠子草化学成分研究的不断深入，人们发现柯里拉京（corilagin）为其主要... 详细信息

珠子草（Phyllanthus niruri L.）是一种大戟科叶下珠属植物，在福建省闽南地区作为传统草药常用于乙肝病毒、恶性肿瘤、糖尿病、高血压等多种疾病的治疗。随着对珠子草化学成分研究的不断深入，人们发现柯里拉京（corilagin）为其主要活性成分之一，因此，corilagin的提取制备及其药理药效学研究成为国内外药学研究者关注的热点。最新的药理药效学研究表明，corilagin除了具有显著的抗病毒作用之外，其在抑制肿瘤生长转移方面同样具有很好的作用效果。但是，迄今为止，人们对corilagin的抗肿瘤作用的研究仍然较少，对corilagin的抗肿瘤作用的分子机制更是知之甚少。鉴于此，本文从珠子草中成功提取制备出高纯度corilagin，并对其抗肿瘤活性及其作用机制方面作初步研究。本研究主要结果如下： 1．使用溶剂极性递增法对大戟科叶下珠属植物珠子草干燥全草的乙醇提取物进行萃取，得到正丁醇层萃取物。再分别应用聚酰胺、C-18反相柱、SephadexLH-20等色谱分离纯化技术，以不同比例的甲醇和乙醇溶液洗脱，分离得含量大于98%的corilagin。 2．通过MTT实验测定corilagin对人正常肝细胞株Chang-liver、人肝癌细胞株Bel-7402、SMMC7721、HepG2、MHCC97-H、人卵巢癌细胞株OC316和人胃癌细胞株SGC7901的体外抑制作用。结果表明，corilagin能显著抑制多种肿瘤细胞的生长，并对正常肝细胞的毒性很低。corilagin对人肝癌细胞株Bel-7402、SMMC7721、HepG2、MHCC97-H、人卵巢癌细胞株OC316和人胃癌细胞SGC7901的IC50值分别为15.52±4.25、14.82±1.00、18.15±3.26、18.91±4.17、24.25±2.94和21.35±2.83μg/mL，而对人正常肝细胞Chang-liver的IC50为83.35±11.99μg/mL。 3．用corilagin将人肝癌细胞株Bel-7402、 SMMC7721、 HepG2和MHCC97-H处理48h后，利用相差显微镜观察其形态变化。结果表明，corilagin能显著抑制肝癌细胞的生长，且在较低浓度（25μg/mL）就能观察到明显变化，高浓度（100μg/mL）能引起细胞大量死亡。 4．用corilagin处理肝癌细胞株SMMC7721和Bel-7402后，利用流式细胞仪检测细胞周期。当浓度为25μg/mL的corilagin作用48h后，肝癌SMMC7721和Bel-7402细胞的G2/M期分别为39.13±12.22%和29.20±0.52%，而相应不加药物的空白组的G2/M期分别为19.84±3.39%和12.60±1.79%。结果表明，corilagin使肝癌细胞周期阻滞在G2/M期。 ***-blot实验检测用corilagin处理肝癌细胞株SMMC772112h后，细胞中Cdc2/Cyclin B1和磷酸化Akt表达量的变化。结果显示，Cdc2、Cyclin B1和磷酸化Akt表达量随着corilagin剂量的增大而减少。表明，corilagin通过下调Akt磷酸化，从而抑制cyclin B1/Cdc2信号通路，导致肝癌细胞SMMC7721阻滞在G2/M期，从而达到抑制肿瘤细胞生长的效果。综上所述，本文从珠子草中可提取制备出纯度较高的corilagin，其对多种癌细胞具有明显的抑制作用，并通过调控细胞信号通路蛋白的表达，将癌细胞的细胞周期阻滞在G2/M期。

关键词： corilagin 提取制备抗肿瘤作用机制

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corilagin抑制照射后BV-2细胞炎症因子表达的体外研究

Corilagin抑制照射后BV-2细胞炎症因子表达的体外研究

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作者：罗鸣华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】研究抗炎药物corilagin抑制放射引起小胶质细胞(BV-2)炎症反应的作用及其防护的分子机制。【方法】细胞抑制实验(MTT)检测corilagin对BV-2细胞抑制率;corilagin预处理小胶质细胞,12 h后以0和32Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real... 详细信息

【目的】研究抗炎药物corilagin抑制放射引起小胶质细胞(BV-2)炎症反应的作用及其防护的分子机制。【方法】细胞抑制实验(MTT)检测corilagin对BV-2细胞抑制率;corilagin预处理小胶质细胞,12 h后以0和32Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real-time PCR检测小胶质细胞照射后不同时间点炎症因子IL-1β、TNF-α表达水平;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western-blot检测各组细胞核转录因子NF-κB p65蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察各组细胞标志物Iba-1的表达、NF-κB p65核转位及Nemo的表达。【结果】10μg/mL浓度范围内corilagin对BV-2细胞增殖几乎无影响;照射后小胶质细胞表面标志物Iba-1表达明显,提示小胶质细胞激活,且炎症因子NO、TNF-α、IL-1β表达上调,而corilagin(5μg/mL)可以显著抑制上述炎症因子的表达(tIL-1β=6.341,Pcorilagin可抑制NF-κB活化蛋白Nemo,并显著抑制NF-κB p65的转位。【结论】corilagin可能通过抑制途径照射后小胶质细胞NF-κB信号转导的活化,从而下调炎症因子表达,保护神经元。

关键词： corilagin 小胶质细胞 NF-κB 放射性脑损伤

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corilagin对小型猪动脉粥样硬化及斑块组织ICAM-1和VCAM-1表达的影响

Corilagin对小型猪动脉粥样硬化及斑块组织ICAM-1和VCAM-1表达的...

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作者：张景仪昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]研究corilagin对小型猪动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的治疗作用,观察corilagin对AS斑块组织ICAM-1和VCAM-1 mRNA和蛋白表达的调控作用,为corilagin应用于AS治疗提供理论和实验依据。[方法]1.球囊损伤联合高脂高胆固醇饲料... 详细信息

[目的]研究corilagin对小型猪动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的治疗作用,观察corilagin对AS斑块组织ICAM-1和VCAM-1 mRNA和蛋白表达的调控作用,为corilagin应用于AS治疗提供理论和实验依据。[方法]1.球囊损伤联合高脂高胆固醇饲料饲喂,复制小型猪AS模型。2.油红O染色观察AS小型猪颈总动脉斑块和脂质堆积,苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察AS小型猪颈总动脉形态学变化。3.全自动生化分析仪对血清甘油三酯（triglyceride,TG）、胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low dengsity lipoprotein cholesterol,LDL-C）以及高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）进行检测。4.实时荧光定量（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测corilagin对小型猪AS斑块中ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达的影响。5.免疫组织化学和Western blot检测不同剂量corilagin对小型猪AS斑块中ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平的影响。[结果]1.组织病理学结果显示,颈总动脉出现明显AS病理改变,血管内膜增厚,脂质斑块明显,内、中膜可见空染泡沫细胞,提示AS模型复制成功。2.血脂检测结果显示,与假手术组比较,AS模型动物血清TC、TG和LDL-C明显升高,HDL-C明显降低;与AS模型组比较,corilagin三个剂量组均能降低动物血清TC、TG和LDL-C,但对HDL-C无明显影响。3.给药12周后,与AS模型组相比,corilagin高、中剂量组和辛伐他汀阳性对照组病灶明显改善,脂质斑块及泡沫细胞减少。***-qPCR结果显示,corilagin高、中剂量组能够明显下调小型猪AS斑块中ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 表达。*** blot结果显示,corilagin高、中剂量组能明显下调小型猪AS斑块中ICAM-1和VCAM-1蛋白表达。6.免疫组织化学结果显示,与假手术组比较,AS模型组动物颈总动脉斑块中ICAM-1和VCAM-1的阳性表达增强,IPP平均光密度明显增高;与AS模型组比较,corilagin高、中剂量组颈总动脉中ICAM-1和VCAM-1的阳性表达减弱,IPP平均光密度明显降低。[结论]***对AS小型猪有明显治疗作用,可改善小型猪动脉粥样硬化程度,减轻血管内膜损伤,降低TC、TG和LDL-C,且存在量效关系。***明显下调小型猪AS斑块中ICAM-1和VCAM-1 mRNA和蛋白的表达。

关键词： corilagin 动脉粥样硬化小型猪细胞间黏附分子-1 血管细胞黏附分子-1

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corilagin对RAW264.7细胞CD40-CD40L信号通路的调控作用研究

Corilagin对RAW264.7细胞CD40-CD40L信号通路的调控作用研究

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作者：李燕昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]研究corilagin对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7增殖和泡沫化的影响,测定CD40、CD40L、肿瘤坏死因子受体相关因子-1（tumor necrosis factor receptor-associated factor-1,TRAF-1）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）)、γ-干扰素（γ-interferon,IFN-y）的 mRNA及蛋白表达的水平,探索 corilagin对CD40-CD40L信号通路的调控作用机制。[方法]1.体外培养小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7,CCK-8法测定不同浓度LPS（0.4μ/mL、0.6μg/mL、0.8μg/mL、1.0μg/mL、1.2μg/mL）作用不同时间（12h、24h、48h）对RAW264.7细胞活性的影响,确定LPS最佳诱导浓度和时间。2.实验分组:正常对照组、LPS损伤模型组、阳性对照组（辛伐他汀10μmol/L）、corilagin 不同剂量组（6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50μmol/L、1 00μmol/L）,DRI-C21045（CD40-CD40L 信号通路抑制剂）组,DRI-C21045+corilagin100μmol/L 组。***-8 法测定 corilagin 不同剂量（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞增殖的影响,并绘制剂量反应曲线,得到IC50。4.油红O法和胆固醇试剂盒测定corilagin不同剂量（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）对 LPS 诱导损伤的 RAW264.7 细胞泡沫化的影响。5.实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、iNOS 和 IFN-γ的mRNA表达。*** blot 检测 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、iNOS 和IFN-γ的蛋白表达。7.免疫荧光方法检测RAW264.7细胞中CD40、CD40L和TRAF-1的蛋白表达。[结果]1.1.0μg/mL的LPS作用24h对RAW264.7细胞的促增殖作用最明显,1.0μg/mL的LPS为最适诱导浓度,24h为最适诱导时间。***对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞增殖有抑制作用,其IC50为41.25μmol/L。***对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞泡沫化有抑制作用。***-qPCR结果显示:与正常对照组比较,LPS损伤模型组CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的 mRNA 表达增强,iNOS 的 mRNA 表达减弱;与 LPS损伤模型组比较,阳性对照组、corilagin 25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的 mRNA 表达减弱,iNOS 的 mRNA 表达增强,而 corilagin 6.25μmol/L、12.5μmol/L 组与模型组比较无明显差异（P＞0.05）。*** blot结果显示:与正常对照组比较,LPS损伤模型组CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、IFN-γ的蛋白表达增强,iNOS的蛋白表达减弱;与LPS损伤模型组比较,阳性对照组、corilagin 25μmol/L 组、50μmol/L 组、100μmol/L组 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的蛋白表达减弱,iNOS的蛋白表达增强,而corilagin 6.25μmol/L、12.5μmol/L组与模型组比较无明显差异（P＞0.05）。6.免疫荧光结果显示:与正常对照组比较,模型组CD40、CD40L、TRAF-1的表达增强;与模型组比较,阳性对照组、corilagin100μmol/L组RAW264.7细胞中CD40、CD40L、TRAF-1的表达减弱。[结论]***能明显抑制LPS诱导损伤的RAW264.7细胞的异常增殖和泡沫化。*** 能下调 LPS 诱导损伤的 RAW264.7 细胞 CD

关键词： corilagin 巨噬细胞 LPS 增殖泡沫化 CD40-CD40L信号通路

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