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理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜屏障IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的影响

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中国实验动物学报 2023年第2期31卷 217-224页

作者：杜青李心亮曾宏亮徐琳本谢芳一湖南省中医药研究院长沙410006 长沙市第四医院长沙410006

目的探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.... 详细信息

目的探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.24 g/kg),每组8只;另选8只正常大鼠作为空白组。连续给药14 d,造模结束后可见大鼠体重减轻,精神倦怠、眯眼聚堆、少动,大便质地偏软或者便溏,肛周污秽,提示模型复制成功。采用比色法检测血清淀粉酶和D-木糖水平,阿利新蓝和过碘酸雪夫(AB-PAS)染色检测结肠黏膜形态结构,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测黏蛋白2(MUC2)和水通道蛋白3/4(AQP3、AQP4)的表达,免疫荧光法检测结肠组织claudin-2蛋白表达,实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测白介素-22(IL-22)和肠黏膜上皮跨膜蛋白2(claudin-2)基因相对表达量(2-ΔΔCt值)。结果与空白组比较,模型组大鼠稀便率、稀便级和腹泻指数显著增加,结肠组织黏膜层上皮细胞出现不同程度的萎缩,黏膜表面结构疏松水肿,杯状细胞减少,血清淀粉酶和D-木糖含量减少,结肠组织中MUC2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对降低,IL-22 mRNA表达量相对减少和claudin-2 mRNA表达量相对增加,claudin-2蛋白荧光强度明显增强(P2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对升高,IL-22 mRNA表达量相对增加,claudin-2 mRNA和claudin-2蛋白表达量相对减少,差异具有统计学意义(P22-MUC2/claudin-2信号通路有关。

关键词：理中丸脾虚型腹泻黏膜屏障水通道蛋白3/4 白介素-22 claudin-2

claudin-2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对KYSE-450细胞恶性生物学行为的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年第5期28卷 482-488页

作者：尚晋文贾培君张丽亚张成娟郑州大学附属肿瘤医院暨河南省肿瘤医院生物样本中心河南郑州450003

目的:分析claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治... 详细信息

目的:分析claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治的ESCC患者手术切除肿瘤组织52例及其中20例对应的癌旁组织标本,采用免疫组化和WB法检测claudin-2的表达并分析其与患者临床病理特征和5年生存率的关系。WB法检测ESCC细胞(KYSE450、KYSE150、KYSE510、KYSE140)和人永生化食管上皮细胞SHEE中claudin-2的表达,构建claudin-2 shRNA慢病毒载体并转染KYSE450细胞构建敲低claudin-2表达的细胞系,进一步通过克隆形成实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测敲低claudin-2对KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:ESCC组织中claudin-2阳性率显著高于癌旁组织(Pclaudin-2的表达与淋巴结转移有关(Pclaudin-2表达阳性患者5年生存率显著低于阴性者(Pclaudin-2表达的KYSE450细胞系。sh-claudin-2组细胞的克隆形成数、伤口愈合率和侵袭细胞数均显著低于sh-NT组和对照组(Pclaudin-2的表达高于癌旁组织,且与患者5年生存率呈负相关,claudin-2能够增强KYSE450细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词：食管鳞癌 claudin-2 KYSE450细胞增殖侵袭

溃结灵IV号对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响

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临床医学进展 2022年第2期12卷 838-845页

作者：宋宁宁程丽敏宋晓霞黄爱凤黑龙江中医药大学附属第一医院肛肠科黑龙江哈尔滨

目的:观察溃结灵IV号保留灌肠对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:实验于2015年6~8月在哈尔滨工业大学生命科学与工程学院实验室进行... 详细信息

目的:观察溃结灵IV号保留灌肠对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:实验于2015年6~8月在哈尔滨工业大学生命科学与工程学院实验室进行。SD大鼠60只,留取10只作为空白对照(BC)组,其余大鼠利用TNBS溶液灌肠法诱导制作UC大鼠模型,造模后随机分为模型对照(MC)组,溃结灵IV号低剂量(LD)组、中剂量(MD)组、高剂量(HD)组和阳性对照组美沙拉嗓(PC)组。HD、MD、LD组分別采用溃结灵IV号高(40 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg) 3个剂量保留灌肠给药,PC组使用美沙拉嗪(0.4 g/kg)进行灌肠给药,BC组及MC组给等体积的蒸馏水,检测大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达,观察溃结灵IV号保留灌肠对TNBS诱导的UC大鼠结肠组织的影响。结果:1) 闭合蛋白-2 (claudin-2),mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(Cldn2 244 bp)。结果表明溃结灵IV号高剂量、中剂量组及美沙拉嗪组claudin-2的mRNA表达明显增强,与空白组的表达接近,甚至略强于空白组的表达,模型组、溃结灵IV号高低剂量组claudin-2的mRNA略有的表达,表达不明显。2) 细胞粘附分子-1 (intercellular adhesion molecule, ICAM-1) mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(ICAM-1 211 bp)。结果表明正常组ICAM-1的mRNA表达不明,美沙拉嗪组ICAM-1的mRNA表达较正常组弱,溃结灵IV号高剂量、中剂量、低剂量及模型组ICAM-1的mRNA表达明显增强,明显高于空白组的表达。3) TLR2 (toll样受体2, Toll-like receptors 2) mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(TLR2 246 bp)。结果表明正常组TLR2的mRNA表达较弱,美沙拉嗪组、溃结灵IV号高剂量、中剂量组TLR2的mRNA表达较模型组和溃结灵IV号低剂量组明显减弱,模型组和溃结灵IV号低剂量组TLR2的mRNA表达明显增强,明显高于正常组的表达。

关键词：溃结灵IV号 claudin-2 ZO-1 ICAM-1 TLR2 美沙拉嗪

35kDa透明质酸调控蛋白ZO-1和claudin-2治疗新生小鼠坏死性结肠炎

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解剖科学进展 2023年第1期29卷 106-108,112页

作者：李天如张颖马明霞谈宁青海省妇女儿童医院感染消化科青海西宁810007 辽宁科技学院创新创业教研室辽宁本溪117004

目的探讨35kDa透明质酸对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响及可能机制。方法新生8日龄的C57BL/6J小鼠30只随机分为对照组、NEC模型组与NEC+HA35组,每组10只,建模3d后处死。HE染色观察各组小鼠肠组织病理学改变;酶联免疫吸附实验检... 详细信息

目的探讨35kDa透明质酸对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响及可能机制。方法新生8日龄的C57BL/6J小鼠30只随机分为对照组、NEC模型组与NEC+HA35组,每组10只,建模3d后处死。HE染色观察各组小鼠肠组织病理学改变;酶联免疫吸附实验检测各组小鼠血清炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平;蛋白免疫印迹法检测各组小鼠肠组织中紧密连接蛋白ZO-1和claudin-2的表达;实时荧光定量PCR检测各组小鼠肠组织中ZO-1 mRNA和claudin-2 mRNA的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠血清IL-6和TNF-α的表达水平明显升高,肠组织中ZO-1和claudin-2的表达明显下调(Pclaudin-2的表达(Pclaudin-2的表达相关。

关键词：透明质酸35kDa 坏死性小肠结肠炎 ZO-1 claudin-2

慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜Occludin及claudin-2表达的影响

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中国组织工程研究 2020年第32期24卷 5186-5191页

作者：李思宇王庆松西南交通大学医学院四川省成都市610031 西部战区总医院神经内科四川省成都市610083

背景:前期研究发现,慢性脑低灌注可致大鼠肠道黏膜屏障发生改变,而闭合蛋白occludin及claudin是构成肠道黏膜屏障的重要组成部分。目的:探讨慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜屏障的影响。方法:20只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术... 详细信息

背景:前期研究发现,慢性脑低灌注可致大鼠肠道黏膜屏障发生改变,而闭合蛋白occludin及claudin是构成肠道黏膜屏障的重要组成部分。目的:探讨慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜屏障的影响。方法:20只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术和慢性脑低灌注组。慢性脑低灌注组通过永久结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注模型;假手术组双侧颈总动脉只分离而不结扎和剪断。术后4周通过苏木精-伊红染色观察大鼠回肠组织形态学变化并评分,TUNEL荧光染色检测回肠细胞凋亡情况,Westernblot检测回肠紧密连接蛋白claudin-2,Occludin的表达水平,免疫组织化学检测Occludin表达变化。实验方案经西部战区总医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①苏木精-伊红染色形态学观察显示,与假手术组相比,慢性脑低灌注组大鼠回肠组织形态结构出现损伤不明显,病理评分无显著升高(P>0.05);②Western blot结果显示,与假手术组相比,慢性脑低灌注组大鼠回肠组织claudin-2表达升高,而Occludin表达降低(Pclaudin-2升高,可能存在一定肠道黏膜屏障功能损伤。

关键词：脑卒中慢性脑低灌注 claudin-2 Occludin 肠黏膜屏障动物模型

claudin-1、2、3、4在胃癌中的表达

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广东医学 2013年第5期34卷 760-763页

作者：刘志勇欧阳忠赣南医学院第一附属医院血管乳腺科江西赣州341100

目的探讨claudin-1、claudin-2、claudin-3及claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其他肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中claudin-1、claudin-2、claudin-3... 详细信息

目的探讨claudin-1、claudin-2、claudin-3及claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其他肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中claudin-1、claudin-2、claudin-3和claudin-4的表达。结果 claudin-2的表达率为73.6%,claudin-4的表达率为44.4%。claudin-1在腺癌中的表达水平明显降低,claudin-3、claudin-4在淋巴转移阳性中的表达更低,claudin-3在T3、T4中的表达明显降低。claudin-3与其他claudin蛋白质具有显著相关性。在生存分析里,claudin-4与良好的预后有关。结论 claudin-3与claudin-4可以作为胃癌的分子标志物,检测claudin-3与claudin-4在淋巴侵袭中具有重要意义。

关键词：胃癌 claudin-1 claudin-2 claudin-3 claudin-4

claudin-2蛋白在食管鳞癌中的表达及其对细胞功能的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年

作者：尚晋文贾培君张丽亚张成娟郑州大学附属肿瘤医院暨河南省肿瘤医院生物样本中心

目的：分析claudin2在食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinomas， ESCC）组织中的表达及其与临床病理特征、5年生存率的关系，探索其对ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭影响。方法：通过食管癌细胞系和正常食管上皮细胞检测claudin-2... 详细信息

目的：分析claudin2在食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinomas， ESCC）组织中的表达及其与临床病理特征、5年生存率的关系，探索其对ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭影响。方法：通过食管癌细胞系和正常食管上皮细胞检测claudin-2的表达情况，同时选取ESCC患者手术切除的肿瘤组织52例及其中20例癌旁组织，应用免疫组化和Western blot检测claudin-2的表达并分析其与临床病理特征和5年生存的关系。构建claudin-2 shRNA 慢病毒载体，在KYSE-450细胞系中敲低claudin-2的表达，进一步通过克隆形成实验、细胞划痕实验及Transwell探讨claudin2对细胞功能的影响。结果：ESCC组织的claudin-2阳性率高于癌旁组织（P＜0.05），ESCC组织的claudin-2表达与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤分化程度、肿瘤最大径、TNM分期、吸烟史、饮酒史无相关性（P＞0.05），与淋巴结转移相关（Pclaudin-2表达相关（P＜0.05），claudin-2表达阳性者5年生存率低于阴性者（P＜0.05）。sh-claudin-2组和sh-NT组细胞均有绿色荧光，sh-claudin2组细胞的claudin-2表达低于sh-NT组和对照组。sh-claudin-2组细胞形成的克隆数、伤口愈合百分比、侵袭细胞均低于sh-NT组和对照组（P＜0.05）。结论：ESCC组织claudin-2表达高于癌旁组织，与患者5年生存率呈负相关，claudin-2能够促进ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：食管鳞癌 claudin-2 增殖侵袭

claudin-2在胆固醇结石形成过程中的作用及其机制研究

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胃肠病学 2019年第11期24卷 667-670页

作者：陈跃冯亚东赵向阳南京市溧水区人民医院消化科(东南大学附属中大医院溧水分院) 211200 东南大学附属中大医院消化科

背景:claudin蛋白家族是构成细胞紧密连接的重要分子,其中claudin-2是一种在肝细胞和胆管细胞中高表达的细胞旁通道形成蛋白,具有水分子和阳离子的选择渗透性,在消化和泌尿系统中发挥至关重要的生理调控作用。目的:探讨claudin-2在胆固... 详细信息

背景:claudin蛋白家族是构成细胞紧密连接的重要分子,其中claudin-2是一种在肝细胞和胆管细胞中高表达的细胞旁通道形成蛋白,具有水分子和阳离子的选择渗透性,在消化和泌尿系统中发挥至关重要的生理调控作用。目的:探讨claudin-2在胆固醇结石形成和胆汁分泌过程中的作用及其机制。方法:收集claudin-2基因敲除(Cldn-2-/-)小鼠和野生型(Cldn-2+/+)小鼠的肝脏和胆囊组织,以蛋白质印迹法检测claudin蛋白家族的表达,HE染色、免疫荧光染色和电镜观察敲除claudin-2基因对肝脏和胆囊组织结构的影响。并分析claudin-2蛋白对胆汁成分和流速的调控作用。结果:claudin家族蛋白在Cldn-2+/+小鼠肝脏和胆囊组织中高表达。与Cldn-2+/+小鼠相比,Cldn-2-/-小鼠肝脏和胆囊组织结构无明显差异,胆汁流速明显降低(Pclaudin-2蛋白通过调控胆汁成分和细胞紧密连接中的水分子旁分泌过程,影响胆汁的形成,这一过程的失调显著增加了小鼠对胆固醇结石相关疾病的易感性。

关键词：胆固醇结石 claudin-2 小鼠,基因敲除胆汁

claudin-2蛋白在食管鳞癌中的表达及其对细胞功能的影响

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Claudin-2蛋白在食管鳞癌中的表达及其对细胞功能的影响

作者：尚晋文郑州大学

学位级别：硕士

背景:食管癌是临床常见的恶性肿瘤之一,在全球范围内食管癌的发病率在恶性肿瘤中居第8位,死亡率为第6位。食管癌早期症状不典型,具有易局部浸润及淋巴结转移的特点,总体5年生存率不足20%。claudin蛋白家族是上皮细胞紧密连接组成分子之... 详细信息

背景:食管癌是临床常见的恶性肿瘤之一,在全球范围内食管癌的发病率在恶性肿瘤中居第8位,死亡率为第6位。食管癌早期症状不典型,具有易局部浸润及淋巴结转移的特点,总体5年生存率不足20%。claudin蛋白家族是上皮细胞紧密连接组成分子之一,由27个成员组成。许多研究表明不同亚型的claudin在不同的组织和细胞中表达,并且与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。探索claudin-2在食管癌中的表达及其在细胞中的功能将为揭示肿瘤的发生发展提供新的理论依据。目的:研究分析claudin-2在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织和细胞中的表达,分析其与临床病理特征和5年生存率的关系,探究claudin-2在ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭中的作用。方法:1、选取郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)2010年2月—2017年11月间行食管癌根治术的127例初治ESCC患者的组织及癌旁样本,所有病例术前未接受过放化疗,并对患者进行跟踪随访。2、用免疫组织化学方法检测ESCC石蜡组织样本中claudin-2的表达情况,应用Western blot检测新鲜组织样本、人ESCC细胞、人永生化正常食管上皮细胞以及转染敲低claudin-2的ESCC细胞中claudin-2蛋白的表达。3、利用慢病毒载体psh RNA-EF1-EGFP-P2A-Puro感染人食管癌细胞KYSE450,构建claudin-2下调干预的稳转细胞系。设置claudin-2 sh RNA慢病毒组(sh-claudin-2)、空病毒组(sh-NT组)和空白对照组(未感染的KYSE450细胞)。4、采用克隆形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验,检测敲低claudin-2的表达对ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭功能的影响。5、采用x检验或Fisher确切概率法分析claudin-2的表达与ESCC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier方法、Log-Rank检验分析比较Cluadin-2表达与5年生存期的关系,应用单因素和多因素COX比例风险回归分析影响ESCC预后的危险因素。应用单因素方差分析实验数据的统计学差异。结果:1、ESCC组织中claudin-2蛋白表达于细胞质和细胞膜,claudin-2的表达高于癌旁组织(Pclaudin-2的阳性表达与淋巴结转移相关(Pclaudin-2表达阳性组患者的5年生存率低于claudin-2表达阴性组(Pclaudin-2的阳性表达(P=0.022)是独立的预后不良因素。3、ESCC细胞系KYSE450中claudin-2的表达高于人永生化食管上皮细胞(P80%。sh-claudin-2组claudin-2的表达低于sh-NT组和空白对照组(Pclaudin-2组细胞形成的克隆数(44.00±9.54)低于sh-NT组(167.33±6.66)和空白对照组(167.00±3.00)(Pclaudin-2组细胞伤口愈合百分比(23.33±5.77)低于sh-NT组(51.33±8.08)和空白对照组(54.17±7.22)(Pclaudin-2组(61.67±7.64)的侵袭细胞少于sh-NT组(134.00±5.29)和空白对照组(134.00±6.25)(Pclaudin-2的表达高于癌旁组织,且与淋巴结转移呈正相关,与ESCC患者五年生存呈负相关。分化程度及claudin-2表达是独立的预后不良因素。2、敲低claudin-2的表达可以抑制人ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。提示claudin-2参与了ESCC的发生发展过程,有可能成为ESCC潜在的预后指标、治疗靶点及肿瘤标记物。

关键词：食管鳞癌 claudin-2 增殖迁移侵袭肿瘤标记物