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circhipk3通过调控p53-Akt-Mdm2通路影响食管鳞癌的恶性表型

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肿瘤防治研究 2019年第11期46卷 987-993页

作者：苟云久马继龙韩松辰金大成陈猛王兵柏启州甘肃省人民医院胸外科

目的研究食管鳞癌组织中circhipk3的表达差异,以寻找食管鳞癌诊断和靶向治疗的新思路。方法qRT-PCR、CCK-8法、Transwell法和流式细胞术检测circhipk3在食管鳞癌和癌旁组织中的表达差异以及其对细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响;生物... 详细信息

目的研究食管鳞癌组织中circhipk3的表达差异,以寻找食管鳞癌诊断和靶向治疗的新思路。方法qRT-PCR、CCK-8法、Transwell法和流式细胞术检测circhipk3在食管鳞癌和癌旁组织中的表达差异以及其对细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响;生物信息数据分析确定circhipk3的可能作用通路,Western blot对其通路相关功能蛋白加以验证。结果11例患者的癌组织和对应的7例癌旁组织中circhipk3表达异常(P=0.027);circhipk3高表达的细胞增殖(Pcirchipk3过表达的EC9706细胞凋亡受到抑制,抑癌基因p53被明显抑制,而Akt-Mdm2信号通路处于激活状态,p53-Akt-Mdm2通路蛋白的表达量随之增加,最终导致癌细胞增殖、迁移、侵袭以及相关癌症蛋白的表达增加。结论circhipk3可能通过调节p53-Akt-Mdm2信号通路促进人食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,其可能是食管鳞癌诊断和治疗的潜在靶点。

关键词：食管鳞癌 circhipk3 信号通路 MDM2

环状RNA circhipk3通过miR-379调控IGF1表达促进非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299与NCI-H2170的细胞增殖

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中国肺癌杂志 2017年第7期20卷 459-467页

作者：田芳王云肖哲朱学军厦门大学生命科学科学院细胞应激生物学国家重点实验室厦门361000 南京中医药大学附属江苏省中医院呼吸科南京210029

背景与目的已有的研究证明:环状RNA是一类在哺乳动物中普遍存在的具有稳定闭合环状结构的内源性RNA分子。环状RNA circhipk3(circular RNA HIPK3,circhipk3)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达水平较高,促进肝癌细胞生长... 详细信息

背景与目的已有的研究证明:环状RNA是一类在哺乳动物中普遍存在的具有稳定闭合环状结构的内源性RNA分子。环状RNA circhipk3(circular RNA HIPK3,circhipk3)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达水平较高,促进肝癌细胞生长。但是其在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用及其调控机制尚无文献报道。本研究拟探讨环状RNA circhipk3对NSCLC细胞系NCI-H1299和NCI-H2170细胞增殖的影响,并进一步研究其调控的分子机制。方法 Real-time PCR法检测circhipk3在NSCLC各细胞系中的表达水平。CCK-8实验和克隆形成实验检测过量表达和干扰circhipk3对细胞增殖的影响。双荧光素酶报告基因实验分别检验miR-379与circhipk3及miR-379与IGF1 m RNA的结合情况。Western blot和ELISA检测细胞内外的IGF1蛋白表达水平。结果环状RNA circhipk3在6株NSCLC细胞株中均有表达,其中H1299表达最低,H2170表达最高,通过转染过表达的circhipk3可显著促进NCI-H1299细胞增殖,干扰circhipk3可显著抑制NCI-H2170细胞增殖。miR-379可与circhipk3及IGF1 m RNA直接结合。过表达circhipk3导致IGF1表达量上调,干扰circhipk3能够下调IGF1表达水平,转入miR-379 mimics恢复了circhipk3稳转细胞株IGF1表达水平的上调及细胞增殖表型。结论环状RNA circhipk3在NSCLC细胞系NCI-H1299及NCI-H2170中可通过miR-379调控IGF1表达促进细胞增殖,环状RNA circhipk3可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。

关键词：肺肿瘤环状RNA circhipk3 增殖

circhipk3促进鼻咽癌细胞5-8F迁移和侵袭的机制

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安徽医科大学学报 2023年第8期58卷 1346-1353页

作者：邵文婷吕磊高劲皖南医学院研究生学院芜湖240001 中国科学技术大学附属第一医院西区肿瘤表观遗传学实验室合肥230031 中国科学技术大学附属第一医院西区放射治疗科合肥230031

目的探讨环状RNA HIPK3(circhipk3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制。方法检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circhipk3表达水平;合成circhipk3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR... 详细信息

目的探讨环状RNA HIPK3(circhipk3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制。方法检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circhipk3表达水平;合成circhipk3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR、Western blot、细胞划痕、CCK-8和Transwell等实验方法,研究确定circhipk3-siRNA干扰效果后,检测它对细胞增殖、迁移和侵袭及潜在下游基因CDH1、CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响。运用转录组测序技术分析5-8F细胞circhipk3-siRNA干扰后显著差异表达的基因,以期找到介导circhipk3促癌作用的关键基因。结果与非癌组织相比,NPC组织中circhipk3表达明显增加(Pcirchipk3的表达后,与对照组相比,si-circhipk3组细胞增殖速率降低(Pcirchipk3组细胞划痕闭合率降低(Pcirchipk3组细胞迁移和侵袭的细胞数目减少(Pcirchipk3组下游基因CDH1 mRNA和蛋白的表达量升高(P3 mRNA和蛋白的表达量减少(Pcirchipk3-siRNA转染的5-8F细胞中AL645922.1、SCO_(2)、AL136295.1和ISY1-RAB43表达上调(P38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达下调(Pcirchipk3表达显著升高。circhipk3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进NPC细胞5-8F的增殖、迁移和侵袭。AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circhipk3介导的促进NPC 5-8F细胞迁移和侵袭中发挥关键作用。

关键词： circhipk3 5-8F细胞鼻咽癌迁移和侵袭转录组测序

人脐带间充质干细胞来源的外泌体通过circhipk3促进心梗修复

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复旦学报（自然科学版） 2020年第1期59卷 40-47页

作者：张雨晴王燕丽严兵张瑜谢文萍刘冯李杨欣苏州大学心血管病研究所江苏苏州215000 苏州大学附属第一医院心脏大血管外科江苏苏州215006

为了探究人脐带间充质干细胞(UMSC)来源的外泌体(exosome)能否通过递送circhipk3修复梗死后的心脏及其作用机制,我们通过手术结扎法建立C57BL/6小鼠心肌梗死模型,同时根据circhipk3接头处序列,设计3组siRNA,之后分别将PBS、exosome、si-... 详细信息

为了探究人脐带间充质干细胞(UMSC)来源的外泌体(exosome)能否通过递送circhipk3修复梗死后的心脏及其作用机制,我们通过手术结扎法建立C57BL/6小鼠心肌梗死模型,同时根据circhipk3接头处序列,设计3组siRNA,之后分别将PBS、exosome、si-circhipk3 exosome移植到小鼠缺血心脏中,通过心超、Masson染色等方法对小鼠心脏恢复及纤维化程度进行检测.同时通过低氧无血清处理大鼠心肌细胞(H9C2)来构建体外凋亡模型,进一步探究circhipk3对心肌细胞凋亡的影响.结果发现si-circhipk3 exosome处理组与exosome处理组相比,小鼠心脏左心室射血分数(EF)和缩短分数(FS)均显著降低,梗死区域纤维化程度更加显著.同时,体外TUNEL染色和流式细胞检测结果表明,相较于exosome共培养组,si-circhipk3 exosome共培养组的H9C2细胞凋亡发生率显著升高.由此表明circhipk3可以显著抑制缺血环境下心肌细胞凋亡的发生,促进心梗修复,为临床治疗提供了很好的借鉴思路.

关键词：人脐带间充质干细胞外泌体 circhipk3 凋亡心肌梗死

circhipk3在肾透明细胞癌中的抑癌功能研究及机制初探

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CircHIPK3在肾透明细胞癌中的抑癌功能研究及机制初探

作者：李浩民暨南大学

学位级别：硕士

背景:肾细胞癌（Renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）是最常见的肾细胞癌类型,其发病机制未明。环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类首尾共价结合呈环... 详细信息

背景:肾细胞癌（Renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）是最常见的肾细胞癌类型,其发病机制未明。环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类首尾共价结合呈环状的非编码RNA分子,随着高通量测序技术的发展,大量的circ RNA在不同的物种和细胞中被发现,目前关于circ RNA在肾透明细胞癌中发病及进展中的作用尚未可知。方法1.首先对3组人肾透明细胞癌组织及配对癌旁组织进行环状RNA高通量测序,生物信息学分析筛选候选的circ RNA。2.选取表达量高,同时有表达差异的circ HIPK3进行下一步研究,随后在扩大临床组织样本及肾透明细胞癌细胞进行验证,接着用慢病毒构建稳定circ HIPK3过表达细胞模型。3.划痕实验、Transwell、CCK-8和Ed U检测细胞迁移、侵袭和增殖能力。裸鼠皮下移植瘤模型检测circ HIPK3对体内肿瘤生长的影响。最后通过对比mi Randa数据库预测可与circ HIPK3结合的micro RNA（mi RNA）,初步探讨circ HIPK3可能的机制途径。结果*** RNA高通量测序共检测出1184个circ RNA表达差异较为明显（FC≥2,P＜0.05）,其中有694个circ RNA在肾透明细胞癌组织中表达下调,490个circ RN表达上调。2.q RT-PCR检测发现circ HIPK3在肾透明细胞癌大样本组织中明显低表达;同时circ HIPK3在4种肾透明细胞系中也是明显低表达。转染过表达质粒后,ACHN和Caki-1细胞中circ HIPK3的表达水平均明显升高。3.划痕、Transwell、CCK-8和Ed U实验显示,过表达circ HIPK3后ACHN和Caki-1细胞的侵袭、迁移和增殖能力明显下降;裸鼠皮下移植瘤模型显示,过表达circ HIPK3可明显肾透明细胞癌移植瘤的生长;circ Base数据库对比预测了95个能与circ HIPK3结合的mi RNA。结论1.肾透明细胞癌组织中存在有大量差异表达的circ RNA,大部分为外显子来源。2.与正常的肾组织和肾小管上皮细胞相比,circ HIPK3在肾透明细胞癌组织和细胞中的表达均明显下调。3.过表达circ HIPK3可明显抑制肾透明细胞癌细胞的侵袭、迁移和增殖能力,可能作为mi RNA海绵在肾透明细胞癌中可能发挥着抑癌作用。

关键词：肾透明细胞癌高通量测序环状RNA circhipk3 miRNA

circhipk3调控P53-Akt-Mdm2通路影响食管鳞癌增殖和发展的试验研究

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CircHIPK3调控P53-Akt-Mdm2通路影响食管鳞癌增殖和发展的试验研究

作者：马继龙甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:食管癌是一种高发病率和死亡率的疾病,临床上晚期食管癌5年总体生存率低于15%,早期食管癌患者的存活率却超过80%。但早期食管癌很难发现和诊断。本研究试图通过对食管癌组织中circhipk3的研究,进一步了解circhipk3与食管癌发生的关... 详细信息

目的:食管癌是一种高发病率和死亡率的疾病,临床上晚期食管癌5年总体生存率低于15%,早期食管癌患者的存活率却超过80%。但早期食管癌很难发现和诊断。本研究试图通过对食管癌组织中circhipk3的研究,进一步了解circhipk3与食管癌发生的关系,以期在食管癌的诊断和靶向治疗上寻找新的思路。方法:本研究收集了11例患者癌组织和癌旁组织的临床标本,以癌组织为实验观察组,癌旁组织为空白对照组,对所有观察组和对照组的组织样本实时定量PCR检测;慢病毒载体转染EC9706细胞株,分别构建了circhipk3高表达组、高表达对照组、低表达组和低表达对照组四组实验组和对照组细胞,然后对各组细胞分别使用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术检测circhipk3对细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响;最后使用生信分析的方法确定circhipk3的可能作用通路,使用western blot对其通路相关功能蛋白加以验证。结果:11例患者的癌组织和相对应的癌旁组织行实时定量PCR,结果显示其中11例癌组织和以及7例癌旁组织circhipk3表达异常(P=0.027);circhipk3高表达的细胞增殖(Pcirchipk3过表达的EC9706细胞凋亡受到抑制,低表达则对凋亡起促进作用;高表达的circhipk3细胞内的抑癌基因p53被明显抑制,而细胞内的AKT-Mdm2信号通路则处于激活状态,P53-Akt-Mdm2通路蛋白的表达量随之增加,最终导致癌细胞的生理过程包括增殖,迁移和侵袭以及相关癌症蛋白的表达增加,癌细胞的相关功能增强;反之,低表达的circhipk3则对癌症细胞的功能有抑制作用。结论:我们的研究结果发现circhipk3促进人食管癌细胞的增殖,迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,这可能通过调节P53-Akt-Mdm2信号通路来实现。因此,综合我们的研究结果,circhipk3存在作为食管癌潜在靶点的可能性。

关键词：食管癌 circhipk3 信号通路 MDM2 P53

circhipk3促进鼻咽癌细胞5-8F转移的机制研究

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CircHIPK3促进鼻咽癌细胞5-8F转移的机制研究

作者：邵文婷皖南医学院

学位级别：硕士

目的:探讨circhipk3在鼻咽癌转移中的作用和分子机制。方法:(1)首先检索公共数据库,运用生信分析鼻咽癌组织及非癌组织中circhipk3表达水平;(2)通过体外培养鼻咽癌5-8F细胞,采用RT-q PCR和Western blot、细胞划痕、CCK-8、Transwell实... 详细信息

目的:探讨circhipk3在鼻咽癌转移中的作用和分子机制。方法:(1)首先检索公共数据库,运用生信分析鼻咽癌组织及非癌组织中circhipk3表达水平;(2)通过体外培养鼻咽癌5-8F细胞,采用RT-q PCR和Western blot、细胞划痕、CCK-8、Transwell实验等方法研究circhipk3-siRNA干扰后对细胞迁移和侵袭及潜在下游基因E-Cadherin/CDH1、N-Cadherin/CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响。(3)最后,运用转录组测序技术分析5-8F细胞circhipk3-siRNA干扰后显著差异表达的基因。结果:(1)与非癌组织相比,鼻咽癌组织中circhipk3表达明显增加。(2)与Control组相比,circhipk3-siRNA转染组5-8F细胞circhipk3表达明显下调,划痕闭合率明显降低,迁移侵袭细胞数目明显减少,E-Cadherin m RNA和蛋白量明显升高,N-Cadherin、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3 m RNA和蛋白量明显降低。(3)进一步分析显示,circhipk3-siRNA转染组5-8F细胞中AL645922.1、SCO2、AL136295.1和ISY1-RAB43表达显著上调,BIVM-ERCC5、FAM47E-STBD1、INO80B-WBP1、NAIP、C15orf38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达显著下调。结论:鼻咽癌组织中circhipk3表达显著升高。circhipk3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进鼻咽癌细胞5-8F转移。AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circhipk3介导的鼻咽癌5-8F细胞转移中发挥关键作用。

关键词： circhipk3 5-8F细胞鼻咽癌转移转录组测序

circhipk3调控miR-653-5p/RSF1轴对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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circHIPK3调控miR-653-5p/RSF1轴对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和...

作者：尉嘉斌青岛大学

学位级别：硕士

研究目的神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是小儿常见的一种恶性实体肿瘤,号称“儿童恶性肿瘤之王”,难治和复发依旧是治疗NB时最大的挑战。环状同源域相互作用蛋白激酶3(circular homeodomain interacting protein kinase 3,circhipk3)... 详细信息

研究目的神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是小儿常见的一种恶性实体肿瘤,号称“儿童恶性肿瘤之王”,难治和复发依旧是治疗NB时最大的挑战。环状同源域相互作用蛋白激酶3(circular homeodomain interacting protein kinase 3,circhipk3)在许多肿瘤的进展中都起到了关键的作用,但其在NB中的作用尚不明确。本研究意在探讨circhipk3在神经母细胞瘤中的表达及作用机制。研究方法通过二代测序法筛选出NB组织中具有表达差异的环状RNA;使用实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)验证circhipk3、miR-653-5p和RSF1在NB组织与人NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH、SK-N-BE(2),IMR-32和人胚肾细胞系HEK-293中的表达;分别向NB细胞系SH-SY5Y和SK-N-SH中转染小干扰RNA si-NC和si-circhipk3或慢病毒敲降载体sh-NC和sh-circhipk3;使用CCK-8和平板克隆形成实验验证circhipk3在NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH增殖中的作用;使用划痕实验、Transwell实验检测circhipk3对NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH迁移和侵袭的能力变化;使用Western blot检测NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH中上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达;通过裸鼠皮下成瘤实验探讨circhipk3在体内对NB的影响;生物信息学方法预测circhipk3的下游调控靶标,并用荧光素酶报告基因实验验证二者之间的靶向调控关系;向稳定敲低circhipk3的NB细胞系中转染miR-653-5p抑制物,利用CCK-8和Transwell实验等方法探究miR-653-5p与NB细胞增殖、迁移和侵袭能力的联系。结果circhipk3和RSF1在NB细胞和组织中高表达,miR-653-5p在NB细胞和组织中低表达。分别向SH-SY5Y细胞和SK-N-SH细胞中转染sh-circhipk3后,细胞中circhipk3的表达量下降。CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验等实验结果都证实,随着circhipk3的逐步敲低,NB细胞的生长、转移和侵袭能力都有所下降;Western blot结果表明在抑制circhipk3表达时,N-钙黏蛋白和波状蛋白的表达减少,E-钙黏蛋白表达反而增加。裸鼠皮下成瘤实验结果表明敲低circhipk3的表达可以抑制NB在体内的生长。荧光素酶报告基因实验数据证明了在circhipk3与miR-653-5p之间、miR-653-5p与RSF1(Remodeling and Spacing Factor1)之间有靶向调控位点。细胞功能回复实验结果证实circhipk3通过调控miR-653-5p/RSF1轴从而影响NB细胞的恶性表型。结论circhipk3在NB细胞和组织中高度表达,沉默了circhipk3的表达能够抑制NB细胞的增殖、迁移、侵袭能力和EMT,同时也抑制NB细胞在体内的生长;进一步研究表明,circhipk3通过调节miR-653-5p/RSF1轴影响NB细胞的生长、转移和侵袭。意义敲低circhipk3的表达能够抑制NB细胞的恶性表型及NB细胞在体内的生长,所以circhipk3可能是治疗NB药物的一个新的切入点,给抗NB药物的研发提供一个全新的思路。

关键词：神经母细胞瘤 circhipk3 miR-653-5p RSF1

异槲皮苷通过circhipk3抑制miR-29a-3p调控PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗的研究

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异槲皮苷通过circHIPK3抑制miR-29a-3p调控PI3K/AKT信号通路改善...

作者：蓝忻东桂林医学院

学位级别：硕士

目的:探讨异槲皮苷通过circ HIPK3抑制miR-29a-3p,激活PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:1、体外实验:（1）采用q RT-PCR实验检测q RT-PCR检测RNase R处理后Hep G2细胞中circ HIPK3和HIPK3m RNA的表达量;（2）采用1×10m... 详细信息

目的:探讨异槲皮苷通过circ HIPK3抑制miR-29a-3p,激活PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:1、体外实验:（1）采用q RT-PCR实验检测q RT-PCR检测RNase R处理后Hep G2细胞中circ HIPK3和HIPK3m RNA的表达量;（2）采用1×10mol/L胰岛素和125μM棕榈酸构建Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,用Quantitative Real Time-PCR（q RT-PCR）法检测胰岛素抵抗Hep G2细胞中circ HIPK3与miR-29a-3p的表达情况;（3）利用生物信息学分析方法预测circ HIPK3与miR-29a-3p是否有靶向关系,并通过双荧光素酶法（Luciferase）验证circ HIPK3是否能靶向抑制miR-29a-3p的活性;（4）通过瞬时转染circ HIPK3至用异槲皮苷处理胰岛素抵抗Hep G2细胞,48 h后,采用Western Blot法（WB）、葡萄糖氧化酶法和q RT-PCR检测异槲皮苷对过表达circ HIPK3的胰岛素抵抗Hep G2细胞中各靶基因的m RNA、蛋白表达的影响;（5）通过共转染circ HIPK3与miR-29a-3p同时用异槲皮苷处理胰岛素抵抗Hep G2细胞,转染48 h后,采用WB法、葡萄糖氧化酶法和q RT-PCR检测异槲皮苷通过circ HIPK3对miR-29a-3p抑制作用,激活PI3K/AKT信号通路各靶基因表达,改善细胞胰岛素抵抗。2、体内实验:（1）取SPF级db/db小鼠18只,将分为糖尿病组、空载质粒腺病毒组和circ HIPK3过表达腺病毒组及另设正常对照组,分别对空载质粒腺病毒组和circ HIPK3过表达腺病毒组尾静脉注射空载质粒腺病毒和circ HIPK3过表达腺病毒,注射浓度1E+10PFU/m L,14天后取小鼠肝组织,采用q RT-PCR实验检测circ HIPK3的表达情况。（2）另取SPF级db/db小鼠36只,随机分为6组（糖尿病组、空载质粒腺病毒对照组、模型组、异槲皮苷低、中、高剂量）,另设正常对照组;其中空载质粒腺病毒对照组,尾静脉注射空载质粒腺病毒,糖尿病组与正常对照组尾静脉注射0.9%生理盐水,另外4组尾静脉注射circ HIPK3过表达腺病毒。14天后进行灌胃给药,不同剂量的异槲皮苷分别为（20 mg/kg,40 mg/kg,80 mg/kg）,其余均给等体积的0.9%生理盐水灌胃,时长为14天。给药第0天,第7天,第14天监测小鼠空腹血糖。灌胃第14天后取材,取血清做酶联免疫吸附试验（ELISA）,测小鼠空腹胰岛素含量。取胰腺组织做石蜡切片,进行H-E以及免疫组化染色实验。取肝组织分别提取RNA和蛋白,采用WB技术和q RT-PCR技术检测小鼠体内miR-29a-3p以及PI3K/AKT通路中各因子表达情况。结果:1、体外实验:（1）RNase R处理前后,circ HIPK3表达水平无明显变化,但是线性m HIPK3表达水平却显著降低,证实circ HIPK3具有环状结构,且结构稳定。（2）与对照组比较,模型组中circ HIPK3的表达明显减少,miR-29a-3p的表达明显增加,差异有统计学意义。（3）双荧光素酶实验提示,circ HIPK3野生型质粒组荧光强度明显增强,而突变型质粒组荧光强度无明显改变,circ HIPK3与miR-29a-3p具有靶向关系。（4）胰岛素抵抗Hep G2细胞转染circ HIPK3质粒实验中,与异槲皮苷处理组相比较,转染circ HIPK3质粒组的miR-29a-3p的表达水平降低;PIK3R1,AKT和GLUT4 m RNA、蛋白表达水平显著增加,而FOXO1,GSK3β及PTEN的m RNA、蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义。（5）共转染circ HIPK3与miR-29a-3p mimic到异槲皮苷预处理的胰岛素抵抗Hep G2细胞实验中,与异槲皮苷处理组相比较,共转染circ HIPK3与miR-29a-3p mimic的miR-29a-3p表达水平降低;PIK3R1,AKT及GLUT4的m RNA、蛋白表达水平明显增高,而FOXO1,GSK3β和PTEN的m RNA、蛋白表达水平明显降低。葡萄氧化酶法结果显示,与异槲皮苷处理组相比共转染circ HIPK3质粒与miR-29a-3p mimic的葡萄糖消耗量明显增加。2、体内实验:（1）db/db小鼠尾静脉注射circ HIPK3过表达腺病毒后,q RT-PCR结果显示,小鼠肝组织中circ HIPK3表达高于糖尿病组。（2）灌胃给药不同剂量异槲皮苷14天后,与circ HIPK3过表达腺病毒模型组相比较,不同剂量异槲皮苷组的小鼠空腹血

关键词：异槲皮苷胰岛素抵抗 circhipk3 miR-29a-3p PI3K/AKT