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结直肠癌围手术期患者外周血中cd4+T淋巴细胞表面cd25,cd69,HLA-DR的表达及意义

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结直肠癌围手术期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CD25,CD69,HLA-D...

作者：王祥安南昌大学

学位级别：硕士

目的:观察结直肠癌患者围手术期外周血中cd4T淋巴细胞表面cd25、cd69、HLA-DR的表达状态,分析前后变化,并探讨相关免疫机制和意义。方法:采用流式细胞仪检测40位结直肠癌患者(观察组)围手术期包括手术前、手术后第5天、手术后第10天外... 详细信息

目的:观察结直肠癌患者围手术期外周血中cd4T淋巴细胞表面cd25、cd69、HLA-DR的表达状态,分析前后变化,并探讨相关免疫机制和意义。方法:采用流式细胞仪检测40位结直肠癌患者(观察组)围手术期包括手术前、手术后第5天、手术后第10天外周血中cd25、cd69、HLA-DR在cd4T淋巴细胞表面表达状态,计算百分率,并与在同一研究时段的15例健康体检者(对照组)进行比较,并分析观察组术后cd25、cd69、HLA-DR表达水平的变化,与临床病理参数的关系。结果:1、观察组围手术期和对照组外周血中cd4T淋巴细胞表面cd25、C D69、HLA-DR均表达。2、观察组术前外周血中cd4T淋巴细胞表面cd25表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(Pcd25表达水平逐渐下降,术后第5天和术前表达水平无明显差异(P>0.05)。术后第10天显著低于术后第5天和术前,差异有统计学意义(Pcd25表达水平与临床病理参数无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。3、观察组术前外周血中cd4T淋巴细胞表面cd69表达水平显著低于对照组,其差异有统计学意义(Pcd69表达水平逐渐升高,术后第5天和术后第10天的差异无统计学意义(P>0.05),且都显著高于术前,其差异有统计学意义(Pcd69表达水平的差异有统计学意义(Pcd69表达水平与其余临床病理参数无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。4、观察组术前外周血中cd4T淋巴细胞表面HLA-DR表达水平显著低于对照组,其差异有统计学意义(P0.05)。术后第10天显著高于术前,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:结直肠癌患者外周血中cd4T淋巴细胞活化率低,细胞免疫功能下降。cd4T淋巴细胞表面cd25表达水平较高,可能与肿瘤免疫抑制有关,术后降低,可能与去瘤后解除了肿瘤免疫抑制有关,其表达水平与临床病理参数无关;cd69、HLA-DR表达水平明显降低,术后逐渐升高,说明术前患者免疫功能低下,术后得到恢复,其与临床病理参数的相关性有助于判断其预后。外周血中cd4T淋巴细胞表面的cd25、cd69、HLA-DR可能成为有助于判断结直肠癌患者病情的免疫学指标,进一步指导围手术期管理和免疫治疗。

关键词：结直肠癌围手术期 T淋巴细胞 cd25 cd69 HLA-DR

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靶向cd25特异性抗体的构建与功能研究

靶向CD25特异性抗体的构建与功能研究

作者：高宇轩北京化工大学

学位级别：硕士

癌症是人类历史上最复杂的疾病之一,其特点是恶性肿瘤细胞过度生长,并且伴有免疫反应的改变。免疫系统的抑制和重新编辑,在肿瘤的发生、发展中起着关键作用。免疫治疗的目的是重新激活抗肿瘤免疫细胞,克服肿瘤的免疫逃逸,具有准确性高... 详细信息

癌症是人类历史上最复杂的疾病之一,其特点是恶性肿瘤细胞过度生长,并且伴有免疫反应的改变。免疫系统的抑制和重新编辑,在肿瘤的发生、发展中起着关键作用。免疫治疗的目的是重新激活抗肿瘤免疫细胞,克服肿瘤的免疫逃逸,具有准确性高、特异性强的优势。然而,肿瘤免疫治疗的总体临床反应率仍有待提高,除了与多种免疫治疗方法相结合可提高临床治疗效果,还应进一步发掘新的生物标志物并探索新的治疗方法。cd25,即白细胞介素-2(IL-2)受体α亚基,主要表达于调节性T细胞(Treg)和效应T细胞(Teff)表面。Treg细胞在维持免疫稳态、减少自身免疫疾病发生的过程中发挥着重要作用,但在肿瘤组织中,Treg细胞的大量存在形成了免疫抑制环境,进而促进肿瘤生长。肺癌、卵巢癌、肠道肿瘤、急性淋巴细胞白血病等患者的外周血或肿瘤局部Treg细胞数量有显著性增加。IL-2与Teff细胞表面的cd25结合,能有效激活细胞并促进细胞增殖,但Treg细胞表面的cd25发生竞争性结合时,能抑制Teff细胞的增殖。由于cd25同时存在于Teff和Treg细胞表面,在临床应用中受到一定的限制。针对Treg细胞表面cd25的治疗性抗体药物的研发,在未来抗肿瘤免疫治疗领域具有巨大的潜力。论文的主要研究内容如下:论文研究了BALB/c小鼠的免疫应答反应。研究结果显示:不同注射方式的小鼠体液免疫应答均获得了良好效果。利用小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行电融合,并利用酶联免疫吸附剂检测(ELISA)、流式细胞术(FACS)筛选技术,发现了细胞上清与cd25特异性结合的38株母克隆杂交瘤细胞。通过对母克隆杂交瘤细胞进行稀释种板,成功筛选出34株可分泌单克隆抗体的亚克隆杂交瘤细胞。进一步纯化出7株与cd25特异性结合效果良好的鼠源单克隆抗体。为了降低抗体的免疫原性,将鼠源单克隆抗体改造为人-鼠嵌合抗体后,根据与原代细胞特异性结合以及报告细胞株介导的ADCC作用结果,选择两种效果最好的GC-01和GC-02抗体,进一步改造为人源化抗体GHu-01和GHu-02。改造后的人源化抗体可以介导外周血细胞(PBMC)中的自然杀伤(NK)细胞靶向清除Treg细胞,并且与PBMC共培养过程中不影响IL-2促进细胞增殖分化的功能。抗体与HUVEC细胞、红细胞、粒细胞以及人源血清均没有非特异性结合。小鼠体内的抗体药代动力学检测结果显示,10 mg/kg剂量抗体在小鼠体内稳定存在的时间更长。小鼠-MC38肿瘤模型验证结果表明人源化抗体GHu-01有更好的抑制肿瘤效果。本研究利用杂交瘤技术和人源化改造,筛选得到了两种全新表位的cd25特异性人源化抗体,并显示出良好的靶向结合Treg细胞能力,具有广阔的临床应用前景。

关键词： cd25 杂交瘤技术单克隆抗体人源化 IL-2 调节性T细胞

抗人cd25基因工程抗体和免疫毒素在毕赤酵母中的表达

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抗人CD25基因工程抗体和免疫毒素在毕赤酵母中的表达

作者：康伟福建中医药大学

学位级别：硕士

目的和意义cd25表达于活化T细胞表面,静息T细胞不表达,这为靶向治疗以活化T细胞介导的疾病如T细胞淋巴瘤、自身免疫病、移植排斥反应等提供了科学依据。采用毕赤酵母表达系统,以Daclizumab(人源化抗cd25单抗隆抗体)为基础,构建重组表达... 详细信息

目的和意义cd25表达于活化T细胞表面,静息T细胞不表达,这为靶向治疗以活化T细胞介导的疾病如T细胞淋巴瘤、自身免疫病、移植排斥反应等提供了科学依据。采用毕赤酵母表达系统,以Daclizumab(人源化抗cd25单抗隆抗体)为基础,构建重组表达载体pPICZalpha A-biscfv (Daclizumab)和pPICZalpha A-dmDT390-biscfv (Daclizumab),在重组毕赤酵母GS115菌株中诱导表达biscfv (Daclizumab)和dmDT390-biscfv (Daclizumab)重组蛋白,为淋巴瘤、急性排斥反应、自身免疫病等疾病提供新的药物治疗方案。研究方法合成目的基因及构建表达载体：利用DNAWorks软件,获得具有互补末端的寡核苷酸引物,采用装配PCR法,合成四条短的基因片段scfv (1)、scfv (2)、scfv (3)、 dmDT390并连接至pMD19-T载体,测序正确后,四条短的基因片段酶切拼接后最终连入毕赤酵母表达载体pPICZalpha A。采用毕赤酵母系统表达蛋白：线性化的表达载体通过氯化锂转化方法转至毕赤酵母GS1 15,在含有博来霉素的YPDS平板中筛选阳性克隆子。采用BMGY培养基增殖培养,BMMY培养基诱导蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot:蛋白样品经SDS-PAGE电泳后转至PVDF膜上,采用鼠抗组氨酸尾抗体作为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体作为二抗,采用化学发光试剂盒观察结果。蛋白纯化：采用镍柱纯化蛋白,纯化出的蛋白采用高效液相色谱仪(HPLC)进行分析。结果1.通过DNAWorks软件设计出合成scfv (1)、scfv (2)、scfv (3)的24条寡核苷酸引物,以及合成dmDT390的44条寡核苷酸引物,通过装配PCR将合成的基因片段连入pMD19-T载体,测序获得插入正确基因片段的pMD19-scfv(1)、pMD19-scfv (2)、pMD19-scfv (3) 和 pMD19-dmDT390载体。pMD19-scfv (1)和pMD19-scfv(2)经酶切拼接后最终连入pPICZalpha A载体形成了pPICZalpha A-biscfv表达载体;pMD 19-scfv(2)、pMD 19-scfv(3)和pMD19-dmDT390经酶切拼接后最终连入pPICZalphaA载体形成了pPICZalpha A-dmDT390-biscfv表达载体。2.经氯化锂转化法获得了稳定整合目的基因的毕赤酵母菌株。3.整合了biscfv目的基因的毕赤酵母菌,表达产物经SDS-PAGE(还原性)电泳分析,得到分子量约为55kd表达产物,western blot验证含组氨酸尾,为目的蛋白。4.整合了dmDT390-biscfv目的基因的毕赤酵母菌,表达产物经SDS-PAGE(非还原性)电泳分析,得到分子量约为95kd表达产物,western blot验证含组氨酸尾,为目的蛋白。5.经镍柱纯化的蛋白经高效液相色谱仪检测纯度大于99%。结论重组毕赤酵母GS115能稳定表达biscfv和dmDT390-biscfv蛋白,蛋白经镍柱纯化后能获得高纯度的蛋白。

关键词：毕赤酵母 cd25 达利珠单抗 biscfv 白喉毒素

cd19、cd25在新生儿缺氧缺血性脑病的表达及临床意义

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临床儿科杂志 2010年第4期28卷 367-370页

作者：林丽星杨梅王洁张青玉席莉华兰州大学第一医院儿科甘肃兰州730000 兰州市妇幼保健院儿科甘肃兰州730000 兰州市城关区中医骨伤科医院儿科甘肃兰州730000

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血B淋巴细胞亚群cd19、cd25的表达及临床意义。方法收集62例HIE组新生儿和30例对照组新生儿股静脉血标本,采用流式细胞仪(FCM)检测外周血B淋巴细胞cd19+、cd25+、cd19+/cd25+百分率,同时应用... 详细信息

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血B淋巴细胞亚群cd19、cd25的表达及临床意义。方法收集62例HIE组新生儿和30例对照组新生儿股静脉血标本,采用流式细胞仪(FCM)检测外周血B淋巴细胞cd19+、cd25+、cd19+/cd25+百分率,同时应用流式直方图分析细胞表面cd19、cd25分子的表达密度。结果HIE组新生儿外周血B淋巴细胞cd19+、cd25+、cd19+/cd25+百分率分别为17.93±3.10、1.26±1.04、0.64±0.42,均较对照组低(Pcd19+、cd19+/cd25+百分率比较差异有统计学意义(Pcd19、cd25的平均荧光强度分别为13.53±5.48、1.37±0.33,与对照组比较差异均有统计学意义(Pcd19、cd25的表达异常,B淋巴细胞功能受抑制,检测cd19、cd25对了解HIE的免疫功能及病情具有重要临床意义。

关键词：缺氧缺血性脑病新生儿流式细胞仪 cd19 cd25

人cd4^+ T细胞在肠道细菌抗原刺激前后cd25与FOXP3的表达

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第四军医大学学报 2007年第5期28卷 398-400页

作者：刘香刘凡胡刚正郑长青中国医科大学盛京医院消化科辽宁沈阳110004 沈阳医学院奉天医院消化科辽宁沈阳110024

目的:探讨新鲜分离及自身肠道菌群抗原刺激后的人外周血cd4^+ T细胞cd25和FOXP3表达的相关性及变化规律.方法:分离人的外周血单核细胞和淋巴细胞,单核细胞经自身肠道菌群抗原刺激后与淋巴细胞混合培养,新鲜分离及混合培养14d的淋巴细胞... 详细信息

目的:探讨新鲜分离及自身肠道菌群抗原刺激后的人外周血cd4^+ T细胞cd25和FOXP3表达的相关性及变化规律.方法:分离人的外周血单核细胞和淋巴细胞,单核细胞经自身肠道菌群抗原刺激后与淋巴细胞混合培养,新鲜分离及混合培养14d的淋巴细胞用三色流式细胞术在单细胞水平同时检测cd4,cd25和FOXP3的表达.结果:新鲜分离的淋巴细胞约43.4%表达cd4,在cd4+ T细胞中,约5.8%表达cd25,而高表达的只有1.9%,约5.2%表达FOXP3,cd25和FOXP3均表达的占3.3%,cd25hiFOXP3+细胞占1.6%,cd4-细胞几乎不表达FOXP3.经抗原刺激后,淋巴细胞总数均轻度增加(与未刺激组比较,平均增加21.0%,Pcd4+细胞的比例均明显上升(67.1%vs43.4%,Pcd25+,FOXP3+及cd25+FOXP3+细胞的比例变化不大.cd4+cd25+FOXP3+T细胞占cd4+cd25+T细胞的比例及cd4+cd25hiFOXP3+T细胞占cd4+cd25hiT细胞的比例在所有研究对象中均呈下降趋势(前者从59.8%降到52.0%,后者从86.3%降到77.9%,均Pcd25和FOXP3的表达具有一定的相关性,但cd25及cd25hi均不能很可靠地标记人类的调节性T细胞,尤其是在淋巴细胞受到抗原刺激以后.肠道菌群抗原作为外来抗原刺激自身的淋巴细胞后,活化增殖的细胞中主要是cd4+cd25+FOXP3-反应性T细胞,而不是cd4+cd25+FOXP3+调节性T细胞.

关键词：调节性T细胞 cd25 FOXP3 肠杆菌科抗原

视黄酸对人外周血淋巴细胞cd25分子表达影响的研究

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上海免疫学杂志 1995年第6期15卷 340-343页

作者：糜漫天余琦李才安石元刚朱俊东第三军医大学营养与食品卫生学教研室重庆第三军医大学中心实验室

本实验采用分子杂交及流式细胞分析技术研究了视黄酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）对人外周血淋巴细胞ＣＤ２５分子表达和细胞功能的影响，结果显示，大剂量（２．５×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ处理ＰＨＡ活化４８ｈ淋巴细胞，其... 详细信息

本实验采用分子杂交及流式细胞分析技术研究了视黄酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）对人外周血淋巴细胞ＣＤ２５分子表达和细胞功能的影响，结果显示，大剂量（２．５×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ处理ＰＨＡ活化４８ｈ淋巴细胞，其ＣＤ２５ｍＲＮＡ含量、ＣＤ２５阳性细胞百分率和膜表面ＣＤ２５分子数量均显著降低，淋巴细胞大部分受阻于Ｇ０／Ｇ１期，Ｇ２＋Ｍ期细胞仅占７．６％。而适量（２．５×１０－６～２．５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ作用后ＣＤ２５分子表达和Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增加。该研究提示ＲＡ对ＣＤ２５分子表达和淋巴细胞功能的影响有一定的剂量依赖性。

关键词：视黄酸白细胞介素2 受体细胞周期 cd25

自身免疫性肝病中cd4、cd25、Foxp3及ERα、TGF-β1的表达及意义

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自身免疫性肝病中CD4、CD25、Foxp3及ERα、TGF-β1的表达及意义

作者：李麟天津医科大学

学位级别：硕士

目的近年来不同类型肝炎的鉴别诊断是临床迫切需要解决的难题,尤其是各型AILD的诊断更是难中之难,虽然国际自身免疫性肝炎小组(IAIHG)制定了一套诊断标准,并经过多次修订使得诊断率有所提高,诊断也更加可靠,但还会遇到诊断与临床表现不... 详细信息

目的近年来不同类型肝炎的鉴别诊断是临床迫切需要解决的难题,尤其是各型AILD的诊断更是难中之难,虽然国际自身免疫性肝炎小组(IAIHG)制定了一套诊断标准,并经过多次修订使得诊断率有所提高,诊断也更加可靠,但还会遇到诊断与临床表现不符或是治疗效果不满意的情况。基于此许多临床医生向病理医生寻求帮助,希望通过分析肝穿标本的病理特征能够给于他们更明确的诊断及治疗方向。我们分析,虽然各种肝炎有许多相似的组织学表现,但各自有各自相对的组织学特征,为此我们通过分析几种常见的肝炎(自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)及慢性乙型肝炎(CHB)) HE染色标本的组织学特征,以此来为临床诊断提供帮助,为临床治疗提供依据。此外cd4、cd25、叉头样转录因子Foxp3(foxhead box protein 3)、雌激素受体α(ERa)及转化生长因子β1 (TGF-β1)与自身免疫性疾病的关系倍受关注,尤其是cd4+、cd25+的Treg及Foxp3在自身免疫性疾病发病机制中的作用更是研究焦点中的热中之热。为此我们比较它们在各组肝活检中的表达情况来探讨其作用及意义。方法应用HE染色进行29例I型AIH、18例PBC、15例CHB肝穿标本的组织学特征分析,应用免疫组化方法检测各组cd4、cd25、Foxp3、ERa及TGF-β1的表达情况,设8例正常肝组织(非肝病患者尸检来源的肝组织)为对照。结果1. AIH、PBC、CHB三组中羽毛状变性发生率分别为3.45%、33.33%、6.67%,PBC组明显高于AIH组(P25在各组的表达差异没有统计学意义(P>0.05)。4. Foxp3组间阳性胆管数PBC组高于正常组(P0.05)。***α在各组的表达AIH和PBC组高于正常组(Pcd4+T细胞可能在PBC发生的免疫机制中起到重要作用。***及TGF-β1可能介导和促进了自身免疫性肝病的发生发展。

关键词：自身免疫性肝病组织学特征免疫组织化学 cd4 cd25 叉头样转录因子Foxp3 雌激素受体a 转化生长因子β1

鼻咽癌相对特异性基因的筛选及cd25和EB病毒关系的研究

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鼻咽癌相对特异性基因的筛选及CD25和EB病毒关系的研究

作者：刘巍第一军医大学

学位级别：硕士

恶性肿瘤的发生发展是一个非常复杂的过程,涉及成千上万的基因改变,包括正常基因的突变或缺失,癌基因的异常扩增和表达等。不同组织、器官发生的恶性肿瘤具有不同的组织生物学特性,在肿瘤发生发展相关基因的表达上也具有一定的差异,因此... 详细信息

恶性肿瘤的发生发展是一个非常复杂的过程,涉及成千上万的基因改变,包括正常基因的突变或缺失,癌基因的异常扩增和表达等。不同组织、器官发生的恶性肿瘤具有不同的组织生物学特性,在肿瘤发生发展相关基因的表达上也具有一定的差异,因此,筛选出不同肿瘤的相对特异性基因,对该肿瘤的诊断和治疗则具有重要的意义。鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是中国南方数省高发的鼻咽部恶性上皮源性肿瘤。它的发病是一个多因素,多阶段的过程。EB病毒感染、化学致癌物、遗传易感性是NPC发病的三大主要因素。研究发现多种癌基因和抑癌基因同NPC的发生发展密切相关,如BCL-2、Madm2、Ras、Rb、P53等。近年来,cdNA基因芯片技术广泛的应用于NPC的研究中,筛选出了一些新的与NPC发生发展相关的基因。在本研究中,我们从已获得的基因表达谱和文献资料中,筛选出与NPC相关的差异表达基因,制备成cdNA基因芯片,对NPC组织、NPC细胞系及肺癌、大肠癌、膀胱癌、乳腺癌细胞系进行基因表达谱分析,从中筛选在NPC中相对特异性表达的基因,并对其进行研究,从而为NPC的诊断和治疗提供帮助。基因表达谱分析结果显示,在NPC组织和各肿瘤细胞系之间,共同表达基因32个,其中上调基因17个,下调基因15个,差异表达基因48个;在NPC组织及其细胞系间,差异表达基因120个,其中上调基因52个,下调基因57个;另外,在大肠癌LoVo细胞系中,发现33个相对特异性基因,其中上调基因25个,下调基因8个。

关键词：鼻咽癌基因芯片 EB病毒 EBER-1 cd25

cd69、cd25及HLA-DR在川崎病患者外周血T淋巴细胞中表达的研究

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CD69、CD25及HLA-DR在川崎病患者外周血T淋巴细胞中表达的研究

作者：章毅英浙江大学

学位级别：硕士

【背景和目的】川崎病(Kawasaki disease,KD)又称皮肤粘膜淋巴结综合征(mucocutaneous lymphnode syndrome,MCLS),是小儿时期的一种急性发热性血管炎,其临床特点为发热、皮疹、皮肤及粘膜损伤和淋巴结肿大。潜在的危险是冠状动脉... 详细信息

【背景和目的】川崎病(Kawasaki disease,KD)又称皮肤粘膜淋巴结综合征(mucocutaneous lymphnode syndrome,MCLS),是小儿时期的一种急性发热性血管炎,其临床特点为发热、皮疹、皮肤及粘膜损伤和淋巴结肿大。潜在的危险是冠状动脉病损致狭窄、栓塞,致死的主要原因是心肌梗死。由于川崎病发病人数的不断增加,并存在不可低估的心血管并发症,目前已取代了急性风湿热成为儿童后天性心脏病的最主要疾病之一。尽管国内外已做了大量的研究,迄今其病因及发病机制仍未完全明确。近年来由于免疫学的快速发展,对本病的发病机制研究有了很大突破。研究表明,超抗原学说的提出,揭示了多年来许多学者应用血清学和先进的培养技术均不能从川崎病患者体内寻找出某种单一病原体这一奥秘。免疫功能失调在川崎病浙江大学硕士研究生毕业论文的发病中起着重要作用,川崎病具有大多数发热出疹性疾病所没有的免疫系统异常活化。T淋巴细胞在免疫调节中具有重要的作用,T细胞的行为主要包括活化、增殖、克隆扩增、分化、凋亡和免疫记忆。T淋巴细胞对抗原肤加MHC的应答称之为T细胞活化,是T淋巴细胞在免疫调节中的重要组成部分。T淋巴细胞活化是体内特异性免疫应答的重要环节,但急性期川崎病病人外周血T细胞是否活化存在两种互相矛盾的报道。 cd69、cd25及HLA一DR作为活化T细胞的标志,近年引起国内外学者的高度关注,目前临床研究中关于cd25及HLA一DR的报道较多,对cd69的研究较少。对急性期川崎病患者外周血cd3+T淋巴细胞cd69、cd25及HLA一DR的检测,国内外均未见报道。本研究采用单克隆抗体与流式细胞术结合的手段进行检测和分析,其优越性是能在单个细胞水平及亚群水平上反映应答强度,且可以同时对应答细胞做多参数检测。通过检测急性期川崎病患者外周血cd3+T淋巴细胞cd69、cd25 及HLA一DR的表达水平,可以全面了解急性期KD患者外周血cd3‘T淋巴细胞的活化情况,对进一步阐明KD的发病机理、了解疾病发生发展过程及转归具有极为重要的意义,为进一步研究抗细胞因子药物、进行免疫学治疗提供理论依据。【材料与方孩】 1、病例与分组急性期川崎病组31人,男16例,女巧例;年龄4一60 月,平均26.23士17.79月,确诊后给予大剂量丙种球蛋白及阿斯匹林治疗,丙种球蛋白剂量:19/kg/d,连续2天(起病9天内使用)。阿斯匹林剂量:30浙江大学硕士研究生毕业论文 50mg/kg/d。正常对照组17人,均来自我院儿保门诊健康体检儿童,其中男9 例,女8例;年龄34月,平均24.76士18.17月。上呼吸道感染组8人,均为同期住院病人,发热超过3天,外周血常规及CRP均正常者,男4例,女4 例;年龄124月,平均19.25士7.80月。川崎病自身对照组8人,男5例, 女3例;年龄21一42月,平均29.63士6.80月。 2、FCM测定流式细胞仪微量全血直接免疫荧光法测定64例儿童外周血 cd3‘T淋巴细胞、cd3‘cd69‘、cd3‘cd25‘、cd3‘HLA一DR‘T淋巴细胞表达水平。取试管4个,每管分别加全血30协1,分别为阴性对照管(加入cd3单抗)、测试管 (加入cd3、cd69单抗)、测试管2(加入cd3、cd25单抗)、测试管3(加入 cd3、HLA一DR单抗),单抗剂量各为5 pl;置入4℃冰箱孵育20分钟;每管加入溶血剂400 pl,溶血10分钟;加PBS溶液洗一遍,离心1000转/分钟,共10 分钟;去除上清液;细胞沉淀加2%多聚甲醛300林1固定后待机检查。应用美国 Beeton Diekinson公司流式细胞仪(FACSCalibur)检测10000个细胞,激发光源为FITC(530/30)nm,PE(585/42)nm,PerCp(650)nm,先筛选‘r淋巴细胞,再用cd3设门,同型鼠IgGI分别作cd69、cd25及HIJA一DR的阴性对照。用Cellquest 软件分析数据。结果以阳性细胞百分率表示。 3、统计学处理:应用SPSSn.O统计软件,组内行方差分析,组间行t检验,Pcd3‘T淋巴细胞、cd3‘cd69 cd3‘cd25‘、cd3‘HLA一DR‘T淋巴细胞表达水平相比较,川崎病患者cd3‘T淋巴细胞明显降低,其阳性细胞百分率均值士标准差为(54.39士8.98)%,正常对照组为(64.97士6.96)%,有显著性差异(P(0.001);cd3‘cd69‘、cd3‘cd25‘、cd3‘HLA一I)R‘f 淋巴细胞阳

关键词：川崎病流式细胞术 T细胞活化 cd69 cd25 HLA-DR