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A novel method for purification.of recombinant adeno-associated virus vectors on a large scale

Chinese Science Bulletin 2001年第6期46卷 485-489页

作者： WU Xiaobing DONG Xiaoyan WU Zhijian CAO Hui NIU Dongbin QU Jianguo WANG Hong HOU Yunde State Key Laboratory for Molecular Virology and Genetic Engineering Beijing 100052China Laboratory of Morphology Institute of VirologyChinese Academy of Preventive MedicineBeijing 100052China

A novel method for recombinant adeno-associ-ated virus (rAAV) purification.on large scale is described. The method involves three steps, including chloroform treatment, PEG/NaCl precipitation and chloroform extraction. The whole procedure can be performed in four hours. Using this purification.method, we can reproducibly obtain, from 4 × 109 of proviral cells cultured in roller bottles, purified rAAV-GFP stocks with titers of around 5×1013 particles/mL and purity greater than 95%. The infectious titers of the vector stocks were up to 2×1012 TU/mL, thus particle-to-infectivity rate was about 25. Under an electronic microscope, most rAAV particles appeared full and a few were in intermediate form. Empty particles were rarely seen. The purified rAAV-GFP stocks have been successfully used in in vitro and in vivo transfection experiments. Therefore, this new method offers a simple, rapid and cost-effective way for large-scale rAAV purification.

关键词： recombinant adeno-associated virus chloroform purifi- cation.

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