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幽门螺杆菌cag致病岛hp0523基因的缺失及其对cagA蛋白转运能力的影响

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微生物学报 2009年第4期49卷 460-464页

作者：钟桥邵世和母润红王华黄世腾韩军黄河田树伟江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室镇江212013 江苏大学生命科学研究院镇江212013

【目的】构建幽门螺杆菌cag致病岛编码的hp0523基因缺失株,为研究hp0523基因的功能奠定基础。【方法】本研究利用同源重组原理,设计并扩增了hp0523基因上下游同源臂片段,构建hp0523基因缺失自杀质粒pBlueKM40-Δhp0523,电击转化进入幽... 详细信息

【目的】构建幽门螺杆菌cag致病岛编码的hp0523基因缺失株,为研究hp0523基因的功能奠定基础。【方法】本研究利用同源重组原理,设计并扩增了hp0523基因上下游同源臂片段,构建hp0523基因缺失自杀质粒pBlueKM40-Δhp0523,电击转化进入幽门螺杆菌后,通过抗生素筛选后并经PCR验证无误后,获得hp0523基因缺失株H.pylori11637Δhp0523;采用幽门螺杆菌与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析该基因缺失前后对细胞毒性蛋白cagA转运能力的影响;并分析比较了缺失前后,cagA蛋白的表达能力变化;【结果】构建幽门螺杆菌hp0523基因缺失的自杀质粒,并成功获得一株hp0523基因缺失株;cagA转运实验表明,hp0523基因缺失后,可以导致细菌转运cagA蛋白的能力丧失;此外,还发现hp0523基因缺失可以影响cagA蛋白表达。【结论】成功获得了幽门螺杆菌hp0523基因缺失株,初步研究发现hp0523基因是幽门螺杆菌cag致病岛中重要致病因子之一,参与cagA蛋白的转运,可能是其转运装置中组成成分之一。

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛 Ⅳ型分泌装置同源重组

cag致病岛在中国人感染幽门螺杆菌中的结构特征及分类价值

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中华消化杂志 2001年第8期21卷 469-472页

作者：刘炯许国铭李兆申屠振兴聂时南侯鹏龚燕芳纪徐淮第二军医大学长海医院消化内科上海200433

目的　探讨cag致病岛基因群在中国人感染的幽门螺杆菌 (Hp)中结构特征及其与临床疾病的关系 ,以及根据cag致病岛结构对Hp进行分类的意义。方法　合成五对针对cagA、cag致病岛中的cagⅠ、cagⅡ、cagⅠ与cagⅡ连接处、及IS 6 0 5等基因... 详细信息

目的　探讨cag致病岛基因群在中国人感染的幽门螺杆菌 (Hp)中结构特征及其与临床疾病的关系 ,以及根据cag致病岛结构对Hp进行分类的意义。方法　合成五对针对cagA、cag致病岛中的cagⅠ、cagⅡ、cagⅠ与cagⅡ连接处、及IS 6 0 5等基因片段的引物 ,采用PCR方法分别检测临床分离培养的 10 7株Hp基因中 ,cag致病岛及相关基因结构的存在状态。结果　cag致病岛总的阳性检出率为95 .3% ,其中cagA、cagⅠ、cagⅡ的阳性率分别为 92 .5 %、86 .9%、6 9.2 % ,在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等不同疾病组间的检出率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。IS 6 0 5的阳性检出率为 43 .9% ,在慢性胃炎中的检出率 (5 2 .2 % )明显高于十二指肠溃疡中的检出率 (13 .6 % ,P cagⅠ与cagⅡ连接处 (呈连续状态存在的cag致病岛 )的检出率仅为 4.7%。其在十二指肠溃疡中的检出率 (14.8% )明显高于慢性胃炎(1.5 % )等 (P cag致病岛阴性的Hp菌株主要来源于慢性胃炎。cagⅠ总的检出率 (86 .9% )明显高于cagⅡ (6 9.2 % ) ,差异在慢性胃炎中有显著性 (P cagⅠ部分片段缺失的中国Hp菌株 ,其中 1株为仅有cagA存在、cagⅡ及cagⅠ其它部分均缺失的Hp ,1株Hp的IS 6 0 5阳性扩增片段明显大于国外标准菌株及?

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛消化性溃疡 Hp感染分类

cag致病岛在幽门螺杆菌致病与免疫防治中的作用

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中华消化杂志 2003年第11期23卷 698-699页

作者：林焕建王继德张亚历白杨周殿元第一军医大学南方医院全军消化病研究所广州510515

细胞毒素相关基因蛋白致病岛（cagPAI）在幽门螺杆（HP）致病与免疫防治中的作用存在争议，本研究应用3对eag PAI野生株与cag PAI基因"敲除"（knock out）的突对此进行了研究。

关键词： cag致病岛幽门螺杆菌免疫防治统计学处理组织学

幽门螺杆菌cag致病岛cagⅠ蛋白的生物信息学分析

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临床检验杂志 2014年第11期32卷 835-840页

作者：谢立苹姚逸正朱虹徐驰田树伟梁广舒倪颖邵世和江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室江苏镇江212013 北京市中西医结合医院检验科北京100039 武汉塞力斯生物技术有限公司武汉430040

目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的cagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Finge... 详细信息

目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的cagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Fingerprint服务器分析推测其潜在的功能。结果 cagⅠ蛋白有361个氨基酸残基,分子量(Mr)为39 370,理论等电点为5.56;N'端20个氨基酸残基为信号肽,有三段跨膜区,二级结构和三级结构中螺旋结构为主体(约80%);cagⅠ为稳定的疏水蛋白,保守性很强,有N-糖基化作用位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和豆蔻酰化作用位点;存在膜蛋白、菌毛蛋白、转运蛋白、ATP/GTP酶、转录调节因子、分泌系统蛋白等多个蛋白质标签。结论 cagⅠ蛋白定位于HP外膜,是Ⅳ型分泌系统重要组成蛋白质,在信号转导和物质转运过程中充当信使或载体,可能具有水解酶及ATP/GTP酶活性。

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛生物信息学结构预测功能分析

插入序列IS605与cag致病岛分割在中国人幽门螺杆菌中的不一致性

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 170-172页

作者：刘炯许国铭李兆申屠振兴李淑德龚燕芳第二军医大学长海医院消化内科上海200433

目的 :探讨中国人群感染的幽门螺杆菌 (Hp)中 IS6 0 5在 cag致病岛基因分割中的地位和作用。方法 :采用 PCR方法检测 10 7例临床分离培养的 Hp菌株 ,分别扩增 cag A中的 2 98bp片段、cag致病岛中 cag 与 cag 连接处的 2 2 8bp片段及 IS... 详细信息

目的 :探讨中国人群感染的幽门螺杆菌 (Hp)中 IS6 0 5在 cag致病岛基因分割中的地位和作用。方法 :采用 PCR方法检测 10 7例临床分离培养的 Hp菌株 ,分别扩增 cag A中的 2 98bp片段、cag致病岛中 cag 与 cag 连接处的 2 2 8bp片段及 IS6 0 5中的 116 7bp片段。结果 :作为 cag致病岛一部分的 cag A ,其阳性的检出率为 92 .5 % ,在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病间的检出率无显著差异 (P>0 .0 5 )。 cag 与 cag 连接处、即未被分割为 cag 与 cag 的 cag致病岛的检出率仅有4 .7% ,而作为参与分割 cag致病岛的 IS6 0 5 ,其检出率仅有 4 3.9% ,明显低于被分割为 cag 与 cag 的 cag致病岛的检出率 ,IS6 0 5在十二指肠溃疡中的检出率 (13.6 % )明显低于慢性胃炎 (5 2 .2 % )中的检出率 (Pcag致病岛在十二指肠溃疡中的检出率 (14 .8% )则显著高于慢性胃炎 (1.5 % )中的检出率 (Pcag 与 cag 呈连续状态的 cag致病岛检出率明显不符 ,提示不仅有 IS6 0 5 ,可能还存在有其他类似转座子的基因成分参与

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛 IS605 插入序列不一致性中国人

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幽门螺杆菌的cag致病岛及其与胃癌的关系

实用肿瘤杂志 2009年第3期24卷 314-317页

作者：张娜唐世孝泸州医学院附属医院消化内科四川泸州646000

幽门螺杆菌(H.pylori)的cag致病岛是H.pylori的主要毒力因子决定簇,cagA阳性的菌株与胃癌有着更为密切的关系。本文将对cag致病岛的结构与功能及其在胃癌的发病机制中的作用作一简要综述。

关键词：胃肿瘤螺杆菌,幽门 cag致病岛基因细胞凋亡

幽门螺杆菌cag致病岛中hp0523基因功能的鉴定与分析

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幽门螺杆菌Cag致病岛中hp0523基因功能的鉴定与分析

作者：钟桥江苏大学

学位级别：硕士

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的细胞毒性蛋白A(cagA)是一个重要的毒力因子,与胃癌的发生密切相关。其是通过cag致病岛(cagpathogenicity island,cag-PAI)编码的Ⅳ型样分泌装置,转运进入胃上皮细胞,发挥毒性作用。而cag-PA... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的细胞毒性蛋白A(cagA)是一个重要的毒力因子,与胃癌的发生密切相关。其是通过cag致病岛(cagpathogenicity island,cag-PAI)编码的Ⅳ型样分泌装置,转运进入胃上皮细胞,发挥毒性作用。而cag-PAI中编码的基因功能及其致病机理均尚未十分明确。鉴此,本文初步研究了cag-PAI中编码的hp0523基因的功能,并初步探讨其在cagA转运过程中的作用,旨在为深入研究cag-PAI的致病机理奠定基础。方法: 1.利用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增获取hp0523基因,T-A克隆后构建pGEM-T-hp0523,进行序列测定;并对其序列进行生物信息学分析研究;2.构建pET-28a-hp0523原核表达载体,转化表达宿主菌BL21(DE3);经IPTG诱导后,SDS-PAGE法和Western blot法鉴定表达后,并以Ni-NTA柱分离纯化目的蛋白;进一步对纯化蛋白进行生物学活性研究;3.扩增获得hp0523基因上下游同源臂片段F1、F2,构建自杀质粒pBlueKM40/△hp0523::Km,电击转化H.pylori后经抗生素筛选hp0523基因缺失株,再进行PCR鉴定;4.采用hp0523基因缺失株和野生株与胃癌上皮细胞BGC-823进行共培养,而后采用Western blot法检测cagA蛋白转运能力变化。结果: 1.扩增获得的hp0523基因全长为510bp,编码169aa,与GenBank公布的26695、J99同源性为92～95%;蛋白相对分子量Mr预测为19.7kDa,等电点pI为9.53;蛋白二级结构分析,在33～165位aa之间存在一个保守的SLT催化基序,第56位谷氨酸(GLU56)是催化活性的中心位点,C端序列上含有一个肽聚糖结合域“AVGAY”,故预测hp0523基因可能是一个肽聚糖水解酶编码基因;2.构建获得了原核表达载体pET-28a-hp0523,IPTG诱导后,经SDS-PAGE鉴定和Western blot鉴定有目的蛋白表达;采用Ni-NTA柱梯度洗脱后,分离获得了目的蛋白HP0523;3.HP0523经复性处理后,采用溶菌斑点实验证实其具有溶菌活力;而后采用SDS煮沸法分离提取获得细菌肽聚糖,进行凝胶酶谱分析后,发现HP0523蛋白具有肽聚糖水解能力;理化特性研究表明,HP0523具有广谱的溶菌能力,但酶活力较溶菌酶低;其最适酶活力pH值为6.0;4.连接F1、F2后构建自杀质粒pBlueKM40/△hp0523::Km,电击转化后经抗生素筛选,并经PCR验证后获得了hp0523基因缺失株;缺失株、野生株分别与胃癌上皮细胞BGC-823进行共培养后,发现hp0523基因缺失株处理组,胃癌上皮细胞内未能检测到cagA的转运。结论: 本研究认为hp0523基因是一个肽聚糖水解酶的编码基因,且其参与cagA的转运,可能是cag-PAIⅣ型样分泌装置的组成成分之一。

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛 IV型样分泌装置肽聚糖水解酶

cag致病岛在幽门螺杆菌致病机制中的地位及作用

同方学位论文库评论

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现代消化及介入诊疗 1999年第4期4卷 42-45页

作者：刘炯许国铭南京解放军第八一医院南京210002 第二军医大学长海医院消化内科上海200433

目前研究认为幽门螺杆菌(H·pylori)是人胃十二指肠疾病发生发展中重要的致病菌，但H·pylori诱导疾病发生的分子机制，目前尚不清楚，针对H·pylori的尿素酶、移行能力、粘附因子、应激反应蛋白以及其它早已了解的致病因素的研究仍在... 详细信息

目前研究认为幽门螺杆菌(H·pylori)是人胃十二指肠疾病发生发展中重要的致病菌，但H·pylori诱导疾病发生的分子机制，目前尚不清楚，针对H·pylori的尿素酶、移行能力、粘附因子、应激反应蛋白以及其它早已了解的致病因素的研究仍在继续深人，空泡毒素(VacA)及其异质性与疾病的相关性也得到进一步证实，对其诱导上皮细胞空泡形成机制的了解也有所进展。脂多糖在胃炎及H·pylori相关性自身免疫中的潜在角色也已被认识。

关键词：幽门螺杆菌 cag致病岛致病机制诱导相关性空泡毒素胃十二指肠疾病发生发展自身免疫上皮细胞

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cag致病岛与幽门螺杆菌致病作用的关系

胃肠病学 2001年第1期6卷 46-48页

作者：刘炯(综述) 萧树东(审校) 上海第二医科大学附属仁济医院上海市消化疾病研究所200001

幽门螺杆菌(H.Pylori)诱导疾病发生的分子机制目前尚不清楚,针对H .Pylori致病相关因素的研究仍在继续深入.1996年Censini等[1]在cagA阳性H.Pylori菌株中发现的新的DNA片段-cag致病岛,被认为是H.Pylori中的又一致病相关因素.本文就cag... 详细信息

幽门螺杆菌(H.Pylori)诱导疾病发生的分子机制目前尚不清楚,针对H .Pylori致病相关因素的研究仍在继续深入.1996年Censini等[1]在cagA阳性H.Pylori菌株中发现的新的DNA片段-cag致病岛,被认为是H.Pylori中的又一致病相关因素.本文就cag致病岛与H.Pylori相关致病因子的关系作一简要综述.

关键词： cag致病岛幽门螺杆菌致病作用 Hpylori尿素酶