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烟草质体分裂相关基因NtFtsZ cdnas的克隆及功能分析

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自然科学进展 2002年第10期12卷 1042-1047页

作者：王东孔冬冬胡勇鞠传丽何奕昆孙敬三首都师范大学生物系中国科学院植物研究所北京100093

通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)方法从烟草中克隆了两个质体分裂相关基因NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2的cDNA,推导的氨基酸序列分析表明,两者均具有FtsZ蛋白的典型特征和GTP结合位点;N端氨基酸序列分析也表明,NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2都具有... 详细信息

通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)方法从烟草中克隆了两个质体分裂相关基因NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2的cDNA,推导的氨基酸序列分析表明,两者均具有FtsZ蛋白的典型特征和GTP结合位点;N端氨基酸序列分析也表明,NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2都具有质体导肽特征,发现了在高等植物中至少存在两个具有质体导肽的FtsZ;基于氨基酸序列的分子谱系分析也支持这一结果,核酸杂交表明两者在植物的不同发育时期具有相似的表达诺,将这两个基因转入***中表达,它们能影响宿主菌的正常分裂,初步验证了其功能,这些研究提示在高等植物中FtsZ可能具有更多样化的功能。

关键词：质体分裂相关基因 NtFtsZ cdnas 烟草 FtsZ基因质体导肽原核表达基因克隆

Expression, refolding and preliminary characterization of recombinant snake venom metalloproteinases: Implica- tion for the hemorrhagic mechanism

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Chinese Science Bulletin 2003年第19期48卷 2055-2060页

作者： XIANG Kaijun, ZOU Chunsen, ZHU Zhiqiang, TENG Maikun, NIU Liwen & LIU Jing School of Life Science, University of Science and Technology of China, Hefei 230027, China School of Life Science University of Science and Technology of China Hefei 230027 China Yarmouk University Irbid - Jordan

Two cdnas encoding hemorrhagic snake venom metalloproteinase acutolysin A and non-hemorrhagic metalloproteinase (BR) were cloned into the expression vector pET-22b, respectively, and the corresponding two recombinant proteins, A-22b and BR-22b, were produced in inclusion bodies in E. coli BL21(DE3). The recombinant proteins were then subjected to solubilization, purification and refolding in vitro. A-22b showed hemorrhagic activity but no detectable proteolytic activities toward fibrinogen and fibronectin. Natural acutolysin A had both hemorrhagic activity and proteolytic activity toward these substrates. BR-22b showed the proteolytic activities toward fibrinogen, but no hemorrhagic activity. In addition, two chimeric genes, C1 and C2, were constructed and cloned into pET-22b, and the corresponding recombinant proteins, C1-22b and C2-22b, were also expressed in inclusion bodies. C1-22b involved N-terminal 110 amino acids of BR and C-terminal 95 amino acids of acutolysin A, while C2-22b contained N-terminal 108 amino acids of acutolysin A and C-terminal 112 amino acids of BR. The biological activities of C2-22b and C1-22b were similar to those of A-22b and BR-22b, respectively. Our results suggested that N-terminal major subdomain of a snake venom metalloproteinase might play a key role in hemorrhagic activity and have an appreciable effect on the selectivity for protein substrates.

关键词：细胞重组蛇毒液金属蛋白酶出血性机制 cdnas 自溶素蛋白水解活性

山羊促卵泡激素α和β亚单位cDNA的克隆与序列分析

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农业生物技术学报 2003年第4期11卷 432-434页

作者：丁家桐张军强孙怀昌姜勋平扬州大学畜牧兽医学院扬州大学畜牧兽医学院扬州225009

促卵泡素(follicle stimulating hormone, FSH)是由动物脑垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素，由α和β两个糖基化亚单位以非共价键连接而成~[1,2]。使用常规设备和生化方法很难将其分离纯化，在现有的FSH制品中多混杂有上述结构相... 详细信息

促卵泡素(follicle stimulating hormone, FSH)是由动物脑垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素，由α和β两个糖基化亚单位以非共价键连接而成~[1,2]。使用常规设备和生化方法很难将其分离纯化，在现有的FSH制品中多混杂有上述结构相似的激素，使用便利FSH作用机理和应用研究受到限制。重组FSH具有生产成本低、纯度高、生物学活性强和毒副作用低等优点，有取代从尿或垂体组织中提取的天然FSH的趋势~[3]。本研究根据已发表的绵羊FSHα和β亚单位mRNA序列~[4,5]设计引物，采用RT－PCR技术从山羊脑垂体RNA中扩增出编码FSHα和β亚基的cDNA，分别将其克隆入pGEM-T后进行了序列分析，将所获序列转译成氨基酸序列，并与已报道的其它家畜的FSH序列进行了比较。

关键词：山羊促卵泡激素 α和β亚基 RT-PCR cdnas 序列分析

碱茅(Puccinellia tenuifolra)全长cDNA酵母文库中与铝胁迫相关基因的初步筛选

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基因组学与应用生物学 2014年第6期33卷 1310-1318页

作者：孙博卜媛媛张梅华高野哲夫柳参奎东北林业大学东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室盐碱地生物资源环境研究中心哈尔滨150040 东京大学亚洲生物资源环境研究中心东京1880002

利用碱茅全长cdnas酵母表达文库,经不同浓度AlCl3筛选得到19个不同克隆可增强酵母的耐铝性,经过同源性比对后,将这19个对Al3+胁迫敏感的抗性克隆大体分为以下几类:结构功能蛋白、酶类、有跨膜结构的蛋白、与光合作用相关蛋白以及功能未... 详细信息

利用碱茅全长cdnas酵母表达文库,经不同浓度AlCl3筛选得到19个不同克隆可增强酵母的耐铝性,经过同源性比对后,将这19个对Al3+胁迫敏感的抗性克隆大体分为以下几类:结构功能蛋白、酶类、有跨膜结构的蛋白、与光合作用相关蛋白以及功能未知蛋白。为了了解该19个单克隆对于胁迫的耐受特异性,本研究中将这19个克隆与转空载体的酵母分别在以下各种胁迫条件下进一步进行解析:AlCl3、NaCl、H2O2。结果显示大部分筛选所得克隆对AlCl3在浓度为5.5 mmol/L时表现出耐受性。在NaCl、H2O2条件下不同克隆之间表现出不同的耐性。

关键词：碱茅 cdnas 铝胁迫酵母

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野大麦盐胁迫诱导基因的克隆及功能分析

野大麦盐胁迫诱导基因的克隆及功能分析

作者：齐小强中国农业科学院

学位级别：硕士

本试验的目的是寻找与植物耐盐性相关的基因，以便开发我国自主知识产权的抗逆基因资源，利用基因工程的手段培育耐盐新品种。本研究以野生二棱短芒大麦为试材，运用SSH(抑制性差减杂交)的方法比较了正常培养(CK)和430mM NaCl盐溶液胁... 详细信息

本试验的目的是寻找与植物耐盐性相关的基因，以便开发我国自主知识产权的抗逆基因资源，利用基因工程的手段培育耐盐新品种。本研究以野生二棱短芒大麦为试材，运用SSH(抑制性差减杂交)的方法比较了正常培养(CK)和430mM NaCl盐溶液胁迫处理24hrs(T)基因转录水平上的差异，克隆出差异表达的cDNA片段449个，构建了差异表达cDNA文库。进行反向Northern Bloting，鉴定出40个阳性克隆，选取差异表达明显的18个EST进行测序，除去1个重复，共获得17个EST的测序结果，挑选了1个进行RACE，最终得到全长cDNA基因BST16。在此基础上，利用NCBI、TIGR等公共数据库进行生物信息学分析和功能预测。结果表明植物耐盐性涉及到植物的生理生化的多条途径，受到多个基因的调控。本研究所得到的17个EST片段经过分析和功能预测，其中Bst3、Bst9、Bst18涉及了大麦rbcL基因，已知该基因和光诱导、寒冷及渗透胁迫有关;Bst1、Bst6、Bst17、Bst22与大麦在盐胁迫下特意表达的胁迫蛋白基因有关：Bst13、Bst19与逆境环境下，有助于蛋白保持活性的分子伴侣相关蛋白编码基因有关;Bst4编码膜蛋白基因，预测具有蛋白激酶活性;Bst5为线粒体基因组NADH脱氢酶基因片段;Bst8与小麦属植物磷酸乙醇胺转甲基酶基因高度同源;Bst10与一种在水稻和拟南芥中都已经发现的依赖ATP的蛋白酶的ATP结合亚基的编码基因高度同源，该基因编码蛋白很有可能是一种热击蛋白;Bst11为cAMP&cGMP依赖的蛋白激酶编码基因，可能和信号传导有关：Bst12与水稻的异柠檬酸裂合酶编码基因有同源性;Bst20根据分析为转译起始因子相关蛋白编码基因，与蛋白质合成有关。全长基因BST16共有601bp，对其可读阅读框进行分析，发现从93-515位核苷酸的一段序列，包含了启始密码和终止密码，编码一段140个氨基酸的多肽。将全长基因序列与GenBank和TIGR数据库进行比对，其序列与一个编码大麦PSⅡ10kD蛋白469bp片段达到了90％的同源性，与拟南芥PSⅡ多肽516bp的编码序列有65％的同源性，与小麦在干旱胁迫下的一段466bp的cDNA有94％的同源性。对该基因可读框架编码的蛋白进行功能位点和结构功能域的分析，同样证明了该基因为PSⅡ 10kD蛋白编码基因，其氨基酸摘要序列 48刁位含有一个保守的光合系统＊ 10kD蛋白结构域 PSbR，在蛋白的猿基端有一个保守的短链脱氢酶／还原酶家族特征序列ADHSHORT（Short－chain dehydrogenases／reductases family signature），位于94－122位，说明了该蛋白可能具有还原酶活性。综合这些分析可以初步确定该基因为可被逆境诱导的光合系统＊组分 10kD多肽的编码基因，其功能与作物在盐胁迫下的光合作用效率密切相关。

关键词：野生大麦耐盐性 SSH RACE cdnas

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鸡分泌型磷脂酶A2可预示鸡肺部发生炎症

中国家禽 2012年第5期34卷 68-68页

鸡在发生炎症过程中会释放分泌型磷脂酶A2（sPLA2），为分析健康鸡和发病鸡（传染性支气管炎和肺部炎症鸡）sPLA2基因表达情况，突尼斯斯法克斯大学的研究人员首次应用人sPLA2序列扫描鸡基因组来鉴定鸡分泌型磷脂酶A2（ChPLA2），运用RT... 详细信息

鸡在发生炎症过程中会释放分泌型磷脂酶A2（sPLA2），为分析健康鸡和发病鸡（传染性支气管炎和肺部炎症鸡）sPLA2基因表达情况，突尼斯斯法克斯大学的研究人员首次应用人sPLA2序列扫描鸡基因组来鉴定鸡分泌型磷脂酶A2（ChPLA2），运用RT-PCR扩增鸡mRNA，并对同源性cdnas测序。

关键词：磷脂酶A2 分泌型病鸡炎症肺部传染性支气管炎 PCR扩增 cdnas

翻译起点的多样性增加了人类短阅读框架组的复杂性

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生物技术世界 2007年第4期4卷 76-76页

作者： Masaaki Oyama 魏荣瑄（译）

阅读框架（ORFs）是DNA上编码蛋白质的碱基序列，它们位于起始密码（ATG密码）和终止密码之间。令人惊奇的是，一些顺序分析指出，有些cdnas在通常认定的编码区段的上游区至少有一个ATG密码，说明在基因5＇-端的非翻译区（UTRs）存在一... 详细信息

阅读框架（ORFs）是DNA上编码蛋白质的碱基序列，它们位于起始密码（ATG密码）和终止密码之间。令人惊奇的是，一些顺序分析指出，有些cdnas在通常认定的编码区段的上游区至少有一个ATG密码，说明在基因5＇-端的非翻译区（UTRs）存在一些潜在的编码区段。在这项研究中，作者应用了双向纳米LC自动系统，

关键词：非翻译区框架阅读复杂性多样性 cdnas 人类编码蛋白质