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斜带石斑鱼阿片黑素促皮质素原全长cdna克隆及序列分析

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水生生物学报 2003年第6期27卷 625-630页

作者：张为民张利红马广智张勇中山大学生命科学学院广州510275 华南师范大学生命科学学院广州510631

通过构建斜带石斑鱼垂体cdna文库和随机测序 ,克隆了其阿片黑素促皮质素原 (Proopiomelanocortin ,POMC)全长cdna。斜带石斑鱼POMC全长cdna为 86 3bp(含Poly(A) ) ,编码的POMC多肽前体为 2 19aa。氨基酸序列比较分析表明 :斜带石斑鱼POM... 详细信息

通过构建斜带石斑鱼垂体cdna文库和随机测序 ,克隆了其阿片黑素促皮质素原 (Proopiomelanocortin ,POMC)全长cdna。斜带石斑鱼POMC全长cdna为 86 3bp(含Poly(A) ) ,编码的POMC多肽前体为 2 19aa。氨基酸序列比较分析表明 :斜带石斑鱼POMC前体包含有促肾上腺皮质激素 (Adrenocorticotropin ,ACTH) ,α 促黑素 (α melanocytestim ulatinghormone ,α MSH) ,β 促黑素 ( β MSH) ,γ 促脂素 (γ lipotrophichormone,γ LPH) ,β 内啡肽 ( β endorphin)等 ,但缺失了γ 促黑素 (γ MSH)和大部分连接区。斜带石斑鱼POMC与哺乳动物POMC的同源性为 39%— 4 2 %左右 ,与鸟类的同源性为 4 2 %左右 ,与两栖类的同源性为 36 %— 4 1% ,与其他鱼类POMC的同源性为 38%— 77%。斜带石斑鱼和罗非鱼的POMC的ACTH功能区都为 4 0个氨基酸残基 ,而其他脊椎动物为

关键词：斜带石斑鱼阿片黑素促皮质素原 cdna克隆序列分析

苎麻生长素结合蛋白ABP1基因cdna的克隆及表达

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作物学报 2008年第8期34卷 1358-1365页

作者：黄妤刘峰郭清泉张学文湖南农业大学生物科学技术学院湖南长沙410128 湖南农业大学苎麻研究所湖南长沙410128

以苎麻[Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.]栽培种湘苎3号为材料,通过简并引物RT-PCR结合RACE技术克隆了苎麻生长素结合蛋白ABP1基因的全长cdna分子,其序列全长为849bp,编码一段189个氨基酸的推导蛋白质。经基因比对及蛋白质结构分析与已报... 详细信息

以苎麻[Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.]栽培种湘苎3号为材料,通过简并引物RT-PCR结合RACE技术克隆了苎麻生长素结合蛋白ABP1基因的全长cdna分子,其序列全长为849bp,编码一段189个氨基酸的推导蛋白质。经基因比对及蛋白质结构分析与已报道的几种植物生长素结合蛋白有高同源性,认为是苎麻生长素结合蛋白基因cdna,命名为BnABP1。半定量RT-PCR分析结果显示ABP1在苎麻三麻成熟期的茎、叶和芽组织中均有表达,其表达量为芽>叶>茎,相对内标分子18S rRNA的表达量依次为0.755、0.632和0.360。但在根中没有检测到表达,说明该基因更多地表达于细胞生长旺盛的幼嫩组织。

关键词：苎麻生长素结合蛋白 cdna克隆表达分析

克氏原螯虾多巴脱羧酶的cdna克隆、序列分析及表达分布

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云南农业大学学报（自然科学版） 2020年第2期35卷 243-250页

作者：王凯沈秀丽蔺思函杜杰于晓东郭艳波李博杜志强内蒙古科技大学生命科学与技术学院内蒙古包头014010 内蒙古科技大学图书馆内蒙古包头014010

【目的】克氏原螯虾(Procambarus clarkii)属于节肢动物门甲壳纲十足目,也称淡水小龙虾。多巴脱羧酶(dopa decarboxylase)作为小龙虾先天免疫应答中的一种关键酶,在抵御外来病原体的侵害上起到了重要作用。本研究以克氏原螯虾为材料,克... 详细信息

【目的】克氏原螯虾(Procambarus clarkii)属于节肢动物门甲壳纲十足目,也称淡水小龙虾。多巴脱羧酶(dopa decarboxylase)作为小龙虾先天免疫应答中的一种关键酶,在抵御外来病原体的侵害上起到了重要作用。本研究以克氏原螯虾为材料,克隆了Pc-ddc cdna序列并对其进行生物信息学及组织mRNA表达分析。【方法】通过分子生物学技术构建大肠杆菌表达载体,并进行生物信息学分析,同时应用qRT-PCR技术分析其mRNA组织表达分布。【结果】生物信息学分析表明:获得了开放阅读框全长为1425 bp的Pc-ddc基因的cdna序列,编码474个氨基酸残基,多肽的理论分子量为52.99 ku,蛋白分子式为C2384H3689N647O674S25,等电点为5.98,为弱酸性蛋白且N-末端无信号肽。亚细胞定位表明:Pc-DDC蛋白在线粒体中最多;组织表达分析表明:Pc-ddc mRNA在检测的6个组织中差异表达,其中,淋巴组织表达量最高。【结论】本研究为克氏原螯虾等无脊椎动物先天免疫系统的深入探索提供了理论支撑。

关键词：克氏原螯虾多巴脱羧酶 cdna克隆性质分析组织表达

地鳖虫纤溶活性蛋白cdna序列克隆与毕赤酵母表达

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生物技术通报 2009年第11期25卷 140-144页

作者：李兴暖韩雅莉九江学院基础医学院九江332000 汕头大学医学院汕头515041 广东工业大学轻工化工学院广州510090

依据已报道的地鳖虫成熟肽cdna序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675bp地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列。将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115... 详细信息

依据已报道的地鳖虫成熟肽cdna序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675bp地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列。将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符。重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性。

关键词：地鳖虫纤溶活性蛋白基因 cdna克隆毕赤酵母表达

军曹鱼(Rachycentron canadum)生长激素基因cdna的克隆和原核表达

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海洋与湖沼 2011年第3期42卷 409-413页

作者：郝羽邓思平刘丽刘楚吾广东海洋大学水产学院湛江524025 南海水产经济动物增养殖广东普通高校重点实验室广东海洋大学湛江524025

运用同源克隆方法,从军曹鱼脑垂体中分离了生长激素基因(GH)的全长cdna。结果表明,该基因cdna全长862bp,含615bp的开放阅读框(ORF),编码204个氨基酸;其中包括22个氨基酸的信号肽和182个氨基酸的成熟肽。采用T-A克隆构建pMD 18-T-CoGH重... 详细信息

运用同源克隆方法,从军曹鱼脑垂体中分离了生长激素基因(GH)的全长cdna。结果表明,该基因cdna全长862bp,含615bp的开放阅读框(ORF),编码204个氨基酸;其中包括22个氨基酸的信号肽和182个氨基酸的成熟肽。采用T-A克隆构建pMD 18-T-CoGH重组质粒,测序正确后经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切获得CoGH片段,插入表达载体pET-28a,获得pET-CoGH重组质粒并在表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在22.4kDa处有特异性的蛋白条带出现,Western-blotting检测表明已经成功表达了融合蛋白,该蛋白主要以非可溶性的包涵体形式存在于菌体沉淀中。

关键词：军曹鱼生长激素基因 cdna克隆原核表达

桃叶片β-半乳糖苷酶基因全长cdna克隆及原核表达

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园艺学报 2006年第4期33卷 721-724页

作者：卞伟华江昌俊王朝霞安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术重点实验室安徽农业大学生物技术中心安徽合肥230036 安徽教育学院生物系安徽合肥230061

利用RT-PCR和RACE技术,从蟠桃(Amygdaluspersicavar.compressaBean)中克隆出3285bp的β-半乳糖苷酶基因cdna全长,GenBank登录号为AY874412。该cdna2559bp,编码853个氨基酸。将其插入到大肠杆菌表达载体pET-32a(+)中,转化BL21trxB(DE3),筛选重组菌株。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE呈现约115kDa特异表达条带。并通过体外酶促反应分析表达的融合蛋白的生物活性。

关键词：桃 β-半乳糖苷酶 cdna末端快速扩增 cdna克隆原核表达

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互格链格孢多聚半乳糖醛酸酶的cdna克隆

东北林业大学学报 2006年第6期34卷 84-86,113页

作者：张党权谭晓风仲健中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 细胞产品国家工程研究中心

在提取真菌互格链格孢(Alternaria alternata)总RNA的基础上,通过一步法RT-PCR技术,获得了多聚半乳糖醛酸酶(PGase)的cdna,并将其克隆至载体pBluescript SK(-),经双酶切和测序分析后,通过Gen-Bank对其进行序列比对分析。结果表明该cdna... 详细信息

在提取真菌互格链格孢(Alternaria alternata)总RNA的基础上,通过一步法RT-PCR技术,获得了多聚半乳糖醛酸酶(PGase)的cdna,并将其克隆至载体pBluescript SK(-),经双酶切和测序分析后,通过Gen-Bank对其进行序列比对分析。结果表明该cdna序列与已公布的序列存在14个碱基的差异,密码子简并性只导致3个氨基酸的不同,但不影响PGase与多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)的结合能力。研究结果为利用酵母双杂交技术来获得高活性的植物PGIP打下了基础。

关键词：多聚半乳糖醛酸酶 RT—PCR 互格链格孢 cdna克隆

编码中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因的cdna片段克隆和序列分析

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海洋与湖沼 2002年第4期33卷 432-438页

作者：王在照相建海崔朝霞中国科学院海洋研究所青岛266071

于 2 0 0 0年 3月提取中华绒螯蟹眼柄总RNA ,以此为模板 ,根据日本对虾的神经肽Pej SG Ⅳ设计兼并引物 ,进行RT PCR扩增 ,在适宜的反应条件下 ,获得一特异性的产物 ,将该片段克隆到载体中进行测序。结果表明 ,中华绒螯蟹特异性cdna片段... 详细信息

于 2 0 0 0年 3月提取中华绒螯蟹眼柄总RNA ,以此为模板 ,根据日本对虾的神经肽Pej SG Ⅳ设计兼并引物 ,进行RT PCR扩增 ,在适宜的反应条件下 ,获得一特异性的产物 ,将该片段克隆到载体中进行测序。结果表明 ,中华绒螯蟹特异性cdna片段由 2 1 3个碱基组成。在生物信息数据库中查找由该cdna推定的氨基酸序列的相似序列 ,可以发现有大量甲壳动物的CHH家族神经肽与它相似。在所有相似序列中 ,甲壳动物的蜕皮抑制激素 (MIH)与它的相似度最高 ,这一结果提示由中华绒螯蟹的眼柄特异性cdna片段推定的氨基酸序列可能是它的MIH片段。

关键词：中华绒螯蟹蜕皮抑制激素 cdna克隆序列分析生物信息数据库甲壳动物

疣粒野生稻半胱氨酸蛋白酶基因ME085的cdna全长克隆及序列分析

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西北农业学报 2014年第4期23卷 22-27页

作者：陈良李定琴钟巧芳殷富有付坚罗红梅程在全云南农业大学农学与生物技术学院昆明650000 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所昆明650000 云南省农业生物技术重点实验室昆明650000 云南昆明农业部西南作物资源与新种质创制重点实验室昆明650000

为了发掘疣粒野生稻抗性基因,从受白叶枯菌诱导的疣粒野生稻叶片抑制差减文库(SSH文库)中选择抗病相关的EST序列,运用cdna末端快速扩增法(RACE)获得一个基因全长,命名为ME085。通过生物信息学分析表明该基因全长1 171bp,具有一个750bp... 详细信息

为了发掘疣粒野生稻抗性基因,从受白叶枯菌诱导的疣粒野生稻叶片抑制差减文库(SSH文库)中选择抗病相关的EST序列,运用cdna末端快速扩增法(RACE)获得一个基因全长,命名为ME085。通过生物信息学分析表明该基因全长1 171bp,具有一个750bp的开放阅读框,编码249个氨基酸,其理论等电点为5.76,相对分子质量为27 580.1,存在一个明显的半胱氨酸蛋白酶结构域。推测该基因是一个半胱氨酸蛋白酶基因。

关键词：疣粒野生稻 RACE 半胱氨酸蛋白酶 cdna克隆序列分析