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大鼠c-sis基因克隆及其真核表达载体的构建

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中国组织工程研究 2016年第49期20卷 7418-7424页

作者：孙国芳丁浩南昌大学第二附属医院心电诊断室江西省南昌市330006 南昌大学第二附属医院消化内科江西省南昌市330006

背景:原癌基因c-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。假设c-sis可能在受损肝组织的修复和暴发性肝衰竭的治疗中发挥积极作用。目的:构建pc DNA3.1/c-sis真核表达载体,检测其在大鼠正常肝细胞株BRL细胞和在体大鼠肝... 详细信息

背景:原癌基因c-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。假设c-sis可能在受损肝组织的修复和暴发性肝衰竭的治疗中发挥积极作用。目的:构建pc DNA3.1/c-sis真核表达载体,检测其在大鼠正常肝细胞株BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。方法:通过RT-PcR的方法克隆c-sis基因的选全长编码序列,构建pc DNA3.1/c-sis真核表达载体。鉴定无误后经脂质体介导转染到BRL细胞中,并通过将质粒注入尾静脉后导入大鼠肝脏。最后通过荧光定量PcR和Western Blot鉴定其在BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。结果与结论:(1)成功克隆了c-sis基因全长编码区;测序证明pcD NA3.1/c-sis重组真核表达载体构建成功;(2)将其转染至BRL细胞和在体大鼠肝脏,可使c-sis表达升高;(3)实验结果为后续研究c-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的影响提供了先决条件。

关键词：动物,模型基因脂质体转染组织工程实验动物基因病毒载体相关因子模型基因克隆 c-sis 大鼠真核表达载体酶切鼠尾静脉国家自然科学基金

c-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的抑制作用

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广东医学 2017年第12期38卷 1814-1817页

作者：丁浩杜芳腾南昌大学第二附属医院消化内科江西南昌330006

目的探讨c-sis基因对暴发性肝衰竭(FHF)的影响。方法将重组质粒pc DNA3.1/c-sis注射入鼠尾静脉导入大鼠肝脏,48 h后用内毒素(LPS)联合D-半乳糖胺(D-GalN)处理大鼠建立FHF模型;实验分组:正常对照组,FHF+林格氏液注射组,FHF+空载质粒组,FH... 详细信息

目的探讨c-sis基因对暴发性肝衰竭(FHF)的影响。方法将重组质粒pc DNA3.1/c-sis注射入鼠尾静脉导入大鼠肝脏,48 h后用内毒素(LPS)联合D-半乳糖胺(D-GalN)处理大鼠建立FHF模型;实验分组:正常对照组,FHF+林格氏液注射组,FHF+空载质粒组,FHF+c-sis质粒组;利用荧光定量PcR和Western blot检测c-sis的表达;计算实验大鼠的死亡率;利用TUNEL来检测细胞凋亡;检测实验大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量。结果荧光定量PcR和Western blot结果显示,与正常对照组和FHF+空载质粒组比较,FHF+c-sis质粒组的c-sis mRNA和蛋白表达量明显增加(P均c-sis质粒组在24 h的观察期内死亡率仅20.00%。TUNEL检测结果显示,与空白对照组相比,FHF+林格氏液注射组肝脏组织中细胞凋亡增多(Pcsis质粒组肝脏组织中细胞凋亡减少(Pc-sis质粒组的ALT(Pc-sis基因能抑制LPS联合D-GalN诱导的大鼠FHF。

关键词： c-sis 大鼠暴发性肝衰竭

原癌基因c-myc、c-H-ras、c-sis在小鼠卵巢和睾丸中的转录表达研究

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遗传 1998年第5期20卷 2-6页

作者：王晓燕谭德勇周翔昝瑞光云南大学生物系

以地高辛标记ｃ－ｍｙｃ、ｃ－Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｓｉｓ基因作探针，利用组织切片原位杂交的方法，检测了昆明种小鼠５周龄、１０周龄和孕期卵巢，以及１天龄、５周龄和１０周龄睾丸，初步研究了这３种原癌基因在生殖腺中的转录表达及其... 详细信息

以地高辛标记ｃ－ｍｙｃ、ｃ－Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｓｉｓ基因作探针，利用组织切片原位杂交的方法，检测了昆明种小鼠５周龄、１０周龄和孕期卵巢，以及１天龄、５周龄和１０周龄睾丸，初步研究了这３种原癌基因在生殖腺中的转录表达及其可能的功能作用。结果显示：（１）ｃ－ｍｙｃ基因在孕鼠卵巢的个别卵泡的卵泡细胞中有强转录信号，但在３组卵巢的卵母细胞中及３组睾丸切片中均未见杂交信号。（２）ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因在孕鼠卵巢黄体中有较强转录表达，但在３组卵巢的卵母细胞中及３组睾丸切片中均无杂交信号，（３）ｃ－ｓｉｓ基因在１０周龄睾丸曲细精管的精原细胞层和精母细胞有强转录表达，而在１天龄、５周龄睾丸及３组卵巢切片中均无杂交信号。上述结果表明：ｃ－ｍｙｃ基因可能与精子发生和卵子的发育关系不大，但可能与卵泡的退化有关；ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因可能与精子发生和卵子的发育关系也不大，但可能与妊娠黄体的形成有关；ｃ－ｓｉｓ基因可能与卵子的发育无关。

关键词：原癌基因 c-myc c-H-ras c-sis 卵巢睾丸基因

人肺癌组织中c-Ha-ras,c-myc和c-sis基因的扩增

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癌症 1995年第4期14卷 259-261页

作者：何玲詹德进陈家堃易菲吴中亮杜应秀广州医学院化学致癌研究所广州510182

用同位素ａ－３２ＰｄＣＴＰ标记癌基因Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｖ－ｓｉｓ基因片段，通过点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测１７例鳞癌，９例腺癌，６例其它类型肺癌组织和６例非肺癌组织中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ... 详细信息

用同位素ａ－３２ＰｄＣＴＰ标记癌基因Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｖ－ｓｉｓ基因片段，通过点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测１７例鳞癌，９例腺癌，６例其它类型肺癌组织和６例非肺癌组织中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｓｉｓ基因扩增的情况．结果发现：４６．８％（１５／３２）的肺癌组织有Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，其中１０例（５８．８％）鳞癌，３例腺癌（３３．３％）出现Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增。２５％（８／３２）的肺癌组织中出现Ｃ－ｍｙｃ基因扩增，其中４例（２３．５％）鳞癌，３例（３３．３％）腺癌出现Ｃ－ｍｙｃ基因扩增。１８．８％（６／３２）的肺癌组织有Ｃ－ｓｉｓ基因扩增，其中４例（２３．５％）鳞癌，１例（１１．１％）腺癌出Ｃ－ｓｉｓ基因扩增。而６例非肺癌组织都役有这三种癌基因扩增。同时我们也发现有５例肺癌组织（４例鳞癌和１例腺癌）出现两种癌基因的扩增。上述结果提示：Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｓｉｓ基因的扩增与肺癌的发生有关，特别是Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增在肺鳞癌的形成过程中可能起着重要作用。同时还提示：肺癌的发生与两种癌基因的扩增可能有一定关系。

关键词：癌基因基因扩增肺肿瘤 c-Ha-ras c-myc c-sis

大鼠主动脉内皮剥脱后平滑肌细胞增殖和c-sis基因表达的关系

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临床与实验病理学杂志 1994年第2期10卷 152-153,T008页

作者：杨和平刘革修张新华万腊香曾锋杨永宗涂玉林唐朝枢周爱儒汤健衡阳医学院心血管病研究所湖南421001 北京医科大学心血管基础研究所 100083

用Forgarty导管对35只大鼠行主动脉内皮细胞剥脱。在1、5、10、15d时,主动脉平滑肌细胞增生和内膜增厚以及c-sis基因表达随时间的延长而增加。内皮剥脱20d时,内膜增厚的程度与15d时相比变化不大,但c-sis基因表达较15d的低。结果提示,c-... 详细信息

用Forgarty导管对35只大鼠行主动脉内皮细胞剥脱。在1、5、10、15d时,主动脉平滑肌细胞增生和内膜增厚以及c-sis基因表达随时间的延长而增加。内皮剥脱20d时,内膜增厚的程度与15d时相比变化不大,但c-sis基因表达较15d的低。结果提示,c-sis可能在平滑细胞增殖和内膜增厚过程中起重要作用。

关键词：动脉平滑肌细胞 c-sis 基因表达

c-sis基因对过氧化氢诱导大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

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广东医学 2018年第3期39卷 346-349页

作者：张弘英胡树根元文峰丁浩南昌大学第二附属医院消化内科江西南昌330006 南昌新建区人民医院江西南昌330100 乐安县人民医院内二科江西抚州344300

目的探讨大鼠c-sis基因对过氧化氢(H_2O_2)诱导肝细胞凋亡的影响。方法使用脂质体转染法把重组质粒pc DNA3.1/c-sis和空载质粒pc DNA3.1转染进入正常大鼠肝细胞株BRL细胞,转染后的6~8 h用浓度为200μmol/L的H_2O_2处理细胞,作用48 h后... 详细信息

目的探讨大鼠c-sis基因对过氧化氢(H_2O_2)诱导肝细胞凋亡的影响。方法使用脂质体转染法把重组质粒pc DNA3.1/c-sis和空载质粒pc DNA3.1转染进入正常大鼠肝细胞株BRL细胞,转染后的6~8 h用浓度为200μmol/L的H_2O_2处理细胞,作用48 h后收获细胞。细胞分为正常对照组、空载质粒组、c-sis质粒组、H_2O_2组、空载质粒+H_2O_2组、c-sis质粒+H_2O_2组。利用荧光定量PcR检测c-sis的m RNA表达;利用Western blot检测c-sis的蛋白表达和caspase3活性;利用ccK8检测细胞活力;利用TUNEL检测细胞凋亡;利用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果与正常对照组和空载质粒组相比,c-sis质粒组的c-sis m RNA和蛋白表达水平显著升高(P均caspase3蛋白明显升高(Pc-sis质粒+H_2O_2组的细胞活力升高(Pcaspase3蛋白降低(Pc-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(Pc-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P0.05)。结论 c-sis基因能抑制H_2O_2诱导的肝细胞凋亡,并促进其生长。

关键词： c-sis 过氧化氢 BRL细胞凋亡

API_(0134)对凝血酶诱导内皮细胞表达c-sis mRNA/PDGF-B链蛋白的影响

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中药药理与临床 1998年第3期14卷 13-15页

作者：王宏伟赵华月熊一力同济医科大学附属同济医院心内科

用免疫组化和原位杂交方法观察了ＡＰＩ０１３４（ＡＰＩ）对凝血酶诱导猪主动脉内皮细胞表达原癌基因ｃｓｉｓｍＲＮＡ和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白的影响。结果表明，凝血酶能诱导内皮细胞ｃｓｉｓｍＲＮＡ转录和促... 详细信息

用免疫组化和原位杂交方法观察了ＡＰＩ０１３４（ＡＰＩ）对凝血酶诱导猪主动脉内皮细胞表达原癌基因ｃｓｉｓｍＲＮＡ和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白的影响。结果表明，凝血酶能诱导内皮细胞ｃｓｉｓｍＲＮＡ转录和促进ＰＤＧＦＢ链蛋白表达，ＡＰＩ则能显著抑制凝血酶的上述诱导作用，剂量增大抑制作用增强。

关键词： API0134 内皮细胞凝血酶血小板源生长因子抗动脉粥样硬化再狭窄血管成形术免疫组织化学 c-sis mRNA基因 PDGF-B链蛋白

肾性高血压大鼠cGRP、ET及c-sis基因表达的研究

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解剖学研究 1999年第2期 146-146页

作者：谭盛黄如训中山医科大学第一附属医院神经内科广州510282 广州510080 第一军医大学珠江医院神经内科

目的:为了探讨肾性高血压大鼠cGRP、ET及c-sis表达的特点以及它们对高血压的相互影响.方法:用双肾双夹法复制出高血压SD大鼠,14周后比较实验组与对照组的血浆cGRP、ET水平及c-sis基因表达量.结果:肾性高血压大鼠的血浆ET水平、c-sis基... 详细信息

目的:为了探讨肾性高血压大鼠cGRP、ET及c-sis表达的特点以及它们对高血压的相互影响.方法:用双肾双夹法复制出高血压SD大鼠,14周后比较实验组与对照组的血浆cGRP、ET水平及c-sis基因表达量.结果:肾性高血压大鼠的血浆ET水平、c-sis基因表达量明显高于对照组(PcGRP明显低于对照组(PcGRP合成与分泌

关键词：肾性高血压 cGRP c-sis 大鼠 ET

一例急性巨核细胞性白血病和Down氏综合征的c-sis基因表达

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国外医学.输血及血液学分册 1988年第2期 160-160页

作者：杜心垿

新鲜巨核细胞是否有c-sis基因表达尚未阐明,作者发现一例10个月的巨核细胞白血病伴Down氏综合征的病孩的新鲜巨核细胞和建立的细胞株上有c-sis表达。作者用快速印迹法,此白血病的各临床阶段的巨核细胞中均有c-sis表达,而淋巴细胞和其他... 详细信息

新鲜巨核细胞是否有c-sis基因表达尚未阐明,作者发现一例10个月的巨核细胞白血病伴Down氏综合征的病孩的新鲜巨核细胞和建立的细胞株上有c-sis表达。作者用快速印迹法,此白血病的各临床阶段的巨核细胞中均有c-sis表达,而淋巴细胞和其他白血病细胞均无c-sis表达。复发时,外周血及骨髓细胞中的c-sis mRNA水平较治疗前高出5倍以上。另一例5个月的急性巨核细胞性白血病的细胞也有c-sis mRNA表达。将患者的原始细胞培养建立巨核细胞株(cMK)。这种巨核细胞与原来的原始细胞的染色体同样表现为der(17)t(11∶17)。在

关键词：巨核细胞性白血病基因 c-sis 巨核细胞白血病 Down 综合征综合病症