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Developmental expression of c-kit protooncogene in the rat testis

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生殖医学杂志 1997年第S1期6卷 21-26页

作者：贾孟春周丽瀛

In this study very pure type A spermatogonia, pachytene spermatocytes, round sper-matids and Sertoli cells from rat testis were successfully isolated. The expression of the c-kit receptor,a specific receptor for kit ligand (stem cell factor, steel factor), in these four kinds of cells was exam-ined by northern blot- The synthesis of the c-kit receptor by the spermatogonia was established by hy-bridization of total RNA with a specific cDNA for mouse c-kit receptor. Two mRNA transcripts migrat-ing at 4. 8 kb and 12kb were observed. A faint hybridization signal of 12kb transcript could be observed only in pachytene spermatocytes and round spermatids. In contrast, the Sertoli cells did not express c-kit receptor.In order to study the role of c-kit in spermatogenesis in the rat, the pattern of expression of c-kit in testes during the postnatal period was also investigated. Interestingly, the tissue of testis in rat also ex-pressed the same 2 species of mRNA migrating at 4. 8 kb and 12 kb. The testis of adult rat only ex-pressed the 4. 8 kb transcript, but did not expressed 12 kb transcript.These results indicated that the expression of c-kit receptor mainly originated from type A sper-matogonia. The c-kit receptor can be viewed as a marker of type A spermatogonia. After birth, the ex-pression of these rat testis mRNA transcripts that encode for c-kit is differentially regulated. Further-more, the presence of the 4. 8 kb transcript alone in the adult testis suggests that the 12 kb transcript may play a specific role in germ cell differentiation in immature rats.

关键词： c-kit Spermatogonia Testis Rat

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心脏干细胞的分离技术

中华病理学杂志 2010年第8期39卷 555-556页

作者：刘聪况东王国平华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所武汉430030

干细胞再生为心肌组织的研究及心肌梗死的修复带来了新的曙光。近期的研究表明，在成年人和哺乳动物心脏内，均存在原始的、未分化的干细胞，该细胞c-kit阳性，被命名为心脏干细胞（cardiacstemceils）^[1-3]。心脏干细胞在体内外被证... 详细信息

干细胞再生为心肌组织的研究及心肌梗死的修复带来了新的曙光。近期的研究表明，在成年人和哺乳动物心脏内，均存在原始的、未分化的干细胞，该细胞c-kit阳性，被命名为心脏干细胞（cardiacstemceils）^[1-3]。心脏干细胞在体内外被证实可分化为心肌细胞、内皮细胞和平滑肌细胞，并重构心肌组织，改善心功能。

关键词：心脏干细胞分离技术心肌组织干细胞再生 c-kit 平滑肌细胞心肌梗死哺乳动物

不同温度对体外培养精原细胞精子发生相关基因的影响

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中华男科学杂志 2012年第2期18卷 135-139页

作者：朱晶晶王达利李三华邓呈亮孙广峰遵义医学院附属医院烧伤整形外科贵州遵义563003 遵义医学院中心实验室贵州遵义563003

目的:在32℃、37℃温度下体外培养生精细胞,探讨两种温度对精原细胞增殖相关基因的影响,为进一步探讨体腔温度(37℃)导致精子发生障碍的机制提供依据。方法:将分离的大鼠生精细胞分别置于不同温度(32℃、37℃)条件下与支持细胞进行体外... 详细信息

目的:在32℃、37℃温度下体外培养生精细胞,探讨两种温度对精原细胞增殖相关基因的影响,为进一步探讨体腔温度(37℃)导致精子发生障碍的机制提供依据。方法:将分离的大鼠生精细胞分别置于不同温度(32℃、37℃)条件下与支持细胞进行体外共培养,观察其贴壁、增殖、形态学变化;培养第8天采用非连续Percoll密度梯度离心、差异性贴壁分离富集出精原细胞,以实时定量PcR和Western印迹分别检测不同温度下精原细胞c-kit、PI3K的mRNA和蛋白表达水平的变化;对体外培养第8天的精原细胞c-kit基因进行测序检测,了解其突变情况。结果:32℃组、37℃组均可见细胞贴壁、分裂、增殖;32℃组中,精原细胞c-kit和PI3K的mRNA及蛋白表达量均显著高于37℃组(Pc-kit基因第9、11、13号外显子均未见突变,37℃组第11、13号外显子未见突变,在9号外显子附近区域可能有缺失或插入突变。结论:在体外37℃温度下培养生精细胞会抑制精原细胞增殖分化相关基因的表达,同时可能导致精原细胞c-kit基因发生突变。

关键词：精原细胞温度体外培养 c-kit PI3K

骨髓增生异常综合征患者异基因造血干细胞移植后继发慢性肥大细胞白血病现象分析

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检验医学 2023年第10期38卷 971-976页

作者：丁静刘伟玲夏新新蔺丽慧上海交通大学医学院附属第一人民医院检验科上海201600 上海交通大学医学院附属第一人民医院血液科上海201600

目的分析异基因造血干细胞移植后继发慢性肥大细胞白血病骨髓增生异常综合征(MDS)患者肥大细胞形态与预后的关系,以提高临床诊断能力。方法收集异基因造血干细胞移植后继发慢性肥大细胞白血病的MDS患者相关临床表现和诊疗经过等临床资料... 详细信息

目的分析异基因造血干细胞移植后继发慢性肥大细胞白血病骨髓增生异常综合征(MDS)患者肥大细胞形态与预后的关系,以提高临床诊断能力。方法收集异基因造血干细胞移植后继发慢性肥大细胞白血病的MDS患者相关临床表现和诊疗经过等临床资料,分析疾病进展过程中相关实验室检验结果。结果患者移植前无肥大细胞,全相合移植后各项实验室检验结果符合肥大细胞白血病诊断标准;嵌合率检验结果提示患者移植早期处在完全嵌合状态;嵌合率随骨髓肥大细胞比例的升高而下降,处于混合嵌合状态。结论肥大细胞白血病患者肥大细胞的形态相对成熟可能提示预后较好。克隆性造血组织疾病合并系统性肥大细胞增多容易被忽视,导致疾病进展。血液系统肿瘤患者反复出现咳嗽等过敏症状时,应警惕肥大细胞增殖。

关键词：骨髓增生异常综合征造血干细胞移植肥大细胞白血病细胞形态学 c-kit

胃肠道间质瘤细胞系建立及其对c-kit下游抑制剂敏感性研究

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中华肿瘤防治杂志 2019年第11期26卷 764-770,777页

作者：周芳颖冯海凉卞晓翠康维明于健春宗静张丹刘玉琴中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞资源中心北京100005 北京协和医院普外科北京100730

目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶... 详细信息

目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶组织1例进行体外原代培养,连续传代培养>20代进行鉴定,绘制增殖周期生长曲线。免疫细胞化学检测cD117和DOG-1表达,进行染色体核型分析,PcR法检测c-kit基因与PDGFRA基因突变,ccK8法观察c-kit 2种通路抑制剂效果,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PcR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(short tandem repeats, STR)检测鉴定细胞身份。结果可在体外连续传代的人胃肠道间质瘤细胞命名为PUMc-GIST-1,连续传代后细胞可见分枝,呈神经细胞样生长,传代后于第5天到达平台期;cD117和DOG-1表达均阳性;不同代数细胞染色体核型有变化,在38~48条;细胞c-kit基因11号外显子5'端突变热点区有突变V559D,PDGFRA基因12号外显子ccG-ccA突变。单独用药结果显示,不同浓度GDc-0941处理48 h后,PUMc-GIST-1 (F=8.96,Pc-GIST-1细胞增殖能力整体呈现上升趋势,差异有统计学意义,F=9.78,Pc-GIST-1增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDc组吸光度(A)值分别为0.41±0.01和0.37±0.03,差异有统计学意义,F=3.30,P=0.007;GIST-430增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDc组吸光度(A)值分别为2.12±0.11和0.13±0.01,差异有统计学意义,F=158.61,Pc-GIST-1较GIST-430对联合用药低敏感。当AZD与GDc浓度分别为5μmol/L时二者具有协同抑制作用,金正均Q值检验PUMc-GIST-1与GIST-430的q值分别为3.08与3.91,均>1.15。裸鼠体内接种不成瘤;PUMc-GIST-1种属鉴定为人源性,STR结果与原代一致,无支原体污染。结论建立了c-kit突变的PUMc-GIST-1细胞系,该细胞系对c-kit靶向药低敏感,为胃肠肿瘤研究提供了新型细胞系。

关键词：胃肠道间质瘤 c-kit 药物低敏感细胞系 PDGFRA

白术七物颗粒调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制cajal间质细胞凋亡治疗慢传输型便秘机制研究

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辽宁中医药大学学报 2023年第8期25卷 5-9,F0003页

作者：林仁敬郭夏君王梨力罗雯鹏李帅军罗敏肖金银湖南中医药大学第二附属医院湖南长沙410005 湖南中医药大学湖南长沙410208

目的探讨白术七物颗粒抑制cajal间质细胞(Icc)凋亡治疗慢传输型便秘(STc)的作用机制。方法利用洛哌丁胺复制STc小鼠模型,将其随机分成对照组,模型组,白术七物颗粒低、中、高剂量组和普芦卡必利组,另设对照组。白术七物颗粒低、中、高剂... 详细信息

目的探讨白术七物颗粒抑制cajal间质细胞(Icc)凋亡治疗慢传输型便秘(STc)的作用机制。方法利用洛哌丁胺复制STc小鼠模型,将其随机分成对照组,模型组,白术七物颗粒低、中、高剂量组和普芦卡必利组,另设对照组。白术七物颗粒低、中、高剂量组分别灌以不同浓度白术七物颗粒,普芦卡必利组灌以普芦卡必利,对照组与模型组灌胃等体积蒸馏水。HE染色观察结肠组织病理变化,IHc法检测结肠c-kit表达,TUNEL法检测结肠Icc凋亡,WB法检测结肠PI3K、AKT、mTOR蛋白表达。结果与对照组相比,模型组结肠组织结构破坏,c-kit表达显著降低,Icc凋亡显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平显著升高(Pc-kit表达显著升高,白术七物颗粒各剂量组及普芦卡必利组Icc凋亡显著降低,白术七物颗粒低剂量组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,白术七物颗粒中、高剂量组及普芦卡必利组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平显著降低(Pc-kit表达降低,白术七物颗粒低、中剂量组p-PI3K/PI3K水平显著升高,普芦卡必利组p-AKT/AKT水平降低(Pc小鼠结肠组织损伤,促进c-kit表达,抑制Icc凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

关键词：白术七物颗粒慢传输型便秘 cajal间质细胞 c-kit 细胞凋亡 PI3K/AKT/mTOR通路

Involvement of interstitial cells of cajal in experimental severe acute pancreatitis in rats

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World Journal of Gastroenterology 2013年第14期19卷 2179-2186页

作者： Liang-Liang Shi Ming-Dong Liu Min chen Xiao-Ping Zou Department of Gastroenterology Medical Schoolthe Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University

AIM:To observe the changes in interstitial cells of cajal(Icc) in rats with experimental severe acute pancreatitis(SAP).METHODS:A total of twenty-four SD rats were randomly divided into two groups(n = 12),namely the sham(S) group and the SAP group;the SAP rat model was established by retrograde injection of 5% sodium taurocholate(1.0 mL/kg) into the pancreatic duct.Twenty-four hours later intestinal motility was assessed by testing small intestinal propulsion rate,and then the rats were sacrificed.The pancreas and jejunum were resected and underwent routine pathologic examination.Immunohistochemical staining was used to detect c-kit-positive cells in the jejunum.Expression of c-kit mRNA was detected by real-time polymerase chain reaction,and the expression of c-kit protein was evaluated by Western blotting.Ultrastructure of Icc was evaluated by transmission electron microscopy.RESULTS:There was bleeding,necrosis and a largeamount of inflammatory cell infiltration in pancreatic tissue in the SAP group,while in jejunal tissue we observed a markedly denuded mucosal layer,loss of villous tissue and a slightly dilated muscular layer.The small intestinal propulsion rate was 68.66% ± 2.66% in the S group and 41.55% ± 3.85% in the SAP group.compared with the S group,the rate of the SAP group decreased sharply.The density of c-kit-positive cells in the SAP group was significantly lower than in the S group;the respective mean densities were 88.47 ± 10.49 in the S group and 56.11 ± 7.09 in the SAP group.The levels of c-kit protein and mRNA were 0.36 ± 0.04 and 1.29 ± 0.91 in the SAP group,respectively,which were significantly lower than those in the S group(0.53 ± 0.06,0.64 ± 0.33,respectively).In the SAP group,Icc profiles showed the same change tendency,such as vacuolation of mitochondria,irregular vacuoles and loosened desmosome-like junctions.cONcLUSION:Decreased c-kit-positive cells and ultrastructural changes in Icc resulting from blockade of the c-kit signaling pathway are involved in the intestinal dysmotility assoc

关键词： Severe acute pancreatitis c-kit Interstitial cells of cajal Real-time polymerase chain reaction Ultrastructure

白术七物颗粒剂对气阴两虚型慢传输型便秘模型大鼠结肠组织c-kit的影响及其作用机制

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中国全科医学 2017年第21期20卷 2640-2643,2648页

作者：林仁敬鲁海燕何永恒聂晶湖南中医药大学第二附属医院肛肠科湖南省长沙市410005 湖南省斯莱克景达实验动物有限公司湖南省长沙市410100

目的研究白术七物颗粒剂对气阴两虚型慢传输型便秘(STc)模型大鼠结肠组织c-kit的影响,探讨其可能作用机制。方法 2015年9—11月,将70只SPF级SD大鼠随机分成空白组20只、模型组50只,雌雄各半。模型组大鼠皮下注射盐酸吗啡注射液2.5 mg/kg... 详细信息

目的研究白术七物颗粒剂对气阴两虚型慢传输型便秘(STc)模型大鼠结肠组织c-kit的影响,探讨其可能作用机制。方法 2015年9—11月,将70只SPF级SD大鼠随机分成空白组20只、模型组50只,雌雄各半。模型组大鼠皮下注射盐酸吗啡注射液2.5 mg/kg,空白组注射等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续注射45 d。模型组大鼠皮下注射盐酸吗啡注射液15 d后,灌服(青皮、枳壳、附子,剂量13 g/kg),连续30 d,建立气阴两虚型STc大鼠模型。模型建立成功后,将模型组剩下的40只大鼠随机分为模型对照组,白术七物颗粒高、低剂量组和莫沙必利组,每组10只,雌雄各半。除空白组、模型对照组外,白术七物颗粒高、低剂量组和莫沙必利组给予相应的药物灌胃。应用RT-PcR、免疫组化法检测白术七物颗粒剂对气阴两虚型STc模型大鼠结肠组织c-kit影响。结果模型组样本大鼠肠道推进率低于空白组样本(Pc-kit mRNA表达水平高于模型对照组(Pc-kit mRNA表达水平低于白术七物颗粒高剂量组(Pc-kit表达水平高于模型对照组(Pc模型大鼠的作用机制是通过增加结肠组织中c-kit表达水平来实现的。

关键词：便秘气阴两虚大鼠 c-kit

膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第1期16卷 6-11页

作者：王大刚郑国光种靖慧马翠花林永敏吴克复中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-ScF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-ScF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PcR法去除外显子6序列,进... 详细信息

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-ScF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-ScF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PcR法去除外显子6序列,进一步构建m-ScF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PcR、Western blotting法鉴定。通过ccK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-ScF和m-ScF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均PcF与c-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。

关键词：膜结合型干细胞因子 c-kit 白血病并置性作用