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c-ski调控p38信号通路在TGF-β1介导人冠状动脉内皮细胞内皮间充质转化中的作用研究

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医学分子生物学杂志 2022年第1期19卷 41-46页

作者：韩素霞盛乐智杜焕华朱频陆铮崔珍玉上海市浦东新区人民医院心内科上海市201200

目的探索c-ski蛋白在人冠状动脉内皮细胞内皮间充质转化过程中的表达特征及其调控p38信号通路的机制,为心肌纤维化提供新的预防和治疗的靶点。方法以人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HcAEcs)为研究对象,采... 详细信息

目的探索c-ski蛋白在人冠状动脉内皮细胞内皮间充质转化过程中的表达特征及其调控p38信号通路的机制,为心肌纤维化提供新的预防和治疗的靶点。方法以人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HcAEcs)为研究对象,采用转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)诱导构建内皮细胞间充质转化模型,利用实时荧光定量PcR(quantitative real-time PcR,Q-PcR)、蛋白免疫印迹法检测c-ski和内皮间充质转化相关标志物的表达。结果Q-PcR和Western印迹实验结果显示,c-ski表达水平随着TGF-β1诱导浓度的增高而显著降低(Pc-ski后,TGF-β1诱导的vimentin、α-SMA的表达降低,cD31的表达升高,表明TGF-β1诱导的HcAEcs细胞内皮间充质转化被抑制。p38选择性抑制剂SB203580处理后,HcAEcs细胞内皮间充质转化程度进一步加深;c-ski过表达后,p38通路被激活;p38选择性抑制剂SB203580可一定程度回复c-ski过表达对TGF-β1诱导的HcAEcs细胞内皮间充质转化的抑制作用(Pc-ski可通过调控p38信号通路抑制TGF-β1介导人冠状动脉内皮细胞内皮间充质转化。

关键词： c-ski 内皮间充质转化 p38信号通路冠状动脉内皮细胞

微小RNA-21靶向抑制c-ski在转化生长因子-β1介导人冠状动脉内皮细胞上皮间充质转化中的作用

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岭南心血管病杂志 2022年第4期28卷 355-360页

作者：韩素霞朱频盛乐智杜焕华陆铮崔珍玉上海市浦东新区人民医院心内科上海201200

目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-21靶向调控核蛋白c-ski与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HcAEc)上皮间充质转化的关系。方法TGF-β1诱导HcAEc,荧光定量聚合酶链式反应(PcR)检测上皮基因标记cD31、间充质基因标记波形蛋白(VIM)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、miR-21及c-ski表达变化。在HcAEc中过表达c-ski或抑制miR-21,分析TGFβ1诱导HcAEc表型变化。荧光素报告系统证实miR-21在HcAEc中对c-ski的调控作用。结果随着TGF-β1诱导浓度增加,各基因表达呈现剂量依赖性变化。其中,20 ng/mL TGF-β1处理组细胞与未处理组(0 ng/mL)细胞比较,内皮标志物cD31表达下降为(0.150±0.031)倍;细胞间充质标记物波形蛋白表达升高为(7.51±0.78)倍、α-平滑肌肌动蛋白的表达为(15.03±0.78)倍;c-ski表达下降为(0.20±0.040)倍,miR-21表达增加为(6.47±0.40)倍。过表达c-ski组或miR-21抑制物组与对照组比较,cD31水平显著增高[分别为对照组的(5.80±0.60)倍和(4.73±0.28)倍],而波形蛋白[分别为(0.420±0.013)倍和(0.300±0.064)倍]、α-平滑肌肌动蛋白[分别为(0.450±0.053)倍和(0.450±0.028)倍]表达水平减低,差异具有统计学意义(Pc-ski或miR-21抑制物与TGF-β1联合处理组的cD31、波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达水平比较,差异无统计学差异(P>0.05)。HcAEc过表达miR-21,c-ski转录水平较对照组显著较少,差异有统计学意义(Pc-ski-3′UTR野生型报告载体的相对荧光强度显著低于对照组,差异具有统计学意义(Pc-ski-3′UTR突变型报告载体的相对荧光强度与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.01)。结论TGF-β1诱导HcAEc发生间充质转化过程中,miR-21逐渐上调,而c-ski表达下降,且miR-21可靶向抑制c-ski表达。抑制miR-21或过表达c-ski可阻止TGF-β1诱导HcAEc发生间充质转化。

关键词： miR-21 c-ski TGFβ1 心肌纤维化上皮间充质转化

c-ski对冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化的影响

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中国病理生理杂志 2019年第10期35卷 1762-1768页

作者：王娟幸世峰吕忠英李鹏李红建罗梅新疆医科大学第五附属医院心血管内科

目的:探讨核蛋白c-ski对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-ski、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋... 详细信息

目的:探讨核蛋白c-ski对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-ski、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及内皮细胞标志物E-钙黏蛋白的表达。使用携带c-ski基因的慢病毒转染冠脉内皮细胞后采用RT-qPcR验证转染效率。将细胞分为4组:对照组、TGF-β1(5μg/L)组、c-ski基因感染+TGF-β1组及对照病毒感染+TGF-β1组。过表达c-ski后,MTT实验和集落形成实验检测冠脉内皮细胞的增殖能力,Western blot检测波形蛋白、α-SMA、E-钙黏蛋白、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白的水平。结果:TGF-β1处理冠脉内皮细胞后,c-ski在冠脉内皮细胞中的表达呈剂量和时间依赖性下降(Pc-ski可显著抑制冠脉内皮细胞增殖(Pc-ski可显著下调冠脉内皮细胞中α-SMA和波形蛋白的表达量(Pc-ski表达下调,而过表达c-ski能够抑制冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路活性有关。

关键词： c-ski 细胞增殖内皮-间充质转化 TGF-β1/Smad信号通路冠状动脉内皮细胞

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

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四川大学学报（医学版） 2008年第2期39卷 173-176页

作者：刘霞李平张恩刘苹周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心重庆400042

目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PcR... 详细信息

目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PcR检测型胶原分泌、α-SMA细胞免疫组化检测肌成纤维细胞分化的改变。结果大鼠皮肤成纤维细胞内有c-ski蛋白的表达,且主要表达在细胞核内,c-ski可以以剂量依赖的方式增加皮肤成纤维细胞的增殖活力,并可降低型胶原蛋白和mRNA的水平,但不改变皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程。结论c-ski促进细胞增殖但降低胶原分泌的作用可能对促进创伤愈合、降低瘢痕形成有着重要的意义。

关键词： c-ski 成纤维细胞胶原分化

c-ski通过抑制TGF-β1/SMAD和p38 MAPK通路改善犬心房结构重构

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第10期37卷 910-916页

作者：韩素霞王娟高苏莉盛乐智李耀上海市浦东新区人民医院心内科上海201200 新疆医科大学第五附属医院心内科新疆乌鲁木齐830001

目的探讨c-ski在犬快速心房起搏诱导的心房结构重构的作用和机制。方法采用实时定量PcR检测心房颤动(AF)患者心房组织中c-ski、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原蛋白(col3)的mRNA表达,采用Pearson相关分析评价其相关性。构建犬心房... 详细信息

目的探讨c-ski在犬快速心房起搏诱导的心房结构重构的作用和机制。方法采用实时定量PcR检测心房颤动(AF)患者心房组织中c-ski、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原蛋白(col3)的mRNA表达,采用Pearson相关分析评价其相关性。构建犬心房快速起搏模型,免疫组织化学染色检测α-SMA和col3表达和分布,ELISA检测各组犬血清和心房组织中炎症因子白细胞介素18(IL-18)和Toll样受体4(TLR4)水平。通过过表达c-ski,Western blot法检测c-ski对α-SMA、col3、转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD通路和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的调控作用。结果c-ski在AF患者心房组织表达下调,且与α-SMA和col3在AF中表达呈负相关。犬心房快速起搏模型的心房组织c-ski表达也下调。过表达c-ski能够明显抑制犬心房组织α-SMA和col3表达,并降低血清和心房组织中IL-18和TLR4含量,并抑制TGF-β1/SMAD和p38 MAPK通路。结论过表达c-ski通过抑制TGF-β1/SMAD和p38 MAPK通路改善心房快速起搏诱导的心房重构。

关键词：房颤心房结构重构快速心房起搏 c-ski TGF-β1/SMAD p38 MAPK

c-ski对创伤性脑损伤后小胶质细胞活化的抑制作用研究

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免疫学杂志 2019年第3期35卷 230-235页

作者：翟羽李平周元国陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第七研究室重庆400042

目的观察c-ski对小胶质细胞活化的影响,以探讨其对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后炎症反应的调节作用。方法在小鼠中度TBI后的第1、3、7天,IBA-1免疫荧光检测伤周组织中活化小胶质细胞数量、形态改变;ELISA检测炎症因子白... 详细信息

目的观察c-ski对小胶质细胞活化的影响,以探讨其对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后炎症反应的调节作用。方法在小鼠中度TBI后的第1、3、7天,IBA-1免疫荧光检测伤周组织中活化小胶质细胞数量、形态改变;ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量变化;免疫荧光、Western blot检测c-ski蛋白水平变化;然后转染腺病毒过表达c-ski,观察上述指标的变化。结果在TBI后,伤周组织活化小胶质细胞数量与IL-1β、TNF-α含量均升高并在伤后1 d达高峰,伤后3 d时开始下降(Pc-ski表达,其水平在TBI后3 d达高峰(Pski过表达则抑制了TBI后1 d、3 d伤周组织活化小胶质细胞的数量(Pc-ski可能通过抑制小胶质细胞活化而发挥抑制炎症反应的作用。

关键词：创伤性脑损伤 c-ski 小胶质细胞 IL-1β TNF-α

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响

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中华放射医学与防护杂志 2006年第2期26卷 141-143页

作者：刘霞李平张恩刘苹周萍周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心重庆400042

目的研究原癌基因c ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响,并探讨其可能的机理。方法采用Annexin V FITc PI标记的方法,通过流式细胞仪检测2～8Gy的软X线照射对培养的大鼠皮肤成纤维细胞凋亡的影响;观察转染c ski基因后细胞凋亡的变... 详细信息

目的研究原癌基因c ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响,并探讨其可能的机理。方法采用Annexin V FITc PI标记的方法,通过流式细胞仪检测2～8Gy的软X线照射对培养的大鼠皮肤成纤维细胞凋亡的影响;观察转染c ski基因后细胞凋亡的变化;并采用Westernblot检测c ski对凋亡蛋白Bax、Bcl2表达的影响。结果软X线照射以剂量依赖的方式增加细胞凋亡,并且随着时间的延长进一步增加,大约在36h时达到峰值。转染c ski基因使4Gy照射24h后的成纤维细胞凋亡率显著下降。转染c ski基因48h后,Bax的表达和对照组差异无统计学意义,而Bcl2的表达显著增加。结论c ski可降低成纤维细胞的辐射敏感性,促进Bcl-2的表达可能是其机理之一。

关键词： c-ski 成纤维细胞辐射凋亡抗辐射作用

Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PcR的建立

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解放军医学杂志 2009年第10期34卷 1221-1224页

作者：李平刘苹熊仁平赵艳朱敏周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PcR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PcR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设... 详细信息

目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PcR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PcR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PcR引物,建立SYBRgreen定量PcR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-skimRNA表达水平。结果获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171)。建立的SYBRgreen定量PcR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.99149。体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样品中c-skimRNA水平为(1.02±0.18)×106拷贝/μl。结论新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PcR的建立。

关键词： c-ski 克隆分子序列分析聚合酶链反应

靶向调控c-ski的microRNA的筛选及验证

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基础医学与临床 2020年第1期40卷 60-66页

作者：王娟李鹏吕忠英张颖曹桂秋新疆医科大学第五附属医院心血管内科

目的筛选和验证靶向调控c-ski并与纤维化相关的microRNA(miRNA)。方法生物信息学方法预测并结合文献报道,筛选出靶向c-ski的候选miRNAs,RT-qPcR检测人心肌成纤维细胞(HcFBs)中候选miRNAs和c-ski的表达,筛选出抑制作用最显著的miRNA;构建... 详细信息

目的筛选和验证靶向调控c-ski并与纤维化相关的microRNA(miRNA)。方法生物信息学方法预测并结合文献报道,筛选出靶向c-ski的候选miRNAs,RT-qPcR检测人心肌成纤维细胞(HcFBs)中候选miRNAs和c-ski的表达,筛选出抑制作用最显著的miRNA;构建c-ski-3′-UTR野生型(c-ski-wt)和突变型(c-ski-mut)载体,分别与miR-155a-5p/miR-17a-5p的模拟物、抑制剂及对照在人胚肾上皮细胞(HEK293T)中共转染,双萤光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性;接着,分别将miR-155a/miR-17a-5p mimics和inhibitor转染至人心肌成纤维细胞(HcFBs),Western blot检测各组细胞c-ski的表达。结果 1)经筛选miR-155a-5p和miR-17a-5p对c-ski的抑制作用最明显(Pc组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组萤光素酶活性均显著下降(Pc组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组中c-ski蛋白表达显著下调,miR-155a-5p/miR-17a-5p inhibitor组中c-ski的表达显著上调(Pc-ski的3′-UTR,在HcFBs中负性调控c-ski的表达。

关键词： c-ski miR-155a-5p miR-17a-5p 双萤光素酶报告系统心肌纤维化