检索结果-南通市图书馆

分子植物育种 2021年第7期19卷 2243-2255页

作者：张竹君任文娟耿子雯付鲁峰李伟姜新强刘庆华青岛农业大学园林与林学院青岛266109

月季(Rosa hybrida)是全球重要的观赏植物,其生长发育和生产质量严重受到干旱胁迫的制约。在已有月季转录组数据的基础上,干旱胁迫可以诱导干旱响应基因RD22(dehydration-responsive gene RD22)的表达。为了进一步探究RhRD22参与干旱胁... 详细信息

月季(Rosa hybrida)是全球重要的观赏植物,其生长发育和生产质量严重受到干旱胁迫的制约。在已有月季转录组数据的基础上,干旱胁迫可以诱导干旱响应基因RD22(dehydration-responsive gene RD22)的表达。为了进一步探究RhRD22参与干旱胁迫的分子机制,本研究利用改良的SMART(Switching Mechanism At 5’end of RNA Transcript)技术构建月季干旱胁迫酵母双杂交cdna文库,并利用酵母双杂交技术筛选与RhRD22相互作用的未知潜在蛋白。结果表明:成功构建了高质量月季酵母双杂交cdna文库,该文库库容为3×106cfu;插入cdna片段的长度分布在400~2000 bp,平均长度大于1000 bp;重组率约为100%。此外,利用重组诱饵蛋白p GBKT7-RhRD22在该文库中筛选了7个与RhRD22相互作用的蛋白,包括RhEF-Ts、RhDRT100、RhGAPN、RhLDH、RhAcLA-3、RhcALS3、RhEOL1。互作蛋白的GO注释分析表明,RhRD22可能参与蛋白质多肽链的翻译和延伸、dna修复、代谢反应、乙烯生物合成、蛋白质泛素化、植物防御、应激反应等生物学过程。上述结果为进一步解析RhRD22参与干旱胁迫的分子机制提供了理论参考。

关键词：月季(Rosa hybrida) RhRD22 c dna文库酵母双杂交技术互作蛋白

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梨形狡蛛毒腺转录组学的研究

梨形狡蛛毒腺转录组学的研究

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作者：许寻寻湖南师范大学

学位级别：硕士

梨形狡蛛、褐腹狡蛛是分布于我国广西省靠捕鱼为生的蜘蛛,具有相似的生活习性,都属于盗蛛科、狡蛛属。本实验室对它们毒液的生理生化特征进行了研究,发现二者均对大鼠背根神经节上的钠、钾、钙通道有抑制作用。褐腹狡蛛毒腺转录组学信... 详细信息

梨形狡蛛、褐腹狡蛛是分布于我国广西省靠捕鱼为生的蜘蛛,具有相似的生活习性,都属于盗蛛科、狡蛛属。本实验室对它们毒液的生理生化特征进行了研究,发现二者均对大鼠背根神经节上的钠、钾、钙通道有抑制作用。褐腹狡蛛毒腺转录组学信息已经研究的很清楚,本文解析了梨形狡蛛毒腺转录组学信息,并在此基础上,将二者进行了比较,探讨这两个具有相似生活习性以及分布地域的捕鱼蛛进化关系,深化了对梨形狡蛛的了解。由于粗毒非常有限,不能满足研究需要,使得构建c dna文库成为研究功能基因组学的一种常用手段。本文构建了梨形狡蛛毒腺cdna文库并进行转录组学分析,共获得了267条表达序列标签(EST)。其中71%的EST序列编码毒素多肽,24%的EST序列编码细胞蛋白,5%的序列与任何已知的序列都不存在相似性。去冗余后得到127条类毒素前体肽,根据序列相似性和二硫键排列的差异性,将这些类毒素前体肽划分为七个超家族,并在此基础上对两种蜘蛛的毒素序列、半胱氨酸排布及结构域等方面进行比较。结果表明,虽然某些新颖的毒素序列在两种蜘蛛中独立进化,但是两种蜘蛛的毒素序列高度相似,并且都包含6-12个半胱氨酸,形成了七种不同的排布方式。BLAST比对和结构域预测证明,两种蜘蛛毒液都含有能作用于离子通道的神经毒素,具有很高药理学治疗价值。综上所述,我们推测两种蜘蛛之间有较近的亲缘关系,这对于理解生物多样性和蜘蛛毒素的进化有重要意义。同时,本文还对梨形狡蛛毒腺cdna文库中编码蜘蛛自身蛋白的基因进行KOG注释,分析其蛋白的功能。本文着重强调了两种蜘蛛毒素的进化关系,并且为一些个别毒素将来进行结构和功能方面的研究提供了可靠的基础。

关键词：梨形狡蛛褐腹狡蛛 c dna文库转录组多肽毒素

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吉林省长春地区华支睾吸虫cdna文库的构建及线粒体基因组测序分析

吉林省长春地区华支睾吸虫cDNA文库的构建及线粒体基因组测序分析

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作者：胡凯淞吉林大学

学位级别：硕士

华支睾吸虫作为一种食源性寄生虫,其成虫主要栖息于犬、猫和人等哺乳动物的肝胆管中,引发了以肝硬化、胆管癌等为主要临床特征的华支睾吸虫病。全球范围内,目前已有约3500多万人感染该病,尤其在东亚和东南亚地区呈现高流行趋势。据统计... 详细信息

华支睾吸虫作为一种食源性寄生虫,其成虫主要栖息于犬、猫和人等哺乳动物的肝胆管中,引发了以肝硬化、胆管癌等为主要临床特征的华支睾吸虫病。全球范围内,目前已有约3500多万人感染该病,尤其在东亚和东南亚地区呈现高流行趋势。据统计,中国约有1300万人感染,涉及27个省市,其中包括黑龙江、吉林、广东和广西等。然而,当前研究学者们对华支睾吸虫的细胞周期及分子生物学调节机制了解不足,导致迄今为止尚未找到理想的治疗方法。正因如此,分析华支睾吸虫基因序列特征,对预防和控制人类及其他宿主感染华支睾吸虫具有重要的公共卫生意义。线粒体由于具有自身转录翻译的功能且基因组高度保守,因此,其序列特点有助于分析不同寄生虫之间的特异性、遗传多样性和生态地域性。此外,线粒体基因组的精准注释可以在获取准确序列的基础上提供更多的遗传信息,在揭示线粒体基因组的转录调控和遗传变异机制方面具有重要意义。目前多种寄生虫的线粒体基因组的系统进化分析已经完成。但是华支睾吸虫线粒体结构特点分析研究较少,因此亟待分析华支睾吸虫线粒体的地区差异。此外,多数寄生虫的基因分析正在逐渐步入研究蛋白质功能的后基因组时代。蛋白质的功能研究可以通过分析有特定的蛋白质的功能分析氨基酸序列,进而推测m RNA的核苷酸序列,再由m RNA的核苷酸序列来推测dna的碱基构成。因此c dna文库的建立对于研究华支睾吸虫基因功能研究发挥着重要作用。针对上述科学问题,本研究以华支睾吸虫为实验样本,调查了2022年度长春地区鱼源性华支睾吸虫感染的基本情况。在此基础上,本研究采用Trizol法提取了华支睾吸虫RNA,在通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA质量后,进行m RNA的分离并构建c dna文库。首先,本实验通过对c dna第一链、第二链的合成,并回收目的长度的c dna片段,进行了质量控制。随后,本研究采用同源重组方法,将获得的c dna与p GADT7载体混合,加入All-direct重组酶进行反应。该重组方法不仅提高了文库质量,还方便将文库构建到其他载体上,以构建相应的目的文库。然后,本研究对大肠埃希菌感受态细胞进行了电转化,计数并挑选出单克隆,再通过PcR扩增和电泳检测PcR产物大小,验证文库质量是否合格。除此之外,本研究将华支睾吸虫线粒体序列与NcBI数据库比对,找到近源序列,了解其物种注释基因种类及长度。通过使用mitos2和MFannot注释基因,本研究使用Genetic code选择Echinoderm,Flatworm 9号和Echinoderm and Flatworm Mitochondrial手动校正了起始和终止密码子,并对校正后的注释基因进行BLAST比对,进行二次校正,最终用OGDRAW制作线粒体基因组图谱。本研究通过对c dna文库的质量进行分析,结果显示,长春地区华支睾吸虫的c dna文库的库容为1.2*10^7 cFU,阳性率为100%,符合建库要求。同时,本研究通过将华支睾吸虫线粒体序列结果与NcBI数据库进行BLAST比对,结果显示,长春地区和其他已报道的华支睾吸虫线粒体的ND3序列最高相似度为99.72%,cOX1序列最高相似度为99.94%,ND5序列最高相似度也为99.94%,其余序列较为保守。因此,本研究首次发现长春地区出现了尚未见报道的华支睾吸虫线粒体序列。同时本研究还发现了在华支睾吸虫遗传学的研究中,ND3、cOX1、ND5基因可能是较为理想的分子标记。在此基础上,本研究还使用mitos2工具推测出了t RNA的二级结构,并通过手动比对首次得到了22个t RNA基因,并利用RNA fold工具绘制了r RNA二级结构。最后,以cOX1为基础的进化树分析显示,华支睾吸虫与猫后睾吸虫亲缘关系较近,与东方次睾吸虫以及肝片形吸虫亲缘关系较远。总体而言,本研究首次调查了新冠疫情期间长春地区鱼源性华支睾吸虫的感染情况,并成功构建了华支睾吸虫c dna文库。此外,本研究首次对长春地区华支睾吸虫的线粒体基因序列进行了深入测序和分析,探究了不同地区的华支睾吸虫线粒体序列的差异以及不同吸虫之间的种属差异,并发现了可能较为理想的分子标记。这些实验结果不仅为研究华支睾吸虫蛋白-蛋白之间的相互作用提供了有力工具,还对华支睾吸虫线粒体的结构、组成以及进一步的功能分析打下了坚实基础,也为开发华支睾吸虫病的防控策略提供科学依据。

关键词：华支睾吸虫 c dna文库线粒体基因组测序分析

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ADAMs相关基因在肝癌细胞中的表达及功能分析

ADAMs相关基因在肝癌细胞中的表达及功能分析

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作者：林俊献新乡医学院

学位级别：硕士

背景ADAMs家族成员属于I型跨膜蛋白,具有相似的基本结构,都含有去整合素和金属蛋白酶功能结构域,与细胞外基质的降解,细胞-细胞的黏连,细胞-基质的黏连及信号转导等多种细胞功能有关。虽然对ADAMs家族的功能已经有很多了解,但是由于其... 详细信息

背景ADAMs家族成员属于I型跨膜蛋白,具有相似的基本结构,都含有去整合素和金属蛋白酶功能结构域,与细胞外基质的降解,细胞-细胞的黏连,细胞-基质的黏连及信号转导等多种细胞功能有关。虽然对ADAMs家族的功能已经有很多了解,但是由于其结构复杂,成员众多且组织分布具有特异性,仍需要进一步研究。目的构建去分化处理的常氏肝癌细胞(一种人源肝癌细胞)的c dna文库,免疫筛选并克隆与分化相关的ADAMs基因,并初步研究其功能。方法*** blot方法检测DM(去分化培养基)处理的常氏肝癌细胞中蛋白表达的变化。2.构建DM处理的常氏肝癌细胞c dna文库。3.用通用抗体对文库进行免疫筛选,克隆基因全长并测序分析。4.构建ARP1的原核表达载体,用SDS-PAGE和Western blot方法分析ARP1的功能。5.用蛋白水解酶复性电泳及SDS-PAGE分析大鼠的包括肝在内的17种组织器官的ADAMs的组成及蛋白图谱和蛋白水解酶谱。结果1.与未经处理的常氏肝癌细胞相比,DM处理的常氏肝癌细胞出现了30k D、50k D和105k D三种ADAMs。其中30k D和50k D ADAMs为DM所诱导。2.经检测,成功构建了DM处理的常氏肝癌细胞的c dna文库。3.用ADAMs通用抗体对文库进行了免疫筛选和基因全长克隆,测序分析并注册了4个物种特异性的与ADAMs相关的基因。4.成功构建了ADAM相关基因1(ARP1)的原核表达载体,用活性电泳、Western blot方法分析发现,ARP1表达产物具有偏碱性蛋白水解酶活性,可降解明胶,并且可以和ADAMs通用抗体结合。5.通过分析不同组织器官的ADAMs的分布及蛋白图谱和蛋白水解酶谱,结果显示ADAMs的分布及酶活具有很大差异。结论本研究通过DM处理常氏肝癌细胞,构建c dna文库并进行表达文库免疫筛选等方法,初步验证了DM处理可以诱导常氏肝癌细胞合成30k D和50k D ADAMs;构建的c dna文库质量达标,可用性强;建立了切实可行的表达文库免疫筛选方法;注册了4个物种特异性的与ADAMs相关基因;构建了ADAMs相关基因1(ARP1)的原核表达载体,表达产物具有偏碱性蛋白水解酶活性,可以和ADAMs通用抗体结合。在不同组织器官中,ADAMs的分布及酶活具有很大差异。以上结果为进一步研究ADAMs及其相关基因的功能提供了重要资料。

关键词： ADAMs相关基因常氏肝癌细胞 c dna文库

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