检索结果-南通市图书馆

肿瘤坏死因子受体1和2在胎膜早破胎膜组织中的表达及作用

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中国现代医学杂志 2006年第18期16卷 2789-2791,2797页

作者：李隽周春张元珍武汉大学中南医院妇产科湖北武汉430071

目的探讨肿瘤坏死因子受体1和受体2在胎膜早破发病机制中的作用。方法足月前胎膜早破(早产组)、足月胎膜早破(胎膜早破组)和足月妊娠择期剖宫产(剖宫产组)产妇各8例,采用WesternBlot-ting方法检测其胎膜组织中TNFR1和TNFR2的蛋白表达。... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体1和受体2在胎膜早破发病机制中的作用。方法足月前胎膜早破(早产组)、足月胎膜早破(胎膜早破组)和足月妊娠择期剖宫产(剖宫产组)产妇各8例,采用WesternBlot-ting方法检测其胎膜组织中TNFR1和TNFR2的蛋白表达。结果(1)TNFR1表达:胎膜早破组为(0.2102±0.0157),早产组为(0.2071±0.0178),剖宫产组为(0.1182±0.0058),胎膜早破组和早产组TNFR1表达水平高于剖宫产组,差异有显著性(P0.05);TNFR2表达:剖宫产组为(0.2121±0.0148),早产组为(0.1339±0.0324),胎膜早破组为(0.1164±0.0386),剖宫产组TNFR2表达水平高于胎膜早破组和早产组,差异有显著性(P0.05)。结论胎膜上可能存在TNFR的某种转化途径,胎膜早破的发生可能是由于局部TNF-α水平升高诱导胎膜上TNFR由TNFR2向TNFR1转化,启动胎膜细胞凋亡,从而导致胎膜的破裂。

关键词：早产胎膜早破 westem blotting TNFR1 TNFR2

ERβ基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响

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生殖与避孕 2012年第3期32卷 145-150页

作者：马洁桦安丽梅潘连军黄宇烽南京军区南京总医院解放军检验医学研究所南京210002 南京师范大学生命科学学院南京210046 南京医科大学附属南京市妇幼保健院泌尿男科南京210004

目的:探讨雌激素受体β(ERβ)基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响。方法:选取ERβ基因敲除(ERβKO)雄性小鼠和相应野生型雄性小鼠各12只,随机分为4组:正常对照组(A组)、ERβKO组(B组)、野生型+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)... 详细信息

目的:探讨雌激素受体β(ERβ)基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响。方法:选取ERβ基因敲除(ERβKO)雄性小鼠和相应野生型雄性小鼠各12只,随机分为4组:正常对照组(A组)、ERβKO组(B组)、野生型+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组(C组)和ERβKO+TNF-α处理组(D组)。C组和D组每日给予TNF-α6μg/kg腹腔注射,A组及B组则以等量生理盐水替代,连续14 d。采用RT-PCR技术检测小鼠阴茎组织通路相关分子:eNOS、小窝蛋白-1(caveolin-1)、钙调蛋白(Cam)mRNA表达情况;Western blotting检测小鼠阴茎组织eNOS-NO通路相关分子蛋白表达水平的变化情况。结果:RT-PCR结果与Western blotting结果相符:与A组相比,B组eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P<0.05);TNF-α给药后,与C组比较,D组的eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P<0.05)。结论:ERβ基因敲除后,尤其在内皮损伤因素TNF-α作用下,eNOS-NO通路表达下调,提示ERβ对阴茎海绵窦内皮具有保护效应。

关键词：雌激素受体β(ERβ) eNOS-NO通路 RT-PCR Western blotting

DC-SIGN胞外区基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

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生物技术通报 2011年第2期27卷 187-191页

作者：吕佰瑞刘朝奇三峡大学分子生物学研究所宜昌443002

旨在构建DC-SIGN胞外区基因原核表达质粒,诱导蛋白表达并制备多克隆抗体。用PCR的方法扩增编码DC-SIGN胞外区的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达DC-SIGN胞外区蛋白,用H is抗体做W estern Blottin... 详细信息

旨在构建DC-SIGN胞外区基因原核表达质粒,诱导蛋白表达并制备多克隆抗体。用PCR的方法扩增编码DC-SIGN胞外区的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达DC-SIGN胞外区蛋白,用H is抗体做W estern blotting鉴定目的蛋白的免疫原性。用纯化的DC-SIGN胞外区蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,免疫荧光法检测其特异性。结果显示,原核表达载体pET-28 a(+)-DC-SIGN胞外区基因成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得相对分子质量约20 kD的DC-SIGN胞外区蛋白,经Westernb lotting鉴定为正确。纯化后的蛋白免疫大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫原性和特异性。本研究得到了纯化的DC-SIGN胞外区蛋白,并制备了具有特异性和高效价的抗体,为研究DC-SIGN生物学功能提供试验基础。

关键词： DC-SIGN 蛋白表达多克隆抗体 Western blotting 免疫荧光

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绵羊透明质酸酶-2的真核表达及鉴定

中国畜牧兽医 2012年第11期39卷 35-39页

作者：张月梅么宏强斯日古楞马学恩内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了构建绵羊透明质酸酶-2(hyaluronidase 2,Hyal-2)的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列(登录号:NM_001009754)设计2对引物,并分别在前段上游和后段下游引物5′端引入HindⅢ酶切位点和B... 详细信息

为了构建绵羊透明质酸酶-2(hyaluronidase 2,Hyal-2)的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列(登录号:NM_001009754)设计2对引物,并分别在前段上游和后段下游引物5′端引入HindⅢ酶切位点和BamHⅠ酶切位点,同时在上游引物酶切位点后加入KOZAK序列,进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用重叠(overlapping)PCR技术扩增Hyal-2基因全长。通过连接反应将双酶切并纯化后的目的片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1上,并通过脂质体转染法将构建好的真核表达载体转染牛乳腺上皮细胞,运用RT-PCR及West-ern blotting方法分别从核酸及蛋白质水平验证其表达。经测序分析,目的片段与模板核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为99%,且片段插入方向正确。RT-PCR及Western blotting方法检测均出现目的条带,证明成功构建了绵羊透明质酸酶-2的真核表达载体,并在牛乳腺上皮细胞中获得表达。

关键词：透明质酸酶-2 真核表达 RT-PCR Western blotting

甲状腺功能减退大鼠海马Gs、Gi蛋白α亚基蛋白表达及半硫丸对其的调节作用

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四川中医 2005年第7期23卷 15-16页

作者：方邦江周爽黄建华上海中医药大学附属龙华医院上海200032 上海中医药大学上海200030 复旦大学华山医院中西医结合研究所上海200040

目的:观察甲状腺功能减退大鼠海马组织Gs、Giα亚基蛋白表达的变化及半硫丸对其的影响,探讨半硫丸防治甲减性脑损伤的作用机制。方法:将实验大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模大鼠于每日腹腔注射PTU诱发甲状腺功能减退动物模型后,将... 详细信息

目的:观察甲状腺功能减退大鼠海马组织Gs、Giα亚基蛋白表达的变化及半硫丸对其的影响,探讨半硫丸防治甲减性脑损伤的作用机制。方法:将实验大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模大鼠于每日腹腔注射PTU诱发甲状腺功能减退动物模型后,将造模大鼠进一步随机分为模型组、甲状腺片组、半硫丸组,治疗组分别予相应药物治疗。采用Westernblotting检测技术对每组大鼠脑海马组织Gs、Giα亚基蛋白表达水平进行分析。结果:甲减大鼠海马组织Gsα蛋白的表达水平与正常组比较无显著性差异(P>0·05)。甲减大鼠海马Giα蛋白的表达较正常组显著升高(P<0·01),半硫丸可显著下调甲减大鼠海马Giα蛋白的表达(P<0·01)。结论:甲减大鼠脑海马组织抑制性G蛋白Giα的蛋白表达明显升高,而刺激性G蛋白Gsα的蛋白表达水平无显著性变化,说明甲减脑组织Gsα的含量变化与脑损害的关系不大。半硫丸可以下调甲减大鼠脑组织Giα蛋白的表达水平,通过解除对生长锥的过度抑制,以利于神经突起和突触的改建和塑形,进而促进甲减脑神经元功能的恢复。

关键词：甲状腺功能减退大鼠海马半硫丸 Gs 调节作用 Gi蛋白表达及 α亚基 blotting 蛋白表达水平 Western 脑海马组织抑制性G蛋白正常对照组显著性差异大鼠脑组织神经元功能作用机制实验大鼠动物模型腹腔注射甲状腺片

前列腺癌细胞系中TMSG-1的表达及其意义

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临床与实验病理学杂志 2011年第1期27卷 40-43页

作者：徐晓艳由江峰裴斐北京大学医学部基础医学院病理系 100191 内蒙古医学院病理学教研室呼和浩特010059

目的探讨一种新的肿瘤转移抑制基因TMSG-1(tumor metastasis suppressor gene 1,TMSG-1)在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其意义。方法采用半定量RT-PCR、Western blotting、细胞爬片免疫组化PV-9000法来检测TMSG-1在人不同转移... 详细信息

目的探讨一种新的肿瘤转移抑制基因TMSG-1(tumor metastasis suppressor gene 1,TMSG-1)在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其意义。方法采用半定量RT-PCR、Western blotting、细胞爬片免疫组化PV-9000法来检测TMSG-1在人不同转移潜能前列腺癌细胞系PC-3M-2B4(低转移潜能)和PC-3M-IE8(高转移潜能)中的表达情况。结果 TMSG-1在PC-3M-2B4(低转移潜能)细胞系中的mRNA及蛋白表达量均明显高于在PC-3M-IE8(高转移潜能)细胞系中的表达,具有统计学意义(P<0.05)。结论 TMSG-1在低转移潜能前列腺癌细胞系中的表达明显高于在高转移潜能前列腺癌细胞系中的表达,证明它是一种肿瘤转移抑制基因,有可能成为判断前列腺癌细胞浸润及转移的重要预后指标。

关键词：前列腺肿瘤 TMSG-1 半定量RT-PCR Western blotting 细胞爬片免疫组织化学

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ICOS/Fc在CHO细胞中的稳定表达

第四军医大学学报 2005年第11期26卷 972-974页

作者：杜峻峰王为忠庄然王春艳管文贤第四军医大学西京医院胃肠外科第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:探讨pICOS/Fc融合蛋白基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的稳定表达及其表达产物的纯化和初步鉴定,为其功能研究和临床应用奠定基础.方法:将pICOS/Fc表达质粒及含G418抗性基因neor的质粒pEGFP共转染CHO细胞,经G418抗性培养基筛选、克... 详细信息

目的:探讨pICOS/Fc融合蛋白基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的稳定表达及其表达产物的纯化和初步鉴定,为其功能研究和临床应用奠定基础.方法:将pICOS/Fc表达质粒及含G418抗性基因neor的质粒pEGFP共转染CHO细胞,经G418抗性培养基筛选、克隆化培养、夹心ELISA检测,挑选100%强阳性且表达均一的细胞克隆,扩大培养取上清经ProteinA亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western印迹等进行分子质量、纯度、抗原特异性的初步鉴定.结果:获得稳定表达ICOS/Fc蛋白的CHO细胞单克隆,制备并经ProteinA亲和层析柱获得纯化的ICOS/Fc融合蛋白,SDS-PAGE胶可见一条Mr约70×103的与预期分子质量大小相符的蛋白条带,Western印迹法可在同一位置检测到该蛋白与HRP酶标抗人FcmAb特异结合.结论:在CHO细胞中成功地建立了稳定表达ICOS/Fc融合蛋白的细胞系,表达并纯化了有抗原特异性的重组ICOS/Fc融合蛋白.

关键词：可诱导共刺激分子Fc 融合蛋白亲和层析纯化 Western blotting

高迁移率族蛋白1在子宫肌瘤中的表达及临床意义

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中国现代医学杂志 2011年第5期21卷 608-611页

作者：谢日学吴佳捷周翠香刘洪波萧梅芳谢颖中南大学湘雅医院妇产科湖南长沙410008 中南大学湘雅医院传染科湖南长沙410008 中南大学湘雅医院湘雅医学院湖南长沙410008

目的探讨高迁移率族蛋白1(High mobility group box1,HMGB1)在子宫肌瘤中的表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术、Western blotting法及免疫组织化学SP法检测子宫肌瘤和相应肌瘤旁组织HMGB1 mRNA及该蛋白的表达情况。结果 HMGB... 详细信息

目的探讨高迁移率族蛋白1(High mobility group box1,HMGB1)在子宫肌瘤中的表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术、Western blotting法及免疫组织化学SP法检测子宫肌瘤和相应肌瘤旁组织HMGB1 mRNA及该蛋白的表达情况。结果 HMGB1 mRNA在子宫肌瘤组中表达量高于相应肌瘤旁肌层组,差异有统计学意义(2-△△Ct=12.38>2);子宫肌瘤组HMGB1蛋白水平及阳性表达率均比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),且在肌瘤组中其阳性反应主要定位在细胞核,细胞质未见或仅见轻微的阳性表达。结论 HMGB1及HMGB1 mRNA在子宫肌瘤中表达上调,该蛋白可能与子宫肌瘤的发生、发展存在密切关系;HMGB1阳性反应主要定位在细胞核,HMGB1可能通过核内作用促进子宫肌瘤细胞增殖。

关键词：子宫肌瘤 HMGB1 免疫组织化学法实时荧光定量PCR Western blotting

猪TLR5基因表达水平与F18大肠杆菌侵染关系分析

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中国畜牧兽医 2018年第5期45卷 1163-1169页

作者：赵呈祥戴开宇杜雨露包文斌吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心扬州225009

为了探究猪Toll样受体(Toll-like receptor 5,TLR5)基因表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系,试验通过不同血清型产肠毒素大肠杆菌(F18ab和F18ac)侵染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),同时通过脂多糖(LPS)分别诱导IPEC-J2细胞4和8h,利用实时荧光定... 详细信息

为了探究猪Toll样受体(Toll-like receptor 5,TLR5)基因表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系,试验通过不同血清型产肠毒素大肠杆菌(F18ab和F18ac)侵染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),同时通过脂多糖(LPS)分别诱导IPEC-J2细胞4和8h,利用实时荧光定量PCR检测TLR5基因表达水平变化,并利用Western blotting进行蛋白表达分析。结果显示,不同血清型大肠杆菌(F18ab和F18ac)菌体侵染IPEC-J2细胞后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01);LPS诱导IPEC-J2细胞4和8h后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01),且在LPS诱导IPEC-J2细胞8h后,TLR5基因表达水平明显高于诱导4h。与对照组相比,细胞中TLR5蛋白的表达水平极显著上调(P<0.01),与LPS诱导及F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后mRNA表达水平结果相一致。本研究在细胞水平上分析了TLR5表达水平和F18大肠杆菌侵染的相关性,进一步证实猪TLR5基因的表达水平在细胞抵抗F18大肠杆菌的侵染过程中发挥了重要的调控作用,为今后关于TLR5基因功能及其在大肠杆菌腹泻遗传育种应用的研究奠定基础。

关键词：猪 TLR5基因大肠杆菌 mRNA表达 Western blotting