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NF-κBp65和ICAM-1在口腔扁平苔藓中的表达及相关性

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实用医学杂志 2011年第8期27卷 1344-1347页

作者：宫尚红李成张敬漆明王淑静马爱玲宁夏医科大学研究生院银川市7500041 宁夏石嘴山市第二人民医院口腔科宁夏回族自治区人民医院口腔科银川市7500041 宁夏医科大学附属医院口腔科银川市7500041 宁夏医科大学中心实验室银川市7500041 宁夏医科大学附属医院病理科银川市7500041

目的:研究NF-κBp65、ICAM-1在口腔扁平苔藓和正常口腔黏膜组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学法及蛋白印记法检测30例口腔扁平苔藓组织、15例正常口腔黏膜组织中NF-κBp65、ICAM-1的表达情况。结果:(1)口腔扁平苔藓组织中NF-... 详细信息

目的:研究NF-κBp65、ICAM-1在口腔扁平苔藓和正常口腔黏膜组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学法及蛋白印记法检测30例口腔扁平苔藓组织、15例正常口腔黏膜组织中NF-κBp65、ICAM-1的表达情况。结果:(1)口腔扁平苔藓组织中NF-κBp65和ICAM-1的表达分别较正常口腔黏膜组织显著增加(P<0.01);(2)NF-κBp65和ICAM-1蛋白在口腔扁平苔藓组织中的表达成正相关(r=0.774,P=0.000)。结论:NF-κBp65的激活导致了口腔扁平苔藓中ICAM-1表达的增强,抑制NF-κBp65的活性可能是防治OLP的一种新方法。

关键词：口腔扁平苔藓 NF-κBp65 ICAM-1 免疫组化 Western blotting

益气活血中药对脑出血大鼠脑组织促血管生成素-1蛋白表达的影响

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中华中医药杂志 2009年第2期24卷 224-227页

作者：阳鹤鹏邢之华唐涛刘宜峰陈柏林刘清娥吴汉军中南大学湘雅医院中西医结合研究所长沙410008

目的:通过研究益气活血中药方剂对脑出血大鼠脑损伤区组织促血管生成素-1(Ang-1)表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法:155只SD大鼠被随机分为正常组5只,假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组各30只。用Ⅶ型... 详细信息

目的:通过研究益气活血中药方剂对脑出血大鼠脑损伤区组织促血管生成素-1(Ang-1)表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法:155只SD大鼠被随机分为正常组5只,假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组各30只。用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。各组相应灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物。各组于术后1、4、7、14、21和28d各取5只大鼠,采用Western blotting方法检测Ang-1的表达,结果进行光密度扫描半定量分析。结果:正常组及假手术组不同时间点Ang-1表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Ang-1表达,模型组至21d达到高峰,随后开始下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,活血组及益气活血组至21d仍维持一定的表达水平;各个时间点益气活血组表达均高于其他组。结论:益气活血中药可能通过使脑出血血肿周围脑组织Ang-1的表达增强,而促进脑出血损伤区血管新生和成熟,并促进脑出血大鼠神经功能的恢复。

关键词：脑出血促血管生成素-1 Western blotting 补阳还五汤益气活血法

慢性冷水游泳应激对大鼠海马、前脑皮层神经颗粒素含量的影响

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中华精神科杂志 2005年第3期38卷 174-177页

作者：李欢欢林文娟中国科学院心理研究所脑-行为研究中心北京100101

目的探讨慢性应激对大鼠海马和前脑皮层神经颗粒素(NG)含量的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为应激组(予10℃冷水游泳应激,共2周)、装置对照组和正常对照组,每组10只。于应激前后测量三组大鼠的体质量变化情况,并记录每天应激过程中应激... 详细信息

目的探讨慢性应激对大鼠海马和前脑皮层神经颗粒素(NG)含量的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为应激组(予10℃冷水游泳应激,共2周)、装置对照组和正常对照组,每组10只。于应激前后测量三组大鼠的体质量变化情况,并记录每天应激过程中应激组和装置对照组的排便量以考察应激的强度,应激后以Westernblotting方法测定海马和前脑皮层中的NG含量(以NG含量与βActin含量的比值表示)。结果(1)应激前后,三组大鼠的体质量比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但应激组的体质量增长相对缓慢;(2)应激第4—14天应激组的排便量多于装置对照组(P<0.01);(3)应激组和装置对照组海马的NG含量[分别为(0.66±0.13)和(0.94±0.26)]低于正常对照组[(1.93±0.53)],差异有统计学意义(P<0.01);(4)应激组前脑皮层的NG含量[(0.45±0.00)]低于装置对照组和正常对照组[分别为(2.76±1.74)和(2.87±1.63)],差异有统计学意义(P<0.01);(5)应激组海马NG含量高于前脑皮层(P<0.01);装置对照组海马NG含量低于前脑皮层(P<0.01);正常对照组海马与前脑皮层NG含量的差异无统计学意义。结论慢性应激导致海马和前脑皮层NG含量显著下降;对于时程长、程度严重、适应不良的冷水游泳应激,前脑皮层受损比海马更为严重;而对于时程长、程度微弱的装置应激,海马则比前脑皮层更为敏感。

关键词：应激海马前脑大脑皮质神经颗粒素游泳应激大鼠海马慢性应激脑皮层含量冷水正常对照组 blotting Western方法

HPV11-E7与人干扰素α-2b融合表达质粒的构建及表达

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中华皮肤科杂志 2005年第10期38卷 640-642页

作者：相文忠王飞李光富王新军王群刘丰张兆松毕志刚南京医科大学第一附属医院皮肤科 210029 南京医科大学分子生物研究所广东省人民医院皮肤科

目的构建HPV11-E7与人干扰素a-2b(IFNa-2b)融合基因表达载体,并进行原核表达。方法通过连接肽将HPV11-E7与人IFNa-2b连接并克隆至原核表达载体pE7-32a,进行酶切鉴定及DNA序列分析。将重组质粒转染*** BL21,经IPTG诱导后对其表达产物进行... 详细信息

目的构建HPV11-E7与人干扰素a-2b(IFNa-2b)融合基因表达载体,并进行原核表达。方法通过连接肽将HPV11-E7与人IFNa-2b连接并克隆至原核表达载体pE7-32a,进行酶切鉴定及DNA序列分析。将重组质粒转染*** BL21,经IPTG诱导后对其表达产物进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。结果测序结果表明将HPV11-E7和人IFNa-2b通过连接肽(G-G-S-G-S)_3连接并克隆至pET-32a,且其基因序列与设计完全一致。SDS-PAGE和Western blotting分析结果均显示在相对分子质量约50 000位置可见明显蛋白条带。结论 HPV11-E7与人IFNa-2b融合基因表达载体的成功构建及表达,为今后的相关实验研究奠定了基础。

关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒 E7基因 IFNα-2b 融合基因干扰素α-2b 融合表达质粒 blotting Western 基因表达载体

鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定

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中国畜牧兽医 2020年第1期47卷 201-208页

作者：孔子萌江波蔡云虹何后军李永清靳换江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 北京市农林科学院畜禽疫病研究中心北京100097

为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-... 详细信息

为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1113 bp的ChCR 2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温(16℃)诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR 2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。

关键词： ChCR2基因蛋白表达和纯化多克隆抗体 ELISA 间接免疫荧光 Western blotting

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金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

生命科学研究 2013年第3期17卷 230-237页

作者：李磊杨远柱刘泓杜长青林建中朱咏华刘选明湖南大学生物学院中国湖南长沙410082 湖南亚华种业科学研究院中国湖南长沙410001 福建农林大学资源与环境学院中国福建福州350002

利用简并引物和RT-PCR方法从金针菇(Flammulina velutipes)幼嫩子实体中克隆获得FvGDH全长cDNA序列.构建入门载体pGWC-FvGDH,利用Gateway克隆技术的LR反应构建原核重组表达载体pDESTl7-FvGDH,转化大肠杆菌BL21(DE3).通过IPTG法诱导表达融合蛋白并进行表达条件优化.SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,融合蛋白相对分子质量约为53 kD,与预测的一致.最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.4mmol/L、诱导4 h.融合蛋白表达量较高,实现了FvGDH的高效表达,并利用Western blotting对其特异性进行鉴定.FvGDH基因高效原核表达体系的成功建立,为进一步研究FvGDH的酶促动力学奠定了基础.

关键词： FvGDH Gateway克隆原核表达 SDS-PAGE Western blotting

藤黄酸促进bax和p53表达诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡(英文)

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中国天然药物 2005年第3期3卷 168-172,i002页

作者：顾红燕郭青龙尤启冬刘娓齐琦赵丽袁胜涛张坤中国药科大学生理教研室中国药科大学药物化学教研室中国药科大学新药筛选中心南京210009

目的:观察藤黄酸(gambogicacids,GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果: 采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响,结果表明,藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC 7721 细胞株和QGY 7701细胞株有... 详细信息

目的:观察藤黄酸(gambogicacids,GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果: 采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响,结果表明,藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC 7721 细胞株和QGY 7701细胞株有明显增殖抑制作用,并呈剂量依赖性,而对正常人肝组织L 02细胞株作用相对较弱;光镜及电镜形态学观察结果显示,给予GA后,肝癌细胞发生明显的细胞凋亡形态学变化,如细胞体积变小,细胞核固缩,出现凋亡小体等;采用RT PCR和Westernblotting方法检测baxmRNA以及bax和p53蛋白表达变化,结果表明GA可诱导baxmR NA及bax和p53蛋白表达上调;琼脂糖凝胶电泳显示,给予GA后,SMMC-7721裸小鼠移植瘤组织呈现典型的DNAladder 电泳梯状条带。结论:藤黄酸可显著抑制人肝癌细胞的增殖,其分子作用机制可能通过促进bax和p53表达上调,从而诱导人肝细胞性肝癌细胞凋亡。

关键词：人肝癌细胞SMMC-7721 bax 藤黄酸肝癌SMMC-7721细胞株表达诱导 blotting 分子作用机制肝癌细胞凋亡 Western 琼脂糖凝胶电泳细胞增殖作用 MTT比色法增殖抑制作用 RT-PCR 肝细胞性 mRNA 表达上调剂量依赖性形态学变化

鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株VP1基因克隆、原核表达及抗原性分析

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中国畜牧兽医 2010年第12期37卷 68-73页

作者：向毅勇罗薇靳艳玲刘内生刘群龙虎西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 中国科学院成都生物研究所成都610041

应用巢氏PCR(nested-PCR)扩增出1型鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株结构蛋白VP1基因片段,将VP1克隆到pMD18-T载体上,测序结果为714 bp,GenBank登录号:GU363950。对MY株VP1基因编码蛋白的主要抗原位点进行预测,aa208-aa222氨基酸区段表现很高... 详细信息

应用巢氏PCR(nested-PCR)扩增出1型鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株结构蛋白VP1基因片段,将VP1克隆到pMD18-T载体上,测序结果为714 bp,GenBank登录号:GU363950。对MY株VP1基因编码蛋白的主要抗原位点进行预测,aa208-aa222氨基酸区段表现很高的亲水性、抗原指数和表面可及性。VP1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得重组质粒pET-VP1,转入BL21 PLyss(DE3)细胞中,IPTG诱导后SDS-PAGE检测结果表明,在大肠杆菌中表达了1个相对分子质量为47 ku的融合蛋白。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白可与鸭肝炎标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。

关键词：鸭肝炎原核表达 SDS-PAGE Western blotting

p120ctn亚型在肺鳞癌、腺癌中表达及意义

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中国肺癌杂志 2008年第2期11卷 189-193页

作者：苗原刘洋王妍王恩华中国医科大学基础医学院病理学教研室中国医科大学附属第一医院病理科

背景与目的已有的研究显示:p120ctn(p120 catenin)与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,本研究通过观察p120ctn各亚型在肺鳞癌、腺癌和相应的癌旁肺组织中蛋白表达量的变化,探讨p120ctn亚型与各临床病理因素的关系。方... 详细信息

背景与目的已有的研究显示:p120ctn(p120 catenin)与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,本研究通过观察p120ctn各亚型在肺鳞癌、腺癌和相应的癌旁肺组织中蛋白表达量的变化,探讨p120ctn亚型与各临床病理因素的关系。方法应用免疫荧光和Western Blot方法检测肺鳞癌、腺癌及对应癌旁正常肺组织中p120ctn各亚型的表达情况。结果与正常肺组织相比,p120ctn在肺癌细胞膜表达减弱,呈现胞膜荧光不连续或缺失,胞浆内存在p120ctn的蓄积。正常肺组织中p120ctn总蛋白量明显高于肺癌组织(P<0.001)。p120ctn蛋白以亚型1(120KD)和亚型3(100KD)表达为主,而在肺癌组织则出现1、3亚型表达缺失或减弱(P=0.001,P<0.001)。并且亚型3的这种缺失或减弱的现象与肺癌的淋巴结转移负相关(P=0.005)。结论p120ctn亚型1和3的蛋白表达的减弱或缺失是肺癌的普遍现象,且这种现象与淋巴结的转移相关。

关键词： p120ctn 肺肿瘤荧光抗体技术 Western blotting