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2021年中国肿瘤标志物学术大会暨第十五届肿瘤标志物青...

作者： Wa Ding Xian Ping Shi Guangzhou Medical university

Aims: Colorectal cancer is one of the most common malignant tumor of digestive tract. 5-Fluorouracil（5-Fu） is the first line therapy for patients with colorectal cancer（CRC）. However, acquired resistance limits the application of 5-Fu in clinical. NF-кb pathway activation, deubiquitinase mediated chemoresistance and redox homeostasis damage are responsible for 5-FU resist. Yet the specific mechanism of drug resistance is still unclear. To improve CRC patients survival, it’s urgently needed to identify novel drug targets and effective therapeutic agent.b-ap15 is an alternative molecular inhibitor targeting 19 S deubiquitinase USP14 and UCHL5, showing efficacy in several other cancer types. This assay first reports the cytotoxicity effect and its mechanism of b-ap15 in 5-FU sensitive and resistant ***: Cell lines including two pairs of CRC and its 5-FU resist cell lines（RKO/RKO 5-FU-R,HCT15/HCT 15 5-FU-R） were used in the current study. Cell viability was measured by MTS assay. Flow cytometry with Annexin V-fluoroisothiocyanate（FITC）/PI double staining were applied to test apoptosis level of b-ap15 treated CRC and 5-FU resist CRC cell lines. Cell proliferation was evaluated by plate clone formation assay and EdU incorporation assay. The mitochondrial membrane potential of b-ap15 treated or untreated cells were evaluated by mitochondrial membrane potential *** and message RNA（mRNA） level were detected by Western blot and RT-qPCR *** were used to detect cell migration and invasiveness. DCF-DA kit was used to measure total reactive oxygen species（ROS）. ELISA was applied to evaluate cell ATP content of b-ap15 treated CRC cells with D-fluorescein potassium salt. Nuclear translocation was observed by immunofluorescence. Mouse xenograft models of Luciferase-RKO and Luciferase-RKO 5-FU-R cells were used to determine in vivo effects of b-ap15 in CRC ***: Compared to non-resistant cell, the expression of mRNA and protein level of USP

关键词： b-ap15 Colorectal cancer Chemoresistance NF-κb ROS apoptosis

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b-ap15克服慢粒细胞白血病对伊马替尼耐药的体内外研究

b-AP15克服慢粒细胞白血病对伊马替尼耐药的体内外研究

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作者：何青焱广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的慢性粒细胞性白血病(CML),简称慢粒,与造血干细胞的染色体异常有关,最典型的是费城染色体长臂上9号染色体与22号染色体的易位,这种易位导致bCR-AbL融合基因的产生,同时产生大量的bCR-AbL融合蛋白,同时酪氨酸激酶被异常激... 详细信息

研究背景及目的慢性粒细胞性白血病(CML),简称慢粒,与造血干细胞的染色体异常有关,最典型的是费城染色体长臂上9号染色体与22号染色体的易位,这种易位导致bCR-AbL融合基因的产生,同时产生大量的bCR-AbL融合蛋白,同时酪氨酸激酶被异常激活。bCR-AbL可以改变骨髓祖细胞,并且驱动95%慢性粒性细胞白血病(CML)病例的发展。bCR-AbL通过激活能够提高细胞增殖和生存的下游通路来促进慢性粒细胞白血病的发展,这些通路包括RAF/MEK/ERK、PI3K/AKT、JAK/STAT等。慢粒的临床分期是:慢性期、加速期、急变期。伊马替尼作为CML和其他表达bCR-AbL的白血病的一线临床用药,它可以与AbL激酶位点结合,进而抑制其底物磷酸化,大部分病人用伊马替尼治疗后,他们在疾病的慢性阶段获得了完整的细胞遗传学反应。然而,在使用伊马替尼治疗病人的分子研究结果表明:仍可检测到bCR-AbL高表达;并且停用伊马替尼治疗后,疾病很容易复发。使用伊马替尼治疗后常常存在许多不良反应,其中比较常见的副作用有肠道反应(恶心、呕吐、腹泻)、水肿、肌肉痉挛、皮疹。骨髓抑制,肝酶水平升高,特别是在慢性粒细胞白血病中,骨髓抑制更常见。伊马替尼作用的时间也很有限,研究还发现伊马替尼耐药可以出现在慢性粒细胞白血病的任何阶段。而伊马替尼耐药会导致疾病复发和病情恶化。伊马替尼耐药有多种机制,而bCR-AbL依赖型的慢性粒细胞白血病的耐药机制是由于AbL基因位点发生了突变(其中最主要的是T315I突变),最终使得伊马替尼不能成功地与AbL激酶位点结合,最终使得下游的通路异常活化。为了克服这种耐药,随后又研究出了第二代酪氨酸激酶抑制剂,最典型的是尼罗替尼、达沙替尼。与伊马替尼相比较,尼罗替尼更能有效地抑制野生型bCR-AbL细胞系和bCR-AbL突变细胞系的增值。同时,它更能减少白血病负担(二者的有效使用剂量都要比伊马替尼小),延长患者的生存期,但是对T315I点突变型确无效。但是与伊马替尼一样,使用尼罗替尼后会引起副作用:3到4级骨髓抑制,同时会引起胆红素和脂肪酶升高。达沙替尼,可以与丝氨酸/苏氨酸激酶(比如TCL家族激酶、促分裂原活化蛋白激酶、受体酪氨酸激酶)结合。达沙替尼能够有效地对抗伊马替尼耐药活性构象的问题(因为它与酪氨酸家族激酶有更好的亲和力)。和尼罗替尼一样,达沙替尼可以抑制大部分野生型和bCR-AbL突变细胞系的增值和激酶活力,但是对T315I位点突变体仍然无效。同时,它也有副作用,尤其是在疾病的急变期,容易引起3-4级骨髓抑制。最近获得批准的帕纳替尼,已经证明了对难治性的慢性粒细胞白血病患者有疗效,帕纳替尼是唯一一个能治疗伴T315I突变患者的酪氨酸激酶抑制剂。但是它的副作用也很明显,它与动脉高压(有时是严重的)和严重的动脉闭塞、静脉血栓栓塞事件的风险增加有关。酪氨酸的持续激活导致慢性粒细胞白血病出现了几种异常变化:改变细胞粘连,抑制细胞凋亡,抑制蛋白酶体降解,有丝分裂原下游通路信号异常激活。所以,如果从bCR-AbL下游通路着手,可能是一个很好的治疗方法。泛素蛋白酶体系统(UPS)对细胞内蛋白的降解有着严格的调控作用。主要包括信号转导,基因表达,细胞周期,复制,分化,免疫反应,细胞的应激反应等等。癌细胞的主要特征是失去了细胞周期的调控,癌细胞失去了DNA修复功能,同时获得的基因的高度突变。最后产生大量的、错误折叠的蛋白,而这些都是具有细胞毒性作用的物质。为了弥补这个严重的问题,癌细胞增强了蛋白酶体系统的高表达,从而消除这些蛋白(也就是说癌细胞的蛋白酶体系统比正常细胞的UPS更活跃)。与没有特异性的溶酶体降解相反的是,蛋白酶体对体内蛋白的降解具有高度的选择性,只有那些被小分子泛素标记过的蛋白方可被降解。泛素蛋白酶体降解蛋白是一个复杂的过程,该过程包括泛素,3种酶,蛋白酶体的参与。其中,泛素是一种具有76个赖氨酸残基的高度保守的蛋白,泛素与底物的赖氨酸结合成一个异肽键,即形成单泛素化底物,随后,底物可以被更多的泛素标记,形成多聚泛素化链。泛素分子有7个赖氨酸,但是与底物蛋白结合的是赖氨酸48号残基,最终导致靶蛋白的降解。泛素其他的残基则负责蛋白的入核出核、DNA修复、基因表达、信号转导、胞吞等作用。蛋白降解的第一步便是泛素与泛素活化酶E1链的形成,这个过程需要ATP水解供能。然后活化的泛素被转运到酶E2(泛素结合酶),复杂的E2酶激活泛素并与特定的E3(泛素连接酶)结合,并将泛素转运到相应的底物。最后一步,就是蛋白酶体降解的过程。蛋白酶体是一种蛋白水解物,细胞核和细胞质中都有。蛋白酶体由三部分组成,其中主要单元是位于中央的空柱状多酶核20S。20S由4个环组成,其中有2个相同的非催化亚基α环,2个催化亚基β环,一起形成了一个αββα结构,20

关键词： b-ap15 凋亡慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药 bcr-Abl

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基于高通量药物筛选研究去泛素化酶抑制剂b-ap15抗骨肉瘤作用及其机制研究

基于高通量药物筛选研究去泛素化酶抑制剂b-AP15抗骨肉瘤作用及其...

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作者：李佳桐中国医科大学

学位级别：硕士

目的:骨肉瘤是一种最常见的恶性骨肿瘤,常发生于25岁以下的年轻人以及60岁以上的老年人。自上世纪七十年代形成了以手术和化疗相结合的针对骨肉瘤的治疗方案,然而,由于化疗药物的耐药性和严重的副作用,这一方案使非转移患者的五年生存... 详细信息

目的:骨肉瘤是一种最常见的恶性骨肿瘤,常发生于25岁以下的年轻人以及60岁以上的老年人。自上世纪七十年代形成了以手术和化疗相结合的针对骨肉瘤的治疗方案,然而,由于化疗药物的耐药性和严重的副作用,这一方案使非转移患者的五年生存率维持在70%,而转移患者的五年生存率只维持在20%。令人遗憾的是,自上世纪七十年代后,骨肉瘤的治疗方案就没有发生大的改变。因此,本研究旨在发现更有效、更安全、副作用更小的抗骨肉瘤药物并揭示其可能的作用机制。研究方法:本研究通过对定制药物库进行高通量药物筛选来发现抗骨肉瘤药物并确定深入研究去泛素化酶抑制剂b-ap15。我们通过CCK-8试验、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验、transwell实验、Western blot和qRT-PCR研究了b-ap15对骨肉瘤细胞的作用。另外,我们还通过建立裸鼠异种移植模型评估了b-ap15在体内对骨肉瘤的治疗作用。之后,我们利用TRap染色和qRT-PCR研究了b-ap15对破骨分化的作用。GEO数据库用于揭示骨肉瘤中USP14和UCHL5的表达。结果:我们发现b-ap15抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导内源性凋亡、G2/M期阻滞和内质网应激,同时在治疗浓度下它对正常成骨细胞几乎没有毒性作用。此外,b-ap15显著抑制裸鼠异种移植瘤模型中的肿瘤发生发展,而不会引起对小鼠主要器官的毒性作用。此外,我们的研究表明b-ap15通过抑制PI3K/Akt/NF-κb通路抑制细胞增殖并诱导凋亡的发生。我们还确定USP14和UCHL5在骨肉瘤中均升高,并且与骨肉瘤的发生和发展密切相关。此外,本研究还发现b-ap15可以有效抑制破骨细胞增殖及破骨分化。结论:本研究首次确定去泛素化酶抑制剂b-ap15是一种有效且安全的具有靶向治疗潜力的抗骨肉瘤药物,且具有针对骨肉瘤等疾病所引起的骨溶解的治疗潜力。此外,我们发现靶向去泛素酶可能是治疗骨肉瘤的潜在策略。

关键词：骨肉瘤药物筛选 b-ap15 USP14 UCHL5 破骨分化

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去泛素化酶抑制剂b-ap15通过上调Noxa诱导食管癌细胞凋亡的机制研究

去泛素化酶抑制剂b-AP15通过上调Noxa诱导食管癌细胞凋亡的机制研...

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作者：陈晓煜郑州大学

学位级别：硕士

去泛素化酶(deubiquitinases,DUbs)是通过水解底物蛋白泛素链之间的链接,对蛋白降解进行反向调节,从而影响或者调节细胞的代谢、分化、增殖等。近年来研究发现,去泛素化酶表达异常或功能改变与肿瘤的发生、发展密切相关。b-ap15是一种... 详细信息

去泛素化酶(deubiquitinases,DUbs)是通过水解底物蛋白泛素链之间的链接,对蛋白降解进行反向调节,从而影响或者调节细胞的代谢、分化、增殖等。近年来研究发现,去泛素化酶表达异常或功能改变与肿瘤的发生、发展密切相关。b-ap15是一种新型的抑制蛋白酶体19S调节亚基相关去泛素化酶活性的小分子抑制剂,在多发性骨髓瘤、结肠癌以及急性髓细胞样白血病模型中显示出良好的抗肿瘤活性。有研究表明b-ap15的靶向底物UCH37在食管癌组织中高表达,并与食管癌的TNM分期、淋巴结转移显著正相关,提示b-ap15可能成为靶向治疗食管癌的候选药物。但是b-ap15在食管癌中的抗肿瘤效果及杀伤肿瘤细胞的分子机制目前尚未有研究。因此通过体外实验明确b-ap15对食管癌细胞的增殖抑制效果,阐明b-ap15在食管癌中可能的抗肿瘤分子机制,为食管癌的诊断和治疗提供新的思路与理论基础。材料与方法1.通过CCK-8、平板克隆形成实验和细胞形态学观察检测b-ap15对食管鳞癌细胞EC1和Kyse 450增殖的抑制作用。2.通过PI染色流式细胞术测定不同浓度的b-ap15(0.4μM、0.6μM、0.8μM)处理食管鳞癌细胞EC1和Kyse 450后,对细胞周期和凋亡的影响,同时用Western blot的方法检测b-ap15作用后细胞周期相关蛋白、促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白的变化。3.使用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定不同浓度的b-ap15(0.4μM、0.6μM、0.8μM)处理对两种肿瘤细胞线粒体膜电位的影响,用FITC-DEVD-FMK探针法检测总凋亡蛋白酶caspase 3的激活情况,Western blot检测c-PARP和c-caspase 3的表达,以DMSO为对照。4.用流式细胞术检测基因沉默Noxa后对b-ap15引起的细胞凋亡率的影响,确定Noxa的作用。5.用Q-PCR的方法测定b-ap15作用后促凋亡相关蛋白Noxa的m RNA水平变化,Western blot检测Myc的表达情况,并用流式细胞术检测调节Noxa基因表达的上游调控分子Myc后对b-ap15引起的细胞凋亡率的影响。用免疫印迹(Western blot)的方法检测沉默Myc(Noxa的上游调控分子)后Noxa蛋白的变化。结果***-8法、形态学观察以及平板克隆实验的结果显示,b-ap15对两种食管癌细胞都有明显的增殖抑制作用,且呈现浓度依赖性。2.细胞周期结果显示,b-ap15处理后EC1和Kyse 450细胞阻滞在G2/M期。同时用Western blot检测细胞周期相关蛋白的变化,发现G2/M期相关蛋白p21、p27和p Wee1增加,而G1期标志性蛋白cyclin A,cyclin D没有明显变化,同时促凋亡蛋白Noxa明显增加,其他促凋亡蛋白家族和抑凋亡蛋白家族的蛋白表达无明显改变改变。*** V-FITC/PI双染法及caspase 3活性检测评估细胞凋亡率,结果表明b-ap15诱发细胞发生明显的凋亡,总凋亡率,包括早期和晚期凋亡率,随药物浓度增高而上升。通过Western blot检测发现b-ap15处理引起凋亡标志性蛋白,如c-PARP和c-caspase 3的表达增加,呈剂量依赖性。JC-1染色流式分析发现b-ap15处理导致线粒体膜电位下降。以上这些结果提示b-ap15促进食管癌细胞凋亡,并且线粒体源性凋亡通路在其中发挥一定的作用。4.Q-PCR检测发现b-ap15处理细胞后促凋亡相关蛋白Noxa的m RNA表达水平明显升高,与Western blot检测结果一致。***干扰沉默Noxa或Myc,细胞的凋亡率均有所下降。Western blot结果显示b-ap15处理后Myc的表达水平增加,RNA干扰沉默Myc后Noxa的表达水平下降。这些结果提示Noxa很可能是b-ap15引起细胞凋亡的关键作用分子。结论1.在食管癌细胞EC1和Kyse 450中,b-ap15通过阻滞细胞周期和促进细胞凋亡抑制细胞增殖。2.b-ap15处理使Myc的表达水平升高,而Myc作为转录因子上调促凋亡蛋白Noxa的表达,进而诱导线粒体依赖的凋亡。

关键词： b-ap15 食管凋亡 Noxa Myc

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新型去泛素化酶抑制剂b-ap15诱导雄激素受体依赖和非依赖的前列腺癌细胞凋亡的研究

新型去泛素化酶抑制剂b-AP15诱导雄激素受体依赖和非依赖的前列腺...

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作者：蔡键钰广州医科大学

学位级别：硕士

背景与目的随着部分患者的病情进展为致命和不能治愈的转移性去势抵抗性前列腺癌(castrate-resistant prostate cancer,CRPC),前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)仍然是男性癌症相关死亡的主要原因。泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-Proteasome... 详细信息

背景与目的随着部分患者的病情进展为致命和不能治愈的转移性去势抵抗性前列腺癌(castrate-resistant prostate cancer,CRPC),前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)仍然是男性癌症相关死亡的主要原因。泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-Proteasome System,UPS)是细胞蛋白质高度特异和选择性降解的途径,通过调节底物泛素化和去泛素化之间的动态平衡来掌控大多数蛋白质的命运。近期研究表明去泛素化酶(Deubiquitinases,DUbs)已成为抗癌治疗的新靶点,它可以调节多种细胞过程,包括细胞周期控制,DNA损伤反应和修复,凋亡,染色质修饰以及各种信号转导途径。硼替佐米(bortezomib/Velcade)是20S蛋白酶体的抑制剂,已被美国FDA批准用于治疗临床多发性骨髓瘤和淋巴瘤等疾病并取得良好的疗效,证实了泛素蛋白酶体系统是肿瘤治疗的一个重要靶点,这也证明UPS组份是一种新型的有效抗肿瘤分子靶标,吸引了研究者对蛋白酶体系统进行更深入的研究和探索,从而寻求更有治疗前景的抗肿瘤药物。雄激素受体(Androgen Receptor,AR)与前列腺癌的发生发展密切相关,它是一种雄激素依赖的转录因子,属于核受体超家族。在前列腺癌中通常能观察到AR基因的扩增和突变,AR信号通路支配前列腺癌的存活,增殖和生长。我们课题组前期研究发现去泛素化酶USP14可以稳定并调节AR,抑制USP14可以促进AR泛素化降解从而抑制AR依赖前列腺癌细胞增殖,但对AR非依赖前列腺癌细胞没有影响。一个新型的小分子b-ap15已被鉴定为19S蛋白酶体USP14/UC HL5(DUbs)的抑制剂,能诱导多种人类肿瘤细胞系的增殖抑制和细胞凋亡。本研究我们拟进一步探讨同时抑制USP14和UCHL5是否对AR产生协同调控作用以及对AR依赖与非依赖前列腺癌的抗肿瘤效应。根据我们的实验结果发现b-ap15可以促进AR的泛素化降解,但这种作用主要是通过USP14的功能抑制,而与UCHL5的功能调控无关,并发现b-ap15通过诱导UPS的抑制、caspases活化、内质网应激与氧化应激的产生引起AR依赖和非依赖性前列腺癌细胞的增殖抑制和凋亡。实验方法1、细胞活力检测:采用MTS法和CCK-8法检测b-ap15对前列腺癌和正常前列腺上皮细胞活力的影响。2、克隆形成实验:克隆形成实验的处理方法同上。用光学显微镜计数大于10个细胞的克隆数。3、细胞凋亡情况检测:采用Annexin V-FITC/Propidium iodide(PI)标记死亡细胞用流式细胞仪分析细胞凋亡情况以及荧光显微镜观察并拍照记录细胞形态学变化。4、Si RNA转染:敲除USP14和UCHL5检测AR的表达。5、Co-IP联合Western bolt:检测相关蛋白的表达。6、线粒体膜电位完整性检测:采用罗丹明123染色法用流式细胞仪分析。7、活性氧检测:采用10μM DCFH-DA对样本进行染色,随后用流式细胞仪分析。8、实时荧光定量PCR:根据Takara试剂盒说明书操作,扩增结束后得到各检测基因的Cq值?9、裸鼠载体实验:SPF级裸鼠右侧腋皮下接种PC-3细胞,b-ap15腹腔注射给药,观察裸鼠体重和肿瘤体积变化。10、免疫组化:检测肿瘤组织中的蛋白表达情况。实验结果1、b-ap15对前列腺癌细胞增殖的影响不同处理浓度(0-5μM)的b-ap15作用于AR依赖前列腺癌细胞LNCa P,22Rv1,AR非依赖前列腺癌细胞PC-3,DU145和前列腺基质细胞WPMY-1 24,48,72 h后,都有不同程度抑制增殖作用,表明b-ap15对前列腺癌细胞和正常细胞的抑制作用没有明显的细胞选择性。此外,克隆形成的结果显示b-ap15抑制了LNCa P和PC-3细胞集落的形成。2、b-ap15诱导细胞周期停滞不同浓度的b-ap15(0,0.5,1,2μM)作用于LNCa P和PC-3细胞24h后进行细胞周期分析。结果表明随着b-ap15浓度的增加,两个细胞系的细胞周期都停滞在G0/G1期。Western blot结果显示,b-ap15可显著降低细胞周期蛋白cyclin D1,CDK6,CDK4,C DK2和p-Rb(G1期到S期的标记蛋白)的表达,并使抑制cyclin-CDK功能的抑癌基因p27表达增加。3、b-ap15诱导caspase依赖的细胞凋亡b-ap15作用于LNCa P和PC-3细胞后Annexin-V/PI阳性率显着增加,出现细胞凋亡的形态学变化。Western blot结果显示,两个细胞系活化的caspase-3,-8,-9都显著升高,PARP出现切割带。4、b-ap15诱导的细胞凋亡与线粒体功能障碍有关细胞凋亡主要通过内源性和外源性两种途径调

关键词： b-ap15 去泛素化酶抑制剂前列腺癌雄激素受体细胞凋亡

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26S蛋白酶抑制剂b-ap15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究

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国际输血及血液学杂志 2015年第3期38卷 185-191页

作者：周俊曹江孟凡静冯浩徐开林徐州医学院附属医院血液科 221002

目的探讨26S蛋白酶抑制剂b-ap15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-ap15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;1... 详细信息

目的探讨26S蛋白酶抑制剂b-ap15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-ap15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-ap15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白（apC）/7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞b细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白（bax）基因、b细胞淋巴瘤/白血病（bcl）-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白（XIap）、周期素依赖性激酶（CDK）1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-ap15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-ap15处理24,48 h后,半数抑制浓度（IC50）分别为（1.52±0.35）μmol/L与（0.54±0.01） μmol/L,RS4;11细胞经b-ap15处理24,48 h后IC50分别为（0.97±0.02）μmol/L与（0.08±0.03）μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-ap15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义（P＜0.001）;使用浓度为1.0 μmol/Lb ap15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义（P＜0.001）;且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-ap15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义（t=11.887,7.449;P＜0.001）.③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-ap15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周期明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义（t=10.672,P＜0.05）;同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义（t=19.053,P＜0.05）.与RS4;11细胞对照组相比,使用浓度为1.0 μmol/L b-ap15处理RS4;11细胞实验组24 h后,RS4;11细胞周期亦明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义（t=13.643,P＜0.05）;同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义（t=6.992,P＜0.05）.④使用b-ap15处理Jurkat细胞与RS4;11细胞24 h后,荧光定量PCR检测结果显示,凋亡相关基因bax、caspase-3 mRNA相对表达水平增高,bcl-2、XIap mRNA相对表达水平减低,同时伴细胞周期相关基因CDK1 mRNA相对表达水平减低,与各自细胞对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;且RS4;11细胞实验组caspase-3 mRNA相对表达水平较Jurkat细胞实验组相比,增高程度更为显著,且差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 b-ap15能有效抑制Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖,并促进其细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调bax与caspase-3基因表达水平、下调bcl-2与XIap基因表达水平相关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平减低相关.

关键词：蛋白酶抑制药细胞增殖细胞凋亡细胞周期 Jurkat细胞 RS4 11细胞 b-ap15

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