检索结果-南通市图书馆

作者：陈瑞佶西北农林科技大学

学位级别：硕士

传统分类认为,小麦贮藏蛋白包括麦谷蛋白（glutenin）和麦醇溶蛋白（gliadin）2大类,小麦贮藏蛋白不仅是人类植物蛋白的重要来源,也是面粉加工品质的决定因素。近年来,随着人们对小麦品质的重视,关于小麦储藏蛋白的研究越来越广泛而深... 详细信息

传统分类认为,小麦贮藏蛋白包括麦谷蛋白（glutenin）和麦醇溶蛋白（gliadin）2大类,小麦贮藏蛋白不仅是人类植物蛋白的重要来源,也是面粉加工品质的决定因素。近年来,随着人们对小麦品质的重视,关于小麦储藏蛋白的研究越来越广泛而深入。尤其是分子生物学和基因组学研究的迅速发展,为小麦品质改良开辟了一条崭新的途径。国内外在这方面已开展了大量研究,并取得了重大进展,生物技术在改良小麦外观品质、加工品质和营养品质等方面已显示出了巨大潜力,相关研究主要集中于小麦储藏蛋白编码基因的发现、定位及转基因技术等。近年来,在小麦胚乳中发现了一类新型的蛋白质,这类蛋白质与燕麦储藏蛋白（avenin）有一定的同源性,故称为类燕麦储藏蛋白（avenin-like）。作为一种特殊的储藏蛋白类型,由于其高冗余的半胱氨酸残基含量,类燕麦储藏蛋白（avenin-like）基因的发现及克隆既是对种子储藏蛋白类型的完善,也为品质的综合改良提供更为多样化的筛选指标;同时,对该类型基因的表达及功能鉴定将为小麦育种工作提供更丰富的分子标记。Kan等经序列比对,揭示了a-型avenin-like蛋白与先前所鉴定的低分子量麦谷蛋白相对应,而且对该类型亚基进行了蛋白组学及蛋白质片段的研究。虽然已对普通小麦近缘种属的b-型avenin-like蛋白展开了克隆及表达分析,并且发现了包含19个半胱氨酸残基的罕见类型,但对该亚基的总体研究尚不够深入,尤其对六倍体普通小麦本身的研究信息也相对贫乏。由于上述类型的蛋白所含的半胱氨酸残基（一般在18个以上）远远超过先前报道的小麦储藏蛋白和燕麦储藏蛋白的含有量,并且如此多的半胱氨酸残基可能会形成更为丰富的分子内或分子间的二硫键,从而可能对面粉的加工品质产生影响。目前对小麦贮藏蛋白亚基的研究主要存在以下四个方面的问题:（1）缺乏有效的蛋白质分离手段。小麦贮藏蛋白家族较为庞大,变异广泛,目前的蛋白纯化技术不仅不能将各个亚基分离开来,同时也不能将麦谷蛋白与醇溶蛋白彻底分离;（2）难以获得能满足体外结构与功能研究所需的蛋白量;（3）缺乏方便、简单、可行的研究方法,可以在短时间内进行贮藏蛋白功能的研究;（4）难以消除不同遗传背景、栽培环境对贮藏蛋白品质效应的影响,使结论具有可重复性。为了分离大量的类燕麦储藏蛋白亚基,本研究从小麦品种“陕253”中分离出类燕麦储藏蛋白的编码基因,利用PCR方法从小麦品种“陕253”中克隆新型avenin-like基因,将克隆的avenin-like基因亚克隆至表达载体,经酶切及测序鉴定后,转化宿主菌Escherichia coli Rosetta-gami B （DE3）,经IPTG诱导表达融合蛋白,并利用Western blot进行检测。结果从小麦品种“陕253”克隆获得3条新avenin-like基因,GenBank登录号分别为GQ903577、GQ903578和GQ903579。序列分析表明,其中GQ903579为假基因,利用所构建的大肠杆菌表达载体,经IPTG诱导,实现了对登录号为GQ903578的基因在原核系统的特异性表达。具体结果如下: 1.克隆了小麦“陕253”的三个类燕麦储藏蛋白亚基基因（GenBank序列号GQ903577、GQ903578、GQ903579）。序列分析表明,其全长均为855bp ,与大麦（Hordeum vulgare）avenin-like基因家族成员相似性最高,介于99.5%-99.7%。初步确定该基因为燕麦储藏蛋白亚基基因。 2.对avenin-like基因编码序列进行比对分析,结果表明,该家族成员的编码序列差异主要表现为重复区段的碱基替换,不存在碱基的插入或缺失（InDel）碱基的多态性同样存在明显的偏好与区域性:信号肽区最为保守;N端以C→G、A→G为主要的替换类型;重复区最为活跃,且以A→T颠换为最高,其次为T→C、G→C、A→G;C端相对稳定,并表现为A→C、G→C的高频颠换。 3.氨基酸序列比对表明,GQ903577和GQ903578可编码284个氨基酸残基的成熟蛋白质,推测相对分子质量约为33 kD,两者之间的错配源于第50位氨基酸V对残基A置换所致;而GQ903577与GQ903579之间的空位则产生于后者在第158位发生的氨基酸无义突变（Q→*）,从三联体密码角度看,GQ903579发生了谷氨酰胺密码子第一位碱基的转换（CAA→TAA）,从而导致终止密码的出现,推测GQ903579为avenin-like假基因,不能编码有功能的成熟蛋白质。 4.将该基因亚克隆到预先构建的高效表达载体上,阳性质粒pET32a-avenin-S253经IPTG诱导,在宿主菌Rosetta gami B（DE3） plysS中进

关键词：小麦陕253 avenin-like基因基因克隆载体构建融合蛋白原核表达

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小麦及其近缘物种中类燕麦储藏蛋白avenin-like基因的克隆综述

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安徽农业科学 2015年第8期43卷 40-42页

作者：孙杨柳湖北省恩施州生产力促进中心湖北恩施445000

介绍了小麦的品质及品质的形成、小麦的储藏蛋白及储藏蛋白的分类。综述了近年来关于类燕麦储藏蛋白avenin-like基因发现、avenin-like基因的胚乳特异性表达的时空表达模式以及avenin-like基因的启动子的作用元件和时空表达特异性研究。

关键词： avenin-like基因胚乳特异性表达启动子

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小伞山羊草中新型avenin-like基因的克隆及真核表达载体的构建

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生物技术通讯 2008年第6期19卷 874-876页

作者：陈鹏汪长东汪越盛常俊丽杨广笑何光源华中科技大学生命科学与技术学院中英联合实验室湖北武汉430074

目的:克隆小伞山羊草中新型avenin-like(类燕麦储藏蛋白)基因,揭示avenin-like基因的表达模式,并构建avenin-like基因真核胚乳特异性表达载体。方法:利用RT-PCR方法揭示avenin-like基因的表达模式,并用PCR方法从小伞山羊草中克隆新型ave... 详细信息

目的:克隆小伞山羊草中新型avenin-like(类燕麦储藏蛋白)基因,揭示avenin-like基因的表达模式,并构建avenin-like基因真核胚乳特异性表达载体。方法:利用RT-PCR方法揭示avenin-like基因的表达模式,并用PCR方法从小伞山羊草中克隆新型avenin-like基因;将克隆的avenin-like基因插入表达载体pLRPT构建真核表达载体pLRPT-avel,并经酶切和测序鉴定。结果:avenin-like基因在胚乳中特异性表达;克隆得到新型avenin-like基因,并构建了其真核胚乳特异性表达载体。结论:新型avenin-like基因的克隆及其真核表达载体的构建,为小麦品质改良提供了研究基础。

关键词：小伞山羊草 avenin-like基因基因克隆载体构建

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