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小胸鳖甲attacin基因结构与功能生物信息学分析

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湖北农业科学 2022年第24期61卷 170-176页

作者：李洁琼李小万新疆农业职业技术学院新疆昌吉831100

为了解小胸鳖甲抗菌肽基因MpAtt1和MpAtt2的结构与功能,借助生物信息学相关软件,对2个基因所编码的氨基酸理化性质、信号肽、跨膜结构、蛋白质的二级结构,蛋白质翻译后修饰、功能结构域、蛋白质的三级结构及亚细胞定位、attacin同源性... 详细信息

为了解小胸鳖甲抗菌肽基因MpAtt1和MpAtt2的结构与功能,借助生物信息学相关软件,对2个基因所编码的氨基酸理化性质、信号肽、跨膜结构、蛋白质的二级结构,蛋白质翻译后修饰、功能结构域、蛋白质的三级结构及亚细胞定位、attacin同源性进行生物信息学分析。MpAtt1和MpAtt2二级结构以无规则卷曲和β-折叠为主,存在大量的潜在磷酸化位点,三级结构具有高度保守性,具有attacin_C结构域和Gloverin结构域,属于attacin_C超家族。MpAtt1和MpAtt2蛋白为可溶性分泌蛋白,含有N-端信号肽。与鞘翅目光滑鳖甲抗菌肽attacin1序列在氨基酸水平上具有84.77%的一致性。这表明MpAtt1和MpAtt2具有较好的抗菌活性,为该基因的功能鉴定提供理论基础,以期为研究昆虫小胸鳖甲的耐寒机制提供基因来源。

关键词：小胸鳖甲抗菌肽 attacin 结构生物信息学分析

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attacin抗菌肽基因体内抗菌活性研究

中华医院感染学杂志 2007年第9期17卷 1051-1053页

作者：徐建华朱家勇金小宝许琴英张秀明庄俊华陈曲波广州中医药大学第二附属医院广东广州510120 广东药学院基础医学院广东广州510224 广东医学院广东湛江524023

目的建立attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,... 详细信息

目的建立attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,包含重组质粒的宿主菌生长受到抑制,含pET30a(+)/attacin宿主菌诱导表达后,提纯不到His-attacin融合蛋白,而含pGEX-4T-1/attacin宿主菌可获得GST-attacin融合蛋白。结论建立灵敏、简便的attacin体内抗菌活性检测方法,为下一步研究attacin的生物学功能及其应用开发奠定基础。

关键词：家蝇抗菌肽原核表达体内活性检测 attacin

多聚组氨酸标签的attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达

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广东医学 2007年第12期28卷 1910-1913页

作者：徐建华朱家勇金小宝许琴英张秀明庄俊华马艳王艳广东省中医院检验科广州510120 广东药学院基础医学院广州510006 广东医学院病原生物学教研室广东湛江524023

目的克隆家蝇幼虫抗菌肽attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+... 详细信息

目的克隆家蝇幼虫抗菌肽attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-attacin-His_6重组细胞株表达了attacin-His_6基因。结论抗菌肽attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。

关键词：抗菌肽真核表达中国仓鼠卵巢细胞 attacin

抗菌肽attacin重组杆状病毒表达载体构建

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中国公共卫生 2013年第12期29卷 1871-1872页

作者：刘晖王鑫蔡辉霞曹建平沈玉娟中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 遵义医学院寄生虫学教研室青海省地方病预防控制所

抗菌肽广泛存在于动、植物中，在生物体内发现的抗菌肽已超过2000种，昆虫抗菌肽已多达200多种，其中一些抗菌肽的基因、结构、生物学效应及作用机制已经阐明。抗菌肽抗菌谱广，对肿瘤细胞、病毒、真菌等均有杀伤作用，甚至对弓形虫等... 详细信息

抗菌肽广泛存在于动、植物中，在生物体内发现的抗菌肽已超过2000种，昆虫抗菌肽已多达200多种，其中一些抗菌肽的基因、结构、生物学效应及作用机制已经阐明。抗菌肽抗菌谱广，对肿瘤细胞、病毒、真菌等均有杀伤作用，甚至对弓形虫等原虫也有抑制作用，

关键词：家蝇抗菌肽 attacin 杆状病毒表达载体

柞蚕抗菌肽attacin-like基因的鉴定及其免疫功能研究

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柞蚕抗菌肽attacin-like基因的鉴定及其免疫功能研究

作者：李庆庆安徽农业大学

学位级别：硕士

柞蚕（Antheraeapernyi）作为鳞翅目绢丝昆虫,具有重要经济价值的同时,也是一种良好的模式生物。抗菌肽（Antimicrobialpeptides,AMPs）是昆虫体液免疫防御中的重要免疫因子。本文从柞蚕中克隆了一个抗菌肽attacin-like基因,并探讨了其... 详细信息

柞蚕（Antheraeapernyi）作为鳞翅目绢丝昆虫,具有重要经济价值的同时,也是一种良好的模式生物。抗菌肽（Antimicrobialpeptides,AMPs）是昆虫体液免疫防御中的重要免疫因子。本文从柞蚕中克隆了一个抗菌肽attacin-like基因,并探讨了其在不同病原体刺激后的表达模式及其重组蛋白体外的抑菌活性和细胞毒性。研究结果如下:1.克隆出柞蚕Ap-attacin-like基因,该基因全长cDNA为702 bp,编码233个氨基酸,该基因包含一个17个氨基酸的信号肽序列,该蛋白去除信号肽后的预测分子量为23.64 kDa。柞蚕attacin-like的二级结构包含6.87%螺旋结构、14.16%线型结构和78.97%的环型结构。其中该蛋白序列与日本柞蚕attacin序列相似度最高,相似度达到97%;2.在大肠杆菌E.coli中利用Pet-32a质粒重组表达出分子量大小为43 kDa的融合蛋白。利用Ni-NTA亲和层析纯化得到重组蛋白,并用新西兰大白兔制备了抗Ap-attacin-like多克隆抗体;3.Ap-attacin-like在五龄3天柞蚕幼虫血细胞、表皮、脂肪体、马氏管、中肠和丝腺中都有表达,且在血细胞和脂肪体中表达较高;4.对五龄3天柞蚕幼虫分别注射白僵菌（Beauveria bassiana）、大肠杆菌（Escherichia coli）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）和柞蚕核型多角体病毒（Antheraeapernyi nuclearpolyhedrosis virus,ApNPV）,然后检测被四种微生物侵染后不同时间段脂肪体中Ap-attacin-like在mRNA和蛋白水平的表达变化情况。四种微生物侵染刺激后Ap-attacin-like的mRNA和蛋白水平的表达量均有不同程度的上调;5.Ap-attacin-like重组蛋白对大肠杆菌具有明显的抑菌作用,测得的最小抑菌浓度MIC50为200 μg/mL,而对金黄色葡萄球菌没有抑菌效果;6.Ap-attacin-like重组蛋白在浓度200μg/mL时对兔血细胞有一定的毒性。

关键词：柞蚕抗菌肽 attacin 免疫反应

抗菌肽attacin在家蝇胚胎细胞的表达及生物学活性研究

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抗菌肽attacin在家蝇胚胎细胞的表达及生物学活性研究

作者：王鑫遵义医学院

学位级别：硕士

目的：以家蝇抗菌肽attacin为目标基因，用自行建立的家蝇胚胎细胞系（MDEC-07114）及含有杆状病毒穿梭载体的Bacmid构建家蝇胚胎细胞真核表达系统，对表达产物抗菌肽attacin进行抗菌、热稳定性等生物学活性研究。方法：1、全基因合成... 详细信息

目的：以家蝇抗菌肽attacin为目标基因，用自行建立的家蝇胚胎细胞系（MDEC-07114）及含有杆状病毒穿梭载体的Bacmid构建家蝇胚胎细胞真核表达系统，对表达产物抗菌肽attacin进行抗菌、热稳定性等生物学活性研究。方法：1、全基因合成家蝇抗菌肽attacin，将目的基因attacin克隆入PUC57质粒，重组质粒经双酶切后连接到pFastBacTMHTA供体质粒，制备重组杆状病毒BacmidDNA;2、重组杆状病毒Bacmid DNA转染家蝇胚胎细胞MDEC-07114，提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白，SDS-PAGE检测目的蛋白，镍柱纯化粗蛋白;3、SDS-PAGE和Western-Blot检测、鉴定蛋白表达情况;4、表达产物生物学活性检测：对革兰氏阴性菌（大肠杆菌）和革兰氏阳性菌（金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）的抑制作用;经60-100℃水浴1-30min的热稳定性;经pH5.0-10.0的酸碱作用后的耐受性。结果：1、成功构建含家蝇抗菌肽attacin基因的杆状病毒表达载体（Bacmid-pFastBacTM-attacin）;2、重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞，细胞出现直径变大、停止生长、分离等现象;3、经SDS-PAGE检测培养上清和细胞裂解物粗蛋白均含有分子量为24KD的目的蛋白;4、镍柱纯化粗蛋白后经SDS-PAGE和Western-Blot检测证实含目的蛋白;5、生物学活性检测：表达产物抗菌肽attacin可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌活性;经60-100℃水浴1-30min及pH5.0-10.0酸碱作用后抗菌肽对大肠杆菌的抑菌活性影响不明显。结论：家蝇胚胎细胞MDEC-07114可用于杆状病毒-真核表达系统表达抗菌肽attacin;表达产物抗菌肽attacin具有生物学活性。

关键词：抗菌肽 attacin 家蝇胚胎细胞表达生物学活性

3种微生物诱导的家蚕attacin基因异常表达形式的研究

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安徽农业科学 2009年第6期37卷 2407-2408,2427页

作者：孔卫青杨金宏安康学院陕西省蚕桑重点实验室陕西安康725000

[目的]研究家蚕抗菌肽attacin基因在不同诱导源诱导时的表达情况。[方法]应用3种外源微生物BmNPV、JM109以及农杆菌LBA4404对家蚕进行诱导,半定量PCR检测attacin基因在诱导后的家蚕血液和脂肪体的表达情况,对诱导表达产物进行克隆测序... 详细信息

[目的]研究家蚕抗菌肽attacin基因在不同诱导源诱导时的表达情况。[方法]应用3种外源微生物BmNPV、JM109以及农杆菌LBA4404对家蚕进行诱导,半定量PCR检测attacin基因在诱导后的家蚕血液和脂肪体的表达情况,对诱导表达产物进行克隆测序及进一步的分析。[结果]attacin基因在所有诱导后的脂肪体中均出现1条800 bp左右的特异表达条带,克隆测序(GenBank登录号:FJ373020)后发现其产生由正常表达形式的2个内含子未被剪接引起,且原序列第1内含子5′端的1个TGA终止密码子使得加长的特异表达序列翻译氨基酸时在此处终止,最终导致了attacin C末端结构的缺失。[结论]attacin基因有2种剪接形式,该研究对探明atta-cin基因在家蚕免疫中的作用具有参考价值。

关键词：家蚕 attacin 诱导表达剪接免疫

3种微生物诱导的家蚕attacin基因异常表达形式的研究(英文)

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Agricultural Science & Technology 2008年第6期9卷 142-145页

作者：孔卫青杨金宏安康学院陕西省蚕桑重点实验室陕西安康725000

[Objective] The aim of this research was to study the expression of silkworm attacin gene induced by some different microorganisms.[Method] Three kinds of microorganism,BmNPV,JM109 and Agrobacterium LBA4404,were ingested to silkworm and the expression profile of attacin gene in hemocyte and fat body was detected by semi-quantitative PCR.And subsequently,the PCR products were cloned and sequenced for further analysis.[Result] A specific band,about 800 bp,appeared in fat body of all induced silkworms.As indicated by the results of cloning and sequencing(GenBank accession number:FJ373019),the band was produced because the 2 introns existing in normal expression form were not spliced.Furthermore,when the extended expression sequence was translated into amino acids,the translation stopped earlier by the stop codon TGA at the 5' end of the first intron of the original sequence,leading the loss of attacin C terminus.[Conclusion] There were two splicesomes of attacin gene,which had reference value to study the role of the attacin gene in silkworm immunity.

关键词： Silkworm attacin Induced expression Splicing Immunity

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家蝇抗菌肽基因的表达模式研究

中国科学（C辑） 2009年第7期39卷 685-691页

作者：王艳金小宝朱家勇曾爱华褚夫江杨小蓉马艳广东药学院病原生物学研究所广州510006 广东药学院药科学院广州510006

本研究曾报道过家蝇生长过程中的3个基因attacin,defensin,cecropin的转录体.通过运用实时定量PCR定量分析家蝇不同发育阶段和诱导后不同时间点的三龄幼虫mRNA水平,结果显示3个基因在三龄幼虫和成虫期转录水平较高.同时分析发现,在诱导... 详细信息

本研究曾报道过家蝇生长过程中的3个基因attacin,defensin,cecropin的转录体.通过运用实时定量PCR定量分析家蝇不同发育阶段和诱导后不同时间点的三龄幼虫mRNA水平,结果显示3个基因在三龄幼虫和成虫期转录水平较高.同时分析发现,在诱导后mRNA水平显著增加,3个抗菌肽基因在敏感菌诱导后转录水平相对诱导前分别有cecropin805倍、attacin1009倍、defensin2500倍的增强.结果提示,家蝇抗菌肽基因的转录在不同发育阶段和诱导后的不同时期是有差异的.

关键词：家蝇表达模式 attacin defensin cecropin